一种普那霉素iia单组份的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于工业微生物技术领域，涉及药品原料的制备方法，具体地说是涉及一 种普那霉素 IIA单组份的制备方法。
【背景技术】
[0002] 普那霉素（pristinamycin)属链阳性菌类抗生素，主要由约30%的普那霉素 PIA 和约70%的普那霉素 PIIA两类化合物组成。普那霉素对各种感染均有很好的疗效作用，包 括传染性肺炎、医院获得性肺炎、皮肤和软组织感染、脓毒血症、菌血症和心内膜炎等。美国 FDA的专家小组推荐普那霉素可用于治疗医院获得性肺炎，皮肤、软组织感染和万古霉素耐 药屎肠球菌（VREF)的急性感染，很多是用在急症时。普那霉素号称"人类对付致病菌的最 后一道屏障"，是继万古霉素、替考拉宁之后的又一个抗多重耐药菌的抗生素，而且它还具 有较长的抗生素后效应、耐药性低和不良反应少等优点。
[0003] 目前关于普那霉素 IIA单组份的制备方法未见报道。文献和专利中报道过的普 那霉素的提取方法主要包括有机溶剂萃取、双水相萃取和高速逆流色谱法等。美国专利 US3154475中采用溶剂萃取方法得到普那霉素粗品，再进行粉末活性炭层析得到纯品，收率 低，溶剂用量大，不适合工业化生产。双水相萃取和高速逆流色谱法还停留在实验室研宄阶 段。中国专利CN102558302A中，采用大孔树脂吸附，纳滤，溶媒结晶等步骤得到黄色普那霉 素产品，该工艺成本较高，色素去除不理想。
[0004] 工业化生产的普那霉素经纯化后还含有20%的杂质，无法满足一些国家在药品注 册方面的法规要求，再加上普那霉素 IIA的不稳定性，增加了其纯化难度，从而致使多年来 的研宄都无法克服纯化步骤这个瓶颈，产品难以工业化生产。
[0005] 本发明所得普那霉素 IIA单组份纯度高，与普那霉素 IA单组份协同作用后，表现 出更强的抗菌活性，其生物效价达到lOOOOU/mg以上，生物活性比对照药高近30%。该工艺 操作简单，产品纯度和收率高，适于工业化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种高纯度普那霉素 IIA单组份的制备方法，该方法工艺流 程短、产品质量可控、易操作，适于工业化生产。
[0007] 为实现本发明目的，本发明提供了一种普那霉素 IIA单组份的制备方法，该方法 包括以下步骤： a、 将普那霉素 IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液； b、 将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱， 收集纯度大于98. 5%的普那霉素 IIA洗脱液； c、 将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素 IIA单组份。
[0008] 本发明步骤（a)所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇中任意一种，用量为每克 普那霉素 IIA粗品用3~10mL有机溶剂，优选为DMF。
[0009] 本发明步骤（b)所述反相层析填料为C18。
[0010] 本发明步骤（b)所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意一种。
[0011] 本发明步骤（b)所述盐水为1^#04或NaH2POd^水溶液，浓度为每1000 mL水中含 0· 2~1.0 g KH2PO4或 NaH2P04,即浓度为 0· 2~1. 0%。（g/mL)，优选 0· 4~0· 6%〇。
[0012] 本发明步骤（b)所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂所占体积百分比为 43%~47%，优选 45%。
[0013] 本发明步骤（c)所述浓缩是在40~50°C下减压浓缩。
[0014] 本发明步骤（c)所述干燥是将湿粉置于40~45°C，真空度彡0.0 SMPa条件下，真空 干燥5~12h。
[0015] 本发明优势：1、采用二元液相分离系统，使用反相填料层析，只一步层析就可以得 到纯度大于98. 5%的普那霉素 IIA单组份，制备收率大于75%。2、所述方法工艺流程短，克 服了普那霉素 IIA易降解的缺点，且具有易操作、可控性强的优点，适于工业化生产。
【附图说明】
[0016] 图1普那霉素 IIA粗品HPLC图谱。
[0017] 图2普那霉素 IIA精制品HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0018] 下面用具体实施例来进一步说明本发明的内容，但并不以任何方式意味着对本发 明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
[0019] 本发明所使用的普那霉素 IIA粗品（含量65. 8%)，华北制药集团新药研宄开发有 限责任公司生产；对照药(批号14N0400,效价8000u/mg)，PY0STACINE公司生产。反相填料 C18,苏州纳微生物科技有限公司；二元液相分离系统，汉邦科技有限责任公司；高效液相 色谱仪（SPD-M20A型紫外检测器，LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CTO-IOAS柱温箱)，岛 津公司；甲醇、乙醇和乙腈为制备级；其他试剂为分析纯。
[0020] 实施例1 将上述普那霉素 IIA粗品（HPLC图谱见附图1)10. 0g，用50mL乙腈溶解，得到上样液。
[0021] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用43%乙腈-盐水 (1. 0%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0022] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于40°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中， 真空干燥5h，得到普那霉素 IIA精制品（HPLC图谱见附图2) 5. 0g，纯度99. 2%，制备收率 75. 4%〇
[0023] 实施例2 将上述普那霉素 IIA粗品50. 0g，用500mL乙醇溶解，得到上样液。
[0024] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙醇-盐水 (0· 2%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0025] 将收集的洗脱液，45°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥8h，得到普那霉素 IIA精制品25