酸至蛋 白的交联、碱基修饰W及其他影响核酸完整性的化学修饰。
[0091] 在一个实施方式中，从样品中释放的裂解液和/或组分将在利用微流体系统的微 加工诊断分析仪中进行处理。"微流体系统"是指处理运行、精确控制和操作流体的系统， 该流体几何上被限制为小的、通常亚毫米的级别。W微级别移动、混合、分离或另外处理小 体积的流体需要小尺寸和低能量消耗。微流体系统包括如微型气动系统，即用于处理忍片 外流体的微系统的结构（压力源、液体累、微型阀等）和用于在忍片上处理微升、纳升和皮 升体积的微流体结构（微流体通道等）。微流体系统目标在于在一个系统上整合试验操作 如检测，W及样品预处理和样品制备。用于进行微流体分析的装置和方法可包括基于DNA 微阵列或蛋白微阵列的生物忍片，和/或用于进行热循环（例如PCR、LCR等）的装置和/ 或用于测序的装置。在本发明的一些实施方式中，微流体系统将结合微加工分析系统，需 要在系统外操作样品和液化缓冲剂。在优选的实施方式中，微流体系统将整合步骤用于 提供本发明的方法中所描述的裂解物，并且是完成从样品进入（sample-in)到结果出来 (result-out)的试验的完全整合的系统。在核酸分析方面，因此微流体系统可W是同时进 行核酸制备和释放W及包括目标扩增和检测的标记物分析的整合的微系统。具体地，本发 明的方法包括W下步骤：在微流体系统内将生物样品与组合物接触用于将样品的至少部分 转化成包含所述核酸的裂解物，所述裂解物能通过微流体系统直接运送，并在微流体系统 内在裂解物中直接分析核酸。因此，根据本发明方法产生的裂解物应当由此能通过微流体 系统直接运送。
[0092] 在EP1896180、EP1904234和EP2419705中已经描述了适合的微系统并相应包括在 描述本发明的一些实施方式中。优选地，使用包括一个或多个反应室和一个或多个流体室 的基于盒的系统（基于柱体的系统，cartridge-basedsystem)。一些流体室可W保持用于 从样品中产生裂解物的流体。其他室可W保持流体如清洗流体和扩增溶液。使用反应室W 进行不同的检测步骤如清洗、裂解和扩增。
[0093] 在描述本发明的优选的实施方式中，所有需要用于进行试验的试剂是预先设 置于微流体装置内，使得该装置是用于进行核酸分析的自包含的可任意使用的设备 (self-containeddispos油Ieapparatus)。适合的装置包括基于DNA微阵列或蛋白微阵 列的生物忍片，和/或用于进行热循环（例如PCR、LCR等）的装置和/或用于测序的装置。 优选地，微流体系统将包括用于进行热循环，优选聚合酶链反应（PCR)或逆转录聚合酶链 反应（RT-PCR)的装置。PCR方法是本领域所熟知的，并依赖于热循环，由重复加热和冷却 用于核酸融化和核酸酶复制的反应的循环组成。运样的扩增反应通常采用目标核酸和启动 核酸合成所需要的反应组分如热稳定DNA聚合酶（例如Taq聚合酶）、核巧酸和寡核巧酸 (例如引物、探针、阻断剂…）。在优选的应用中，微系统将使用W干燥后形式化ied-down 化rm)存在于微流体装置中的试剂实施热循环。将按照本发明所描述的处理样品W形成裂 解物，并由裂解物将预先设置于微流体装置中的试剂在测试时重新组成。因此，裂解物允许 在裂解物中直接进行下游核酸分析。典型地，使用微气动控制仪来管理需要用于完成试验 的裂解物和试剂。试验可包括终点或实时检测，两种方法在本领域中是熟知的。
[0094] 在示例性部分中所用的与PCR相关的术语：
[00巧]"Cq"是指定量循环，当巧光增加超过阔值时的部分循环次数。也称为Ct(阔值循 环）。 W96]"阔值"是指用于确定Cq的任意水平的巧光并且应被设置在扩增曲线(amplificationplot)的基线W上和指数增长期内。
[0097]"基线"是指有很少或没有巧光变化的PCR起始循环。
[009引"扩增曲线"是指巧光信号相对循环次数的曲线。
[0099] "RFU或相对巧光单位"是在采用巧光检测的试验中所用的测量单位。
