一种蒲公英多糖的提取方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种蒲公英多糖的提取方法及其应用。
【背景技术】
[0002]蒲公英，性平、味甘、微苦。可清热解毒，消肿散结。有显著的催乳作用，治疗乳腺炎十分有效。无论煎汁口服，还是捣泥外敷，皆有效验。此外，蒲公英还有利尿、缓泻、退黄疸、利胆、助消化，增食欲，治疗胃及十二指肠溃疡，还可防治各种肿瘤。它具有丰富的维生素A、C及矿物质，对消化不良、便秘都有改善的作用。另外叶子还有改善湿疹、舒缓皮肤炎、关节不适的净血功效，根则具有消炎作用，可以治疗胆结石、风湿，花朵煎成药汁可以去除雀斑，可说是非常有用的一种香药草。蒲公英植物体中含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分，有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效。蒲公英同时含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，有丰富的营养价值，可生吃、炒食、做汤，是药食兼用的植物。蒲公英属植物富含留醇、棕榈酸和多糖，多糖是重要的信息分子，具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗辐射、抗突变、降血糖、增强免疫等多方面的作用。
【发明内容】
[0003]为了弥补已有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种蒲公英多糖的提取方法及其应用。
[0004]—种蒲公英多糖的提取方法，其具体步骤为:
(1)将全草蒲公英洗净，晾干，45°C烘干，粉碎，过60~100目筛；
(2)取干粉100g，按料液比1:8~12，加入去离子水，95~100°C水浴，回流4~5次，每次I小时，过滤，得提取液；
(3)向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的8~12%，1000转/分钟，磁力搅拌20~30分钟，静置140~160分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，40~45°C真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
(4)向3)得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4°C冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
(5)向4)得到的沉淀中加入3~4倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
(6)将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4°C透析36~48小时，更换烧杯中的去离子水3~4次，透析袋可以重复使用；
(7)将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用lmol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
(8)将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖。
[0005]优选地，所述步骤I)将蒲公英粉碎后过80目筛。
[0006]优选地，所述步骤2)蒸馏水回流的料液比1:12，100°C水浴，回流5次。
[0007]本发明所述的一种蒲公英多糖的应用，是以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。
[0008]本发明的优点是:
1、本发明提供的一种蒲公英多糖的提取方法及其应用，提取方法简单，提取率为8.58%，纯度为86.3%，用环己酬沉淀蛋白，去除提取液中的蛋白质，去除率尚，能够明显提尚多糖提取液的纯度，而且使用量少，节约成本；
2、将蒲公英粉碎后过筛，提高粉碎度，细胞的破碎程度高，提高提取率；用热水代替乙醇进行回流提取，减少提取液中的脂肪含量，提高多糖的纯度，减少后续纯化过程，降低成本；
3、利用DEAE-52纤维素层析柱和SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱对粗多糖进行分离纯化，不使用有机溶剂，减少纯化过程中对多糖的浪费，提高提取率，有利于分管收集，测定不同部位的糖含量及抗氧化活性；
4、蒲公英多糖可作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品，抗氧化作用明显，安全，无副作用，具有很大的市场价值和广阔的应用前景。
【附图说明】
[0009]图1为本发明所述的DEAE-52纤维素层析柱洗脱曲线图；
图2为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱各收集峰的抗氧化活性图；
图3为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱洗脱曲线图；
图4为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱洗脱曲线图；
图5为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱洗脱曲线图；
图6为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱洗脱曲线图；
图7为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱洗脱曲线图；
图8为本发明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱洗脱曲线图。
【具体实施方式】
[0010]下面用具体实施例说明本发明。
[0011]实施例1
一种蒲公英多糖的提取方法，其具体步骤为:
(1)将全草蒲公英洗净，晾干，45°C烘干，粉碎，过80目筛；
(2)取干粉100g，按料液比1:12，加入去离子水，100°C水浴，回流5次，每次I小时，过滤，得提取液；
(3)向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的12%，1000转/分钟，磁力搅拌20分钟，静置160分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，45°C真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
(4)向3)得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4°C冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
(5)向4)得到的沉淀中加入3倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
(6)将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4°C透析48小时，更换烧杯中的去离子水4次，透析袋可以重复使用；
(7)将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用lmol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚_硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线(见图1)，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性(见图2)，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
(8)将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-ΙΟΟ凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量(见图3~8)，绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖，提取率为全草质量的8.58%，纯度为86.3%。
[0012]本发明所述的一种蒲公英多糖的应用，是以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。