一种从雨生红球藻中提取分离虾青素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及邮青素提取领域，特别设及一种从雨生红球藻中提取分离邮青素的方 法。
【背景技术】
[0002] 邮青素的来源主要有两种，一种是化学合成，另一种是生物提取，生物提取的原料 主要有雨生红球藻、邮蟹的下脚料、红发夫酵母发酵物等。生物提取的方法很多，如超临界 C〇2萃取法、化学溶剂提取法等，通过生物提取得到的粗提物，再进行皂化、分离纯化。目前 分离纯化的方法主要为柱层析方法，柱层析的方法中根据固定相的不同，分为正相柱层析 法与反相柱层析法，正相柱层析主要W硅胶作为固定相的填料，采用二氯甲烧-正己烧作 为流动相，进行柱层析；反相柱层析主要W键合硅胶Cis作为填料，采用甲醇-水作为流动 相，进行柱层析。经过上述方法提取可得到纯度约为80-90%的邮青素。
[0003] 但是，由于现有提取方法的破壁、提取和分离工艺的限制，其制备得到的邮青素的 得率低（< 1%)、纯度低90%)、成本高。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题在于，提供一种从雨生红球藻中提取分离邮青素的方 法，其制备的邮青素得率高、纯度高、成本低。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从雨生红球藻中提取分离邮青素的方 法，包括： (1) 取雨生红球藻，加入雨生红球藻量15-75倍的盐酸，在35-95Γ浸泡3-15min破壁， 过滤，取药渣； (2) 加入雨生红球藻量15-75倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，在15-65Γ提取2-4次后， 过滤，合并滤液，滤液加入K0H醇溶液，在3-15Γ皂化5-15min后，用盐酸调PH值至中性，浓 缩至干； (3) 用二氯甲烧萃取邮青素，W硅胶作为固定相，二氯甲烧、乙醇作为流动相，进行梯度 洗脱，梯度浓度由100:0到90:10,分离得到邮青素成品。
[0006] 作为上述方案的改进，所述方法包括： (1) 取雨生红球藻，加入雨生红球藻量45-55倍的盐酸，在65-75Γ浸泡8-12min破壁， 过滤，取药渣； (2) 加入雨生红球藻量45-55倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，在35-45Γ提取2-4次后， 过滤，合并滤液，滤液加入K0H醇溶液，在8-12Γ皂化5-15min后，用盐酸调PH值至中性，浓 缩至干； (3) 用二氯甲烧萃取邮青素，W硅胶作为固定相，二氯甲烧、乙醇作为流动相，进行梯度 洗脱，梯度浓度由100:0到90:10,分离得到邮青素成品。
[0007] 作为上述方案的改进，所述方法包括： (1) 取雨生红球藻，加入雨生红球藻量50倍的盐酸，在70°C浸泡lOmin破壁，过滤，取 药渣； (2) 加入雨生红球藻量50倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，在40°C提取3次后，过滤，合 并滤液，滤液加入4%K0H醇溶液，在10°C皂化lOmin后，用盐酸调PH值至中性，浓缩至干； (3) 用二氯甲烧萃取邮青素，W硅胶作为固定相，二氯甲烧、乙醇作为流动相，进行梯度 洗脱，梯度浓度由100:0到92:8,分离得到邮青素成品。
[0008] 作为上述方案的改进，在步骤（2)中，所述二氯甲烧、乙醇的混合液的二氯甲烧与 乙醇的比例为1-3:0. 5-1。
[0009] 作为上述方案的改进，在步骤（2)中，所述二氯甲烧、乙醇的混合液的二氯甲烧与 乙醇的比例为2:1。
[0010] 作为上述方案的改进，在步骤（3)中，梯度浓度由100:0到92:8。
[0011] 作为上述方案的改进，所述盐酸选用浓度为4mol/L的盐酸。
[0012] 作为上述方案的改进，所述邮青素成品的纯度>98. 5%。
