一种榧黄素的制备方法及抗肿瘤应用
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种榧黄素的制备 方法及抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 榧黄素（Kayaflavone)，分子式为C33H24010,分子量为580. 55,结构式为：
栖黄素来源于罗汉松科（Podocarpaceae)柳叶罗汉松Podocarpussalicifolius的 叶。榧黄素具有抗肿瘤促进作用，抑制由TPA诱导的EBV-EA活性，其作用高于已知的抗肿 瘤促进剂_维生素A酸和甘莖次酸；具有抗病毒作用，抑制EB病毒基因在Raji细胞中的表 达。
[0003] 通过文献检索，现有异黄酮类活性物质的提取大都是采用硅胶、凝胶色谱法进行 分乙醇提回流提取，硅胶、凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂，制备量较小，样品得 率低，不适合榧黄素的工业化制备。
【发明内容】
[0004] 为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种榧黄素的制备方法 及抗肿瘤应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 一种榧黄素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取柳叶罗汉松叶原料粉碎，加入 5-10倍量50%-99%甲醇溶液，超声提取2-3次，提取液缩后加入大孔树脂柱中吸附，先用 3-9倍量10%-50%甲醇溶液洗脱，再用5-10倍60%-90%甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph3-5,加入乙酸乙酯充分搅拌，收集乙酸乙酯层，浓缩所得固体用高速逆流色谱仪分离，收 集流分减压干燥即得。
[0006] 所述的大孔树脂可选HZ816、HPD100、AB-8和DlOl中的一种。
[0007] 所述的高速逆流色谱仪分离条件为：取石氯仿、甲醇、水，按3-7:2-5:1-3混合，取 上相做固定相、下相为流动相，主机转速7〇〇 -l〇〇〇rpm，流速为l-3ml/min。
[0008] 所述制备的榧黄素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸 盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
[0009] 采用本法制备榧黄素，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加 肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。
[0010] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1 : 榧黄素的制备 取柳叶罗汉松叶粉碎，称20kg，用8倍90%甲醇溶液超声提取30分钟，提取3次，提取液 减压浓缩后加入HZ816大孔树脂柱中吸附，用5倍柱体积50%甲醇溶液洗脱，再用8倍柱体 积85%甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph4,加入乙酸乙酯充分搅拌，收集乙酸乙酯层，得固 体粗提物。取氯仿、甲醇、水，按3:2:1混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱管做固 定相，开转主机，转速800rpm，同时泵入下相做流定相，建立动态平衡后，流速调节为2ml/ min，用流动相溶解浸膏，由进样阀进样，蒸发光散射检测器在线监测，收集目标成分，连续 制备，流分回收试剂，得榧黄素I. 2g，经HPLC检测，含量99. 5%。
[0012] 实施例2: 榧黄素的抗肿瘤应用 1、材料 动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。
[0013] 细胞株：Sarc〇ma180腹水型瘤株（S180)，由中国科学院上海药物研宄所提供。
[0014] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S18tl瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生 理盐水对照组（NS组)、阳性对照组、榧黄素低剂量组（lmg/kg)、中剂量组（2mg/kg)、高剂量 组（4mg/kg)。接种24h后榧黄素给药组灌胃给药，连续7,阳性对照组试验期间腹腔注射2 次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24h后断 颈处死，称重，并计算抑瘤率。
[0015] 3、结果 本发明植物提取组合物对小鼠S18tl皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为 68. 32-74. 26%，结果见表 1。
[0016] 抑瘤率（％)=( 1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）X% 表1本发明植物提取组合物对S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10,i±S)
【主权项】
1. 一种榧黄素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取柳叶罗汉松叶原料粉碎，加 入5-10倍量50%-99%甲醇溶液，超声提取2-3次，提取液缩后加入大孔树脂柱中吸附，先 用3-9倍量10%-50%甲醇溶液洗脱，再用5-10倍60%-90%甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节 ph3-5,加入乙酸乙酯充分搅拌，收集乙酸乙酯层，浓缩所得固体用高速逆流色谱仪分离，收 集流分减压干燥即得。2. 根据权利要求1所述的榧黄素的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂可选HZ816、 HPDKKKAB-8 和DlOl中的一种。3. 根据权利要求1所述的榧黄素的制备方法，其特征在于所述的高速逆流色谱仪分离 条件为：取石氯仿、甲醇、水，按3-7:2-5:1-3混合，取上相做固定相、下相为流动相，主机转 速 700-1000rpm，流速为l_3ml/min。4. 根据权利要求1~3所述方法制备的榧黄素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。5. 根据权利要求4所述的榧黄素，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸 盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
【专利摘要】本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种榧黄素的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤：取柳叶罗汉松叶粉碎，加入5-10倍量50%-99%甲醇溶液，超声提取2-3次，提取液缩后加入大孔树脂柱中吸附，先用3-9倍量10%-50%甲醇溶液洗脱，再用5-10倍60%-90%甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph3-5，加入乙酸乙酯充分搅拌，收集乙酸乙酯层，浓缩所得固体用高速逆流色谱仪分离，收集流分减压干燥即得。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度榧黄素的生产。榧黄素具有抗肿瘤促进作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。
【IPC分类】C07D311/40, A61P35/00, C07D311/30, A61K31/352
【公开号】CN104926770
【申请号】CN201510263697
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月22日