[0100] 本发明的一个方面还提供了用于从生物样品中释放核酸能够在微流体系统中直 接核酸分析的组合物，所述组合物包含与下游核酸分析系统相容的表面活性剂。优选地，当 组合物与样品接触时提供裂解物，所述裂解物W其未稀释形式允许在裂解物中直接进行下 游核酸分析，并且所述裂解物与下游核酸分析系统相容。重要地，裂解物能通过微流体系统 直接运送。在一些实施方式中，组合物具有乳化活性并包括至少表面活性剂，优选非离子型 表面活性剂。优选地，裂解物是W其未稀释形式或W轻微稀释的形式。 阳1〇U "乳液"是两种或更多种通常不能混溶（不可混合（ncmmix油Ie)或不可共混的 (unblend油Ie))的液体的混合物。乳化剂（也称为乳剂）是通过增加其动力学稳定性来稳 定乳液的物质。将一类乳化剂称为"表面活性物质"或表面活性剂。 阳102] 本文所用的"表面活性剂"是指降低液体表面张力、两种液体之间的界面张力、或 液体和固体之间的界面张力的化合物。运些表面活性剂通常包括疏水部分和亲水部分。表 面活性剂除了其他W外可用作乳化剂。表面活性剂可分为阴离子型、非离子型、两性离子型 或阳离子型，运取决于它们是否包含一个或多个带电基团。 阳103] 非离子型表面活性剂包含非带电极性基团并不带电。非离子型表面活性剂的实 例为：BigCHAP(即，N，N-双巧-值-葡萄糖酷胺基）丙基]胆酷胺）；双（聚乙二醇双咪 挫基幾基])化is(polyeth}deneglycolbispmidaz〇}dcarbonyl]));聚氧乙締醇类，如 Brij(R) 30 (聚氧乙締（4)月桂基酸）、化ij(R) 35 (聚氧乙締（23)月桂基酸）、化ij(R) 35P、 Brij(R) 52 (聚氧乙締2嫁蜡基酸）、Brij(R) 56 (聚氧乙締10嫁蜡基酸）、Brij(R) 58 (聚 氧乙締20嫁蜡基酸）、Brij(R) 72 (聚氧乙締2硬脂基酸）、Brij(R) 76 (聚氧乙締10硬脂 基酸）、Brij(R) 78 (聚氧乙締20硬脂基酸）、Brij(R) 78P、Brij(R) 92 (聚氧乙締2油基 酸）巧'。'佩92￥(聚氧乙締2油基酸）、6'。'佩96￥、6'。'佩97(聚氧乙締10油基酸）、 Brij(R) 98 (聚氧乙締（20)油基酸）、Brij(R) 58P和化ij(R) 700 (聚氧乙締（I00)硬脂基 酸）；氨化藍麻油（Cremo地orHR化L(即，聚氧乙締甘油氨化油酸醋（polyo巧ethylenglyc erolthhcinoleat35);聚氧乙締 35 藍麻油（polyo巧 1 35castoroil));十乙二醇单十二 烷基酸；十乙二醇单十六烷基酸；十乙二醇单十S烷基酸；N-癸酷基-N-甲基葡糖胺；正癸 基[a]-D-化喃葡萄糖巧；癸基[0 ]-D-麦芽糖巧；洋地黄皂巧；正十二酷基-N-甲基葡 萄糖酷胺；正十二烷基[a]-D-麦芽糖巧；正十二烷基[e]-D-麦芽糖巧；屯乙二醇单癸 基酸；屯乙二醇单十二烷基酸；屯乙二醇单十四烷基酸；正十六烷基[e]-D-麦芽糖巧；六 乙二醇单十二烷基酸；六乙二醇单十六烷基酸；六乙二醇单十八烷基酸；六乙二醇单十四 烷基酸；Igepal(R)CA-630(即，壬基苯基-聚乙二醇、（辛基苯氧基）聚乙氧基乙醇、辛基 苯基-聚乙二醇）；甲基-6-0-(N-庚基氨基甲酯基）-[a]-D-化喃葡萄糖巧；九乙二醇单 十二烷基酸；N-壬酷基-N-甲基葡糖胺；八乙二醇单癸基酸；八乙二醇单十二烷基酸；八乙 二醇单十六烷基酸；八乙二醇单十八烷基酸；八乙二醇单十四烷基酸；辛基-[0 ]-D-化喃 葡萄糖巧；戊乙二醇单癸基酸；戊乙二醇单十二烷基酸；戊乙二醇单十六烷基酸；戊乙二醇 单己基酸；戊乙二醇单十八烷基酸；戊乙二醇单辛基酸；聚乙二醇二缩水甘油基酸；聚乙二 醇酸W-I;聚氧乙締10十S烷基酸；聚氧乙締100硬脂酸醋（或盐）；聚氧乙締20异十六 烷基酸；聚氧乙締20油基酸；聚氧乙締40硬脂酸醋（或盐）；聚氧乙締50硬脂酸醋（或 盐）；聚氧乙締8硬脂酸醋（或盐）；聚氧乙締双（咪挫基幾基）；聚氧乙締25丙二醇硬 脂酸醋（或盐）；来自皂树树皮的皂巧；脱水山梨糖醇脂肪酸醋类，如Span(R) 