[0013] 实施本发明具有如下有益效果： 本发明提供了（ 1)高效的破壁方法与工艺参数：加入雨生红球藻量50倍的4N盐酸，在 70°C浸泡lOmin进行破壁；（2)高效的提取方法与工艺参数：加入雨生红球藻量50倍的二 氯甲烧-乙醇的混合液(二氯甲烧：乙醇=2:1 )，在40°C提取3次；（3)高效的分离方法与工 艺参数硅胶作为固定相，二氯甲烧-乙醇（100:0 - 92:8)作为流动相，进行梯度洗脱。 通过本方法从雨生红球藻中制备的邮青素得率高，得率可W达到1. 8%，纯度高，纯度可达到 98. 5%，远远超过现有文献报道的方法制备的得率与纯度。而且，本发明提取分离方法简单， 反应条件要求少，成本低，可大规模推广使用。
【具体实施方式】
[0014] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明作进一步地详细 描述。
[0015] 本发明提供一种从雨生红球藻中提取分离邮青素的方法，包括： (1)取雨生红球藻，加入雨生红球藻量15-75倍的盐酸，在35-95Γ浸泡3-15min破壁， 过滤，取药渣。
[0016] 优选的，取雨生红球藻，加入雨生红球藻量45-55倍的盐酸，在65-75 °C浸泡 8-12min破壁，过滤，取药渣。所述盐酸选用浓度为3-5mol/L的盐酸。
[0017] 更佳的，取雨生红球藻，加入雨生红球藻量50倍的盐酸，在70°C浸泡lOmin破壁， 过滤，取药渣。所述盐酸选用浓度为4mol/L的盐酸。
[0018] 需要说明的是，加入雨生红球藻量15-75倍的盐酸的含义是：加入盐酸，且加入盐 酸的用量是加入雨生红球藻的15-75倍。
[0019] 还需要说明的是，雨生红球藻又被叫做湖生红球藻或湖生血球藻，是一种普遍存 在的绿藻，属于团藻目，红球藻科。
[0020] (2)加入雨生红球藻量15-75倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，在15-65Γ提取2-4 次后，过滤，合并滤液，滤液加入K0H醇溶液，在3-15Γ皂化5-15min后，用盐酸调PH值至中 性，浓缩至干。
[0021] 优选的，加入雨生红球藻量45-55倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，所述二氯甲烧、 乙醇的混合液的二氯甲烧与乙醇的比例为1-3:0. 5-1，在35-45Γ提取2-4次后，过滤，合并 滤液，滤液加入K0H醇溶液，在8-12Γ皂化5-15min后，用盐酸调PH值至中性，浓缩至干。
[0022] 更佳的，加入雨生红球藻量50倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，所述二氯甲烧、乙醇 的混合液的二氯甲烧与乙醇的比例为2:1，在40°C提取3次后，过滤，合并滤液，滤液加入 4%K0H醇溶液，在10°C皂化lOmin后，用盐酸调PH值至中性，浓缩至干。
[0023] (3)用二氯甲烧萃取邮青素，W硅胶作为固定相，二氯甲烧、乙醇作为流动相，进行 梯度洗脱，梯度浓度由100:0到90:10,分离得到邮青素成品。
[0024] 优选的，用二氯甲烧萃取邮青素，W硅胶作为固定相，二氯甲烧、乙醇作为流动相， 进行梯度洗脱，梯度浓度由100:0到90:8,分离得到邮青素成品。更佳的，在步骤（3)中，梯 度浓度由100:0到92:8。
[00巧]通过本方法从雨生红球藻中制备的邮青素得率高，得率可W达到1. 8%，纯度高，纯 度可达到98. 5%。
[00%] 下面W具体实施例进一步阐述本发明 实施例1 (1) 取雨生红球藻，加入雨生红球藻量15倍、浓度为4mol/L的盐酸，在35°C浸泡3min 破壁，过滤，取药渣； (2) 加入雨生红球藻量15倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，二氯甲烧：乙醇=1:1，在15°C 提取2次后，过滤，合并滤液，滤液加入4%K0H醇溶液，在：3 °C皂化5min后，用盐酸调PH值至 中性，浓缩至干； (3) 用二氯甲烧萃取邮青素，W硅胶作为固定相，二氯甲烧、乙醇作为流动相，进行梯度 洗脱，梯度浓度由100:0到90:10,分离得到邮青素成品。
[0027]实施例2 (1) 取雨生红球藻，加入雨生红球藻量45倍、浓度为4mol/L的盐酸，在65°C浸泡8min 破壁，过滤，取药渣； (2) 加入雨生红球藻量45倍的二氯甲烧、乙醇的混合液，