NA的影响
[0081] 如图7所示(为还原剂对1，8-萘啶双核铜⑴配合物切割pUC19质粒DNA的琼脂 糖凝胶电泳实验结果图)，泳道1是只加入DNA，泳道2是DNA+本发明的配合物（1 μ Μ)，泳 道3、4、5是DNA+本发明的配合物（1 μ Μ)再分别+抗坏血酸（ImM)、过氧化氢（ImM)或巯基 丙酸（ImM)。从结果可以看出，切割效果没有差别，本发明的配合物可直接发生氧化反应，这 说明本发明的配合物是通过铜（I)失去电子，将电子最终传递给DNA，从而切割达到DNA的 目的。这与现有的"铜（II)复合物要先被还原剂还原成铜（I)，然后铜（I)才能再发生氧 化反应，失去电子，将电子传递给氧化剂再传递给水生成羟基自由基或者活性氧，从而破坏 DNA的3, 5-磷酸二酯键"不同。
[0082] 4、活性氧类抑制剂对本发明的配合物切割DNA的影响
[0083] 如图8所示(为活性氧类抑制剂对1，8-萘啶双核铜⑴配合物切割DNA的琼脂糖 凝胶电泳实验结果图)，泳道1是只加入DNA，泳道2是DNA+本发明的配合物，泳道3、4、5是 DNA+本发明的配合物（1 μ Μ)，再分别+DMSO (lmM，羟基自由基清除剂），NaN3 (lmM，单线态氧 清除剂）和KI(lmM，过氧化物清除剂）。从结果可以看出，切割效果没有差别。说明本发明 的配合物切割DNA不是通过产生活性氧类物质切割DNA的，可能是通过将水作为电子中间 传递体，铜（I)复合物直接将电子给水，再由水传递给DNA，氧化DNA，从而切断DNA。
[0084] 5、氧气对本发明的配合物切割DNA的影响
[0085] 如图9所示（为氧气对1，8-萘啶双核铜（I)配合物切割DNA的琼脂糖凝胶电泳 实验结果图)，泳道1是只加入DNA，泳道2是氩气氛围、DNA+2 μ M本发明的配合物，泳道3 是空气氛围、DNA+2 μ M本发明的配合物。从结果可以看出，在通入氩气的环境中，本发明的 配合物切割DNA的活性比暴露于空气中的切割活性稍微高一些，说明本发明的配合物切割 DNA不仅可以在完全无氧的环境下进行，而且其切割活性还有些许提高，这使得体内环境下 进行DNA切割成为可能，使其成为药物的可能性增大。
[0086] 6、氧气对本发明的配合物切割DNA的影响
[0087] 如图10所示(为静电相互作用对1，8-萘啶双核铜⑴配合物切割DNA的琼脂糖 凝胶电泳实验结果图)，泳道1是只加入DNA，泳道2-6为DNA+1. 5 μ M本发明的配合物，再分 别+1,3, 5, 10, 20mM的NaCl。从结果可以看出，随着NaCl的浓度增大，水中的静电相互作用 会越来越强，而与之对应的是本发明的配合物对DNA的切割活性应该越好。当NaCl的浓度 为20mM时，超螺旋结构基本消失，主要存在形式变为开环状态。说明静电相互作用会影响 本发明的配合物对DNA的切割。静电相互作用越强，本发明的配合物直接将电子给水再由 水给DNA的作用就会加强，本发明的配合物对DNA的切割活性越好。
[0088] 7、检测本发明的配合物与DNA相互作用的位置
[0089] 大部分DNA是B-型结构，B-型结构的特点是两条双螺旋之间有一大一小两个不 对称的沟，要想检测本发明的配合物与DNA相互作用的具体位置就要引入竞争性物质，看 加入这些竞争性物质后是否影响本发明的配合物与DNA的相互作用，或者说是否影响本发 明的配合物对DNA的切割作用，这样才能知道本发明的配合物是结合到DNA的大沟、小沟还 是边缘部分。
[0090] 采用两种物质：一是甲基绿，它与DNA的大沟的亲和力很高，作用是结合DNA的大 沟；另一个是DAPI，它与DNA的小沟的亲和力很高，作用是结合DNA的小沟。如果本发明的 配合物是结合到DNA的大沟或小沟，那一旦加入甲基绿或DAPI，本发明的配合物对DNA的切 割作用就一定会受到影响。
[0091] 图11为检测1，8-萘啶双核铜（I)配合物与DNA相互作用的位置的结果图。泳道 1是只加入DNA，泳道2为DNA+1. 5 μ M本发明的配合物，泳道3为DNA+1. 5 μ M本发明的配 合物+5 μ M甲基绿，泳道4为DNA+1. 5 μ M本发明的配合物，泳道5为DNA+1. 5 μ M本发明的 配合物+5μΜ DAPI。从结果可以看出，本发明的配合物对DNA的切割作用并没有因为甲基 绿或DAPI的加入而受到影响，说明本发明的配合物是通过静电相互作用结合在DNA边缘的 糖部分，直接接触3, 5-磷酸二酯键，从而切割3, 5-磷酸二酯键。
