亚麻酸的方法。其具体的技术方案为:
[0006]一种通过诱导普通小球藻ZF藻株高效积累亚麻酸的方法，其特征在于采用如下步骤:
[0007]I)制备藻液:在230C ±2°C、光强1900± 10lx和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BGll培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天至对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次I倍浓度的BGll营养盐；
[0008]2)积累亚麻酸:取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入植物生长调节剂6-BA，植物生长调节剂6-BA在藻液中的浓度为1±0.05mg/L，于23°C ±2°C进行诱导处理14± I天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现亚麻酸在藻液中的积累。
[0009]本发明与现有技术相比，其优点是:
[0010]1、简单易行，原材料普通小球藻ZF藻株细胞易于培养，周期短，成本低。
[0011]2、能显著提高普通小球藻ZF藻株细胞内亚麻酸含量，结果表明，诱导处理后，亚麻酸含量为藻细胞中总脂肪酸的93.92—94.99%,分别是对照组藻细胞的5.41—5.47倍。
【具体实施方式】
[0012]实施例1，采用以下步骤:
[0013]I)制备藻液:在23°C、光强ISOOIx和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BGll培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天到对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次I倍浓度的BGll营养盐；
[0014]2)积累亚麻酸:取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入北京索莱宝科技有限公司生产的植物生长调节剂6-BA，使植物生长调节剂6-BA在藻液中的浓度为1.00mg/L，于23°C进行诱导处理14天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现亚麻酸在藻液中的积累。
[0015]实施例2，采用以下步骤:
[0016]I)制备藻液:在24°C、光强20001x和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BGll培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天到对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次I倍浓度的BGll营养盐；
[0017]2)积累亚麻酸:取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入北京索莱宝科技有限公司生产的植物生长调节剂6-BA，使植物生长调节剂6-BA在藻液中的浓度为0.95mg/L，于24°C进行诱导处理15天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现亚麻酸在藻液中的积累。
[0018]实验检测:
[0019]I)富集藻细胞:8000-9000rpm，4°C离心5-8分钟，得到澡泥，再将藻泥在_40°C冷冻干燥成藻粉。
[0020]2)提取油脂:利用索氏提取法对冷冻干燥后的藻粉进行提取，即得油脂。
[0021]3)对油脂甲酯化:首先向提取到的总油脂中加入3ml 0.4mol/L KOH/甲醇，60°C水浴Ih ;冷却后加入14% BF3.CH3OH溶液3ml，60°C水浴Ih ;再冷却后加入20 μ L 10mg/mL十九酸甲酯，Iml正己烷(色谱纯)和Iml饱和NaCl，加入无水硫酸钠后静置分层，Iml注射器抽取上层有机相，过滤后保存于1.5mL EP中。
[0022]4)亚麻酸含量分析:采用气象色谱分析，色谱柱为HP-FFAP抗氧化交联石英毛细管柱，规格为30mX0.25mmX0.3m;进样口温度为260°C，分流比为50: I ;载气为高纯N2,柱流量为lmL/min，总流量55mL/min，压力114Kpa，线速度29.6cm/s，柱温由160°C以2°C /min的速度升至230°C，保持3min至出峰完毕；FID检测器，温度为230°C，进样量luL，得到气象色谱图。计算结果为:实施例1所得亚麻酸含量为藻细胞总肪酸的93.92%，是对照组藻细胞的5.41倍，实施例2所得亚麻酸含量为藻细胞总肪酸的93.99%，是对照组藻细胞的5.47 倍。
【主权项】
1.一种诱导普通小球藻ZF藻株高效积累亚麻酸的方法，其特征在于采用如下步骤: 1)制备藻液:在23°C±2°C、光强1900±1001x和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BGll培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天至对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次I倍浓度的BGll营养盐； 2)积累亚麻酸:取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入植物生长调节剂6-BA，植物生长调节剂6-BA在藻液中的浓度为1±0.05mg/L，于23°C ±2°C进行诱导处理14± I天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现亚麻酸在藻液中的积累。
【专利摘要】本发明提供一种诱导普通小球藻ZF藻株高效积累亚麻酸的方法，其特征在于采用如下步骤：1)制备藻液：在23℃±2℃、光强1900±100lx和光暗比为12h/12h的条件下，在23℃±2℃、光强1900±100lx和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BG11培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天至对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次1倍浓度的BG11营养盐；2)积累亚麻酸：取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入植物生长调节剂6-BA，植物生长调节剂6-BA在藻液中的浓度为1±0.05mg/L，于23℃±2℃进行诱导处理14±1天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现亚麻酸在藻液中的积累。本发明简单易行、成本低廉，能在短期内显著积累亚麻酸含量。
【IPC分类】C12P7/64, C12R1/89
【公开号】CN105132481
【申请号】CN201510609109
【发明人】高政权, 李国强, 孟春晓, 吴冠勋, 郭艳芸, 付圣贵, 沈义成, 孙海风, 邓素贞, 胡硕, 陈国强, 张瑞豪
【申请人】山东理工大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月23日