心、利用溶解度差异，或通过任何其它纯化蛋白质的标准技 术。在许多实施方案中，抗体从细胞分泌到培养基中，通过收集培养基并进行纯化得到抗 体。
[0051] 本发明的有益效果是：本发明所提供的抗Blys单克隆抗体的抑制Blys与受体结 合活性（见实施例2)，与现有技术产物Belimumab的活性相似，但是所述的抗Blys单克隆 抗体与BLYS的亲和力优于现有技术产物Belimumab，是Belimumab的2倍，所述的抗Blys 单克隆抗体抑制Blys刺激的鼠脾细胞增殖的活性优于现有技术产物Belimumab，本发明的 单克隆抗体 NMB04 的 IC50 值为 0. 0062 μ g/ml，Belimumab 的 IC50 值为 0. 0082 μ g/ml，表 明本发明对Blys有更强的抑制作用。另外，本发明所提供的抗Blys单克隆抗体能显著抑 制小鼠和食蟹猴体内B细胞的增殖。
【附图说明】
[0052] 图1为scfv的抗体库的扩增方案；
[0053] 图2为亲和力成熟克隆的噬菌体上清竞争性抑制Blys与頂9细胞表面受体结合 的活性（其中，图2A为CDR-Ll-LIB的筛选结果；图2B为CDR-L2-LIB的筛选结果；图2C为 CDR-H2-LIB的筛选结果）；
[0054] 图3为单克隆抗体与重组人BLYS的直接结合活性（所筛选的单克隆抗体NMBOl 的 EC50 = 0· 02919nM，NMB04 的 EC50 = 0· 02291nM);
[0055] 图4为单克隆抗体竞争性抑制Blys与IM9细胞表面受体结合的活性（结果表明 所筛选的单克隆抗体可以阻断Blys与IM9细胞的结合）；
[0056] 图5为单克隆抗体的抑制Blys刺激的鼠脾细胞增殖的活性（NMB04的IC50 = 0· 006219 μ g/ml，Belimumab 的 IC50 = 0· 008249 μ g/ml);
[0057] 图6为单克隆抗体的亲和力常数测定（所筛选的单克隆抗体NMB04的亲合常数KD 为 7. 38E-10M，Belimumab 的亲合常数 KD 为 I. 37E-09M);
[0058] 图7为抗Blys抗体抑制重组人Blys诱导的小鼠体内脾脏B细胞增殖结果；
[0059] 图8为抗Blys抗体减少食蟹猴体内血液，脾脏和肠系膜淋巴结中⑶20+及⑶21+ 细胞的百分率结果（其中，图8A为脾淋巴细胞结果，图8B为肠淋巴结细胞结果，图8C为血 液淋巴细胞结果）。
【具体实施方式】
[0060] 以下结合附图1-8对本发明的原理和特征进行描述。在进一步阐述本发明之前， 我们有必要认识到，本发明并不局限于描述的特定的实施方案，也就是说，在具体形式上可 能存在着变化。还有一点需要提醒的是，由于本发明的范围受附加的权利要求书的限制，因 此，本文使用的术语只是为了描述特定实施方案的目的，而不是为了限制本发明的目的。
[0061] 本发明中提到的参考著作、专利、专利申请及科学文献，构成本领域技术人员的已 有知识，作为整体在此引入作为参考，与这些文献专门单个引入作为参考时的范围相同。在 本申请所引入文献与本说明书特定含义之间如有任何抵触，都应该以后者为准。另外，本领 域对词汇和短语定义的已有理解与本说明书中对该词汇或短语的专门解释而下的定义之 间如有抵触，都以后者为准。
[0062] 氨基酸残基的缩写是本领域中所使用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字 母或1字母代码。
[0063] 另外应注意，如本说明书中所使用的，单数形式包括其所指对象的复数形式，除非 清楚且明确的限于一个所指对象。术语"或"可与术语"和/或"互换使用，除非上下文另 有清楚指明。
[0064] 本发明所述"抗体"应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性 结合因子。因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物以及抗体的功能等同物和同 源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例 是免疫球蛋白亚型（如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以是包含抗原结合 结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb或Fd，或者双链抗体（diabodies)。融合至另一多肽的、 包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。
[0065] 抗体可以通过许多方式修饰，可用DNA重组技术来产生保留原来抗体特异性的 其它抗体或嵌合分子。这种技术可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定 区（CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。参见，EP.A-184187、 GB2188638A 或 EP. A-239400。
[0066] 本发明所述单克隆抗体可以是，例如，单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体 以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的 任何多肽。
[0067] 本发明所述抗体、单克隆抗体除了重链和轻链中的高度可变区（也称为互补决定 区）CDR1、CDR2和CDR3外，其它为框架区。框架区可在结合所需的三维结构不受影响的条 件下被其他序列置换，抗体特异性的分子基础主要来自于它的高度可变区CDR1、CDR2和 CDR3,这些区域是与抗原结合的关键部位。为维持优选的结合特性，CDR的序列应尽可能保 留，然而，可能需要一些氨基酸改变使结合特性最优化，本领域的技术人员可以用标准做法 来达到此目的。
