到微藻液；
3)将上述微藻液进行沉淀处理，排除上清液；
4)将排除上清液的成熟细胞收集后放置在胶体磨进行一级磨碎；
5)将一级磨碎后的细胞传送至均质机中进行破壁处理，得到破壁的雨生红球藻，破壁率为92.1%。
[0019]将破壁后的雨生红球藻用乙醇在45°C下搅拌提取，过滤，滤液浓缩，回收溶剂，得到虾青素，虾青素的提取率为96.1%。
[0020]实施例二
一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于按如下步骤依次进行:
1)在无菌环境中，取微藻样品加入到NBBM培养基中培养22天，得到藻液；取上述藻液，按体积百分含量为13%的接种量接种于NBBM培养基中，在温度为23°C光照下的密闭培养箱中培养11天，得到藻液A ;
2)将得到的藻液A以无菌水按ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—4倍数进行稀释，将稀释后的藻液均匀涂布于液体培养基B(按重量份数包括0.8份硝酸钠、0.05份硫酸镁、0.05份磷酸氢二钾、0.025份氯化钙、0.035份碳酸钠、0.006份柠檬酸、0.006份柠檬酸铁铵、0.0007份乙二胺四乙酸、0.007份微量元素、25份葡萄糖)上，在温度为25°C光照下的密闭培养箱中继续培养9天，得到微藻液；
3)将上述微藻液进行沉淀处理，排除上清液；
4)将排除上清液的成熟细胞收集后放置在胶体磨进行一级磨碎；
5)将一级磨碎后的细胞传送至均质机中进行破壁处理，得到破壁的雨生红球藻，破壁率为92.6%ο
[0021]将破壁后的雨生红球藻用乙酸乙酯在50°C下搅拌提取，过滤，滤液浓缩，回收溶齐U，得到虾青素，虾青素的提取率为95.6%。
[0022]实施例三
一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于按如下步骤依次进行:
1)在无菌环境中，取微藻样品加入到NBBM培养基中培养25天，得到藻液；取上述藻液，按体积百分含量为15%的接种量接种于NBBM培养基中，在温度为24°C光照下的密闭培养箱中培养13天，得到藻液A ;
2)将得到的藻液A以无菌水按10'10_2、10_3、10_4倍数进行稀释，将稀释后的藻液均匀涂布于液体培养基B (按重量份数包括1.3份硝酸钠、0.08份硫酸镁、0.07份磷酸氢二钾、0.045份氯化钙、0.05份碳酸钠、0.0092份柠檬酸、0.0092份柠檬酸铁铵、0.0009份乙二胺四乙酸、0.009份微量元素、50份葡萄糖)上，在温度为25°C光照下的密闭培养箱中继续培养8-11天，得到微藻液；
3)将上述微藻液进行沉淀处理，排除上清液；
4)将排除上清液的成熟细胞收集后放置在胶体磨进行一级磨碎；
5)将一级磨碎后的细胞传送至均质机中进行破壁处理，得到破壁的雨生红球藻，破壁率为93%。
[0023]将破壁后的雨生红球藻用丙酮在55°C下搅拌提取，过滤，滤液浓缩，回收溶剂，得到虾青素，虾青素的提取率为95.2%。 最后所应说明的是:以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解:依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
【主权项】
1.一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于按如下步骤依次进行: 1)在无菌环境中，取微藻样品加入到培养基A中培养18-25天，得到藻液；取上述藻液，按体积百分含量为11%_15%的接种量接种于培养基A中，在温度为22°C _24°C光照下的密闭培养箱中培养9-13天，得到藻液A ； 2)将得到的藻液A以无菌水按一定倍数进行稀释，将稀释后的藻液均匀涂布于液体培养基B上，在温度为25°C光照下的密闭培养箱中继续培养8-11天，得到微藻液； 3)将上述微藻液进行沉淀处理，排除上清液； 4)将排除上清液的成熟细胞收集后放置在胶体磨进行一级磨碎； 5)将一级磨碎后的细胞传送至均质机中进行破壁处理，得到破壁的雨生红球藻。2.根据权利要求1所述的一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于:将破壁后的雨生红球藻用有机溶剂在一定温度下搅拌提取，过滤，滤液浓缩，回收溶剂，得到虾青素。3.根据权利要求2所述的一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于:步骤I)中所述的培养基A为NBBM培养基。4.根据权利要求3所述的一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于:步骤2)中所述的液体培养基B按重量份数包括0.2-1.3份硝酸钠、0.02-0.08份硫酸镁、0.03-0.07份磷酸氢二钾、0.01-0.045份氯化钙、0.02-0.05份碳酸钠、0.004-0.0092份柠檬酸、0.004-0.0092份柠檬酸铁铵、0.0006-0.0009份乙二胺四乙酸、0.006-0.009份微量元素、6-50份葡萄糖。5.根据权利要求4所述的一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于:步骤2)中所述的一定倍数是 ιο'ιο'ιο'ιο—4。6.根据权利要求2或5所述的一种雨生红球藻的破壁方法，其特征在于:所述的有机溶剂为乙醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种或几种。7.根据权利要求6所述的一种雨生红球藻的破壁方法,其特征在于:所述的一定温度为 45-55 °C。
【专利摘要】一种雨生红球藻的破壁方法，属于微藻生物技术领域，具体涉及一种雨生红球藻的破壁方法。其特征在于1）在无菌环境中，取微藻样品加入到培养基A中培养，得到藻液；将藻液接种于培养基A中进行培养，得到藻液A；2）将藻液A以无菌水进行稀释，涂布于液体培养基B上，在光照下的密闭培养箱中继续培养，得到微藻液；3）进行沉淀处理；4）收集细胞在胶体磨内进行磨碎；5）将一级磨碎后的细胞进行破壁处理。本发明的有益效果：通过胶体磨磨细胞，使雨生红球藻细胞壁变薄甚至细胞破碎，导致整个藻液粒径均匀，降低均质机破壁压力，安全隐患得到降低，提高破壁率。
【IPC分类】C12N1/06, C12R1/89
【公开号】CN104946533
【申请号】CN201410122166
【发明人】黄妍
【申请人】黄妍
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2014年3月30日