[0092] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对 本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可 以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发 明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
【主权项】
1. 1，8-萘啶双核铜（I)配合物，其特征在于，分子式为：2. 如权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，包括以 下步骤： 1) 合成2-醛基-1，8-萘啶 将2-甲基-1，8-萘啶与二氧化硒溶于1，4-二氧六环中，回流反应，薄层色谱监测反应 进程，反应完成后将产物纯化，得到2-醛基-1，8-萘啶；其中，2-甲基-1，8-萘啶与二氧化 硒的摩尔比为1 :1-2 ; 2) 合成配体 将2-醛基-1，8-萘啶与邻氨基对甲苯酚溶于甲醇中，回流反应至溶液析出黄色沉淀， 得到配体；其中，2-醛基-1，8-萘啶与邻氨基对甲苯酚的摩尔比为1 :0. 7-1. 5 ; 3) 合成1，8-萘啶双核铜（I)配合物 将配体溶于甲醇中，得到A ; 取CuCl2 · 2H20溶于甲醇中，得到B ; 将B逐滴加入到A中，搅拌反应12-60小时，得到沉淀，为1，8-萘啶双核铜（I)配合物； 其中，配体和CuCl2 · 2H20的摩尔比为1 :0· 92-2. 78。3. 根据权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，步骤 1)在氮气氛围中反应；优选地，步骤1)中，回流8-16小时；优选地，步骤1)中，回流温度为 80°C -130°C。4. 根据权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，步骤 1) 中，将产物纯化包括：将产物干燥，之后过硅胶柱或氧化铝柱纯化，再用二氯甲烷、石油醚 或乙酸乙酯过柱，得到2-醛基-1，8-萘啶。5. 根据权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，步骤 2) 中，可向溶液中滴入冰醋酸作为催化剂；优选地，步骤2)中，回流3-9小时；优选地，步骤 2)中，回流温度为40°C -60°C。6. 根据权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，步骤 2) 中，得到的黄色沉淀经过滤、用冰甲醇或冰乙醇洗涤、烘干，得到配体。7. 根据权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，步骤 3) 中，配体和CuCl2 · 2H20的摩尔比为1 :1。8. 根据权利要求1所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的制备方法，其特征在于，步骤 3)中，得到的沉淀经过滤、用冰甲醇或冰乙醇洗涤、干燥，得到1，8-萘啶双核铜（I)配合物。9. 如权利要求1-8任一所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的应用，该1，8-萘啶双核 铜（I)配合物可用来切割DNA。10.根据权利要求9所述的1，8-萘啶双核铜（I)配合物的应用，当所述1，8-萘啶双核 铜（I)配合物用来切割DNA时是按照下列步骤进行：将IOOng pUC19质粒DNA和本发明的 配合物混合于IOmM磷酸（PBS)缓冲液中，pH=7. 4, 37°C反应，完成切割。
【专利摘要】本发明公开1,8-萘啶双核铜(I)配合物，分子式为：该配合物是目前为止发现的第一个具有切割DNA功能的萘啶双核铜配合物，可以在不需氧气、还原剂参与的情况下通过水解机制裂解DNA，使其在药物研发领域作为新的抗肿瘤药物成为可能。本发明还公开了1,8-萘啶双核铜(I)配合物的制备方法。本发明还公开了1,8-萘啶双核铜(I)配合物的应用，其可用来切割DNA。
【IPC分类】C07F1/08, A61P35/00, C12Q1/68
【公开号】CN104974181
【申请号】CN201410140191
【发明人】傅文甫, 赵春超
【申请人】中国科学院理化技术研究所
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2014年4月9日