20 (脱水山 梨糖醇单月桂酸醋）、Span(R) 40 (脱水山梨糖醇单栋桐酸醋）、Span(R) 60 (脱水山梨糖醇 单硬脂酸醋）、Span(R) 65 (脱水山梨糖醇=硬脂酸醋）、Span(R) 80 (脱水山梨糖醇单油酸 醋）、和Span(R)85(脱水山梨糖醇S油酸醋）；聚乙二醇的各种烷基酸类如Tergitol(R) 型 15-S-12、Tergitol(R)型 15-S-30、Tergitol(R)型 15-S-5、Tergitol(R)型 15-S-7、 Tergitol(R)型 15-S-9、Tergitol(R)型NP-IO(壬基苯酪乙氧基化物）、Tergitol(R)型 ^-4^6'邑11〇1(时型^-40^6'邑^〇1(时型^-7^6'邑11〇1(时型^-9(壬基苯酪聚乙二 醇酸）、Tergitol(R)MINFOAMlx、Tergitol(R)MINFOAM2x、Tergitol(R)型TMN-IO(聚 乙二醇S甲基壬基酸）、Tergitol(R)型TMN-6(聚乙二醇S甲基壬基酸）、Triton(R) 770、 Triton(R)CF-IO(卞基-聚乙二醇叔-辛基苯基酸）、Triton(R)CF-21、Triton(R)CF-32、 Triton(R)DF-12、Triton(R)DF-16、IYiton00GR-5M、IYitonOON-42、Triton(R)N-57、 Triton(R)N-60、Triton(R)N-IOl(目P，聚乙二醇壬基苯基酸；聚氧乙締支化的壬基苯基 酸）、Triton(R)QS-15、Triton(R)QS-44、Triton(R)RW-75(目P，聚乙二醇 260 单（十六 烷基 / 十八烷基）酸和 1-十八烧醇）、Triton(R)SP-135、Triton(R)SP-190、Triton(R) W-30、Triton(R)X-15、Triton(R)X-45(即，聚乙二醇 4-叔辛基苯基酸；4-(1，1，3,3-四甲 基下基）苯基-聚乙二醇）、Triton(R)X-100(叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇；聚乙二醇叔 辛基苯基酸；4-(1，1，3, 3-四甲基下基）苯基-聚乙二醇）、Triton(R)X-102、Triton(R) X-I14(聚乙二醇叔-辛基苯基酸；（1，1，3, 3-四甲基下基）苯基-聚乙二醇）、Triton(R) X-165、Triton(R)X-305、Triton(R)X-405(即，聚氧乙締（40)异辛基环己基酸；聚乙二醇叔 辛基苯基酸）、Triton(R)X-705-70、Triton(R)X-ISl、Triton(R)X-200、Triton(R)X-207、 化11〇11(时乂-3〇1、化^〇11(时化-8(^和化^〇11(时乂95-2〇;十四烷基-[0]-〇-麦芽糖巧；四 乙二醇单癸基酸；四乙二醇单十二烷基酸；四乙二醇单十四烷基酸；=乙二醇单癸基酸；= 乙二醇单十二烷基酸；=乙二醇单十六烷基酸；=乙二醇单辛基酸；=乙二醇单十四烷基 酸；聚氧乙締脱水山梨糖醇脂肪酸醋类，如TWEEN⑩2〇(聚乙二醇脱水山梨糖醇单月桂 酸醋）、TWEEN廢20 (聚氧乙締（20)脱水山梨糖醇单月桂酸醋）、TWEEN⑧21 (聚氧 乙締（4)脱水山梨糖醇单月桂酸醋）、TWEEN?40(聚氧乙締（20)脱水山梨糖醇单栋 桐酸醋）、H￥EEN?60 (聚乙二醇脱水山梨糖醇单硬脂酸醋；聚氧乙締（20)脱水山梨糖 醇单硬脂酸醋）、了WEEN⑧61 (聚氧乙締（4)脱水山梨糖醇单硬脂酸醋）、TWEEN⑧ 65(聚氧乙締（20)脱水山梨糖醇S硬脂酸醋）、TWEENi货80(聚乙二醇脱水山梨糖醇 单油酸醋；聚氧乙締（20)脱水山梨糖醇单油酸醋）、TWEEN⑧81 (聚氧乙締（5)脱水山 梨糖醇单油酸醋），和T爾BEN衝85(聚氧乙締（20)脱水山梨糖醇S油酸醋）；四下酪醒 (t^oxapol);正^^一烷基[0 ]-D-化喃葡萄糖巧、MEGA-8 (辛酷基-N-甲基葡萄