[0068] 术语"单克隆抗体（MAbs) "和"单抗"在本文中可以互换使用，是指对于特定抗原 的抗体的同类群体并且该抗体仅包含一种类型的抗原结合位点并且只结合抗原决定簇上 的一个表位。通过本领域技术人员所公知的方法可以获得对于特定抗原的单克隆抗体。例 如单克隆抗体可以通过杂交瘤法，或重组DNA法制备。
[0069] 术语"抗体"和"免疫球蛋白"在本文中可以互换使用。这些术语均为本领域技术 人员所熟知的术语，具体是指由能特异结合抗原的一种或多种多肽构成的蛋白质。抗体的 一种形式构成了抗体的基本结构单元。这种形式是四聚物，它由两对完全相同的抗体链构 成，每一对都有一个轻链和一个重链。在每对抗体链中，轻链和重链的可变区联合在一起共 同负责结合抗原，而恒定区则负责抗体的效应器功能。
[0070] 术语"抗体"和"免疫球蛋白"包括任何同型体的抗体或免疫球蛋白，或保持与抗 原特异结合的抗体片段，包括但不限于Fab，Fv，scFv和Fd片段、嵌合抗体、人源化抗体、单 链抗体以及包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白质的融合蛋白质。抗体可以被标记和检 测，例如，可以通过放射性同位素、能产生可检测物的酶、荧光蛋白质、生物素等等进行标记 并被检测。抗体还可以结合于固相载体，包括但不限于聚苯乙烯平板或珠粒等等。该术语 还包括Fab'、Fv、F (ab'）2和/或其它能与抗原特异性结合的抗体片段和单克隆抗体。
[0071] 目前已知的免疫球蛋白多肽包括κ和λ轻链，以及α，γ (IgGl，IgG2, IgG3， IgG4)，δ，ε和μ重链或它们的其它类型等价物。全长的免疫球蛋白"轻链"（大约25kDa 或大约214个氨基酸）包含一个由NH2-末端上大约110个氨基酸形成的可变区，以及一个 COOH-末端上的κ或λ恒定区。全长的免疫球蛋白"重链"（大约50kDa或大约446个氨 基酸），同样包含一个可变区（大约116个氨基酸），以及重链恒定区之一，例如γ (大约 330个氨基酸）。
[0072] 抗体还可以以多种形式存在，例如包括Fv、Fab和（Fab'）2,以及双功能杂合抗体 (例如，Lanzavecchia 等，Eur. J. Immunol.，I987 ;17, 10?5)，以及以单链形式（例如，Huston 等，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.，1988 ;85, 5879 和 Bird 等，Science, 1988 ;242, 423，在 此引用作为参考）存在。免疫球蛋白的重链或轻链可变区由三个超变区（也称为"互补决 定区"或CDR)组成，这些超变区被框架区（FR)间隔。框架区和互补决定区的范围已被精 石角定义（参见〃Sequences of Proteins of Immunological Interest, 〃Ε· Kabat 等，11 S. Department of Health and Human Services, 1991)。此处所讨论的所有抗体氨基酸序 列的排序都参照Kabat系统。同一物种不同的轻链和重链框架区序列相对保守。抗体的框 架区用于定位和校准CDR。CDR主要负责结合抗原的表位。
[0073] "嵌合抗体"是其重链和轻链基因经过构建的抗体，特别是利用基因工程改造的属 于不同物种的抗体可变区和恒定区基因。例如，可以将鼠单克隆抗体基因的可变区片段连 接到人抗体恒定区片段如γ?和γ 3。当然，嵌合抗体的基因来源也可以使用其它哺乳动物 物种。
[0074] 在某些实施方案中，抗体与其靶点之间的亲和力用KD (解离常数）来表征，它低于 10 6M、10 7M、10 SM、10 9M、10 1QM、10 11M 或者约 10 12M 或更低。
[0075] 抗体重链或轻链的"可变区"是该链的N端成熟区域。所有区域、CDR和残基编号均 以序列比对、按已有的结构知识为基础进行定义。框架区和CDR残基的鉴定和编号按Kabat 系统。
[0076] 术语"多肽"和"蛋白质"在本文中可以互换使用，它们都是指任何长度的聚合形 式的氨基酸，可以包括编码和非编码的氨基酸、通过化学或生物化学修饰或衍生的氨基酸 以及具有修饰肽骨架的多肽。该术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基酸序列的 融合蛋白；具有异源和同源前导序列，带有或不带有N-末端甲硫氨酸残基的融合蛋白；带 有免疫标签的蛋白；带有可检测融合伴侣的融合蛋白，例如包括荧光蛋白质、半乳糖苷 酶、荧光素等等作为融合伴侣的融合蛋白等等。多肽可以具有任何大小，术语"肽"是指长 度为8-50个残基（如8-20个残基）的多肽。
[0077] "亲本"抗体是指作为氨基酸取代的靶抗体。在某些实施方案中，抗体会将氨基酸 "赠捐"给亲本抗体以生成改变的抗体。
[0078] 术语"抗Blys抗体"是与Blys以足够的亲和力以及特异性结合的抗体。
[0079] 术语"药学上可接受的载体"指一种或多种有机或无机成分，它可以是天然的或合 成的，与抗体组合后可促进其应用。可接受的载体包括无菌的生理盐水或是其它药学上可 获得的且为本领域所熟知的水或非水的等渗溶液或灭菌混悬剂。
[0080] 实施例1制备表达抗人Blys单抗的杂交瘤细胞及其基因克隆
[0081] 通过杂交瘤细胞技术制备鼠源单克隆抗体。有关实验方案参见文献（Ed HarlowjDavid Lane. Antibody:A laboratory manual. 1988)〇
[0082] 首先通过重组技术制备Blys-His (含6XHis标签）融合蛋白。将Blys-His的DNA 序列克隆入PCDNA3. I(Invitrogen),转染该质粒进入CH0-K1 (AT