. 7mmol)DCC，活化 30min。称取 5. 65g(15. 4mmol)HClSer-0Bzl于50mL小三角瓶中，用THF溶解后，用NMM调pH至7,然后 将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC 显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL二氯甲烷溶解，过滤除去二环 己基脲（DCU)，滤液层依次用饱和NaHC03溶液（20mLX3)和饱和NaCl溶液（20mLX3)各 洗三遍，有机层用无水CaCl2干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱 层析纯化（二氯甲烷/甲醇为洗脱剂），得到的淡黄色固体，经二氯甲烷/石油醚重结晶 得 5. 5g(92. 1 % )标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) :427[M+H]+ ;iH-NMRGOOMHz， DMS0-d6) ： 5/ppm= 8. 33(d,J= 6Hz, 1H), 7. 34 (m, 5H), 5. 13 (s, 2H), 4. 37 (m, 1H), 4. 11 (m, 1H)，3. 77 (m, 1H)，3. 66 (m, 1H)，2. 02 (s, 3H)，1. 64 (m, 4H)，1. 37 (s, 9H)。
[0030] 实施例7化合物HC1 ·H-Met-Ser-〇Bzl的制备
[0031]称取4. 6g(10. 8mmol)Boc-Met-Ser-OBzl于250mL爺形瓶中，加入40. 6mL4N氣化 氢的乙酸乙酯溶液并在冰浴下搅拌，在瓶口安装干燥管，室温下反应，TLC显示反应完毕后， 减压抽干溶剂，依次加入乙酸乙酯，减压抽干，重复两次，加入无水乙醚磨洗，减压抽干，重 复三次。得2.90g(74.4%)标题化合物。ESI-MS(m/z) :363·5[Μ+Η] +。
[0032] 实施例8化合物3Η-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-〇Bzl(5)的制备
[0033] 称取400mg(2. 45mmol) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸于250mL茄形瓶中，加入 120mLDMF。在冰浴和搅拌下依次加入 416mg(3. 08mmol)HOBt及 597mg(2. 90mmol)DCC，活 化 30min。称取 1. 05g(2. 89mmol)HClMet-Ser-〇Bzl于 50mL小三角瓶中，用DMF溶解后， 用NMM调pH至7,然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。 室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL二氯甲烷 溶解，过滤除去二环己基脲（D⑶)，滤液层依次用饱和NaHC03溶液（20mLX3)和饱和NaCl 溶液（20mLX3)各洗三遍，有机层用无水CaCl2干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄 色块状物经硅胶柱层析纯化（二氯甲烷/甲醇为洗脱剂），得到的淡黄色固体，经二氯甲烷 /石油醚重结晶得89mg(7. 7% )标题化合物，为淡黄色色固体。ESI-MS(m/z) :472[M+H] + ; Mp:171-172°C;[a]D25 = -l〇.3(c= 0· 10,甲醇）；IR(KBr) :3271，3078,2916,2850，1739， 1651,1558,1524,1454,1249,949,694:4-^^(3001^,01^0-(16) :δ/ρρπι= 8. 97(s，lH)， 8. 80(d,J= 9Hz, 1H) ,8. 68(d,J= 6Hz, 1H) ,8. 51 (s, 1H) ,8. 24 (s, 1H), 7. 36 (m, 5H), 5. 15 (s, 2H)，4. 77(m,J= 6Hz，1H)，4. 47(m,J= 3Hz，1H)，3. 79(m,1H)，2. 50(m,2H)，2. 05(m,5H)。
[0034] 实验例9化合物5的动静脉旁路循环抗血栓实验
[0035] 1)聚乙烯管的组装：将聚乙烯管拉成一端为斜口的细管，定长为10. 0cm，分别为 右经静脉（管径较粗）及左颈动脉（管径较细）插管；中段聚乙烯管定长为8. 0cm，血栓线 压在颈动脉插管方向，插管前需在管中充满肝素。
[0036] 2)手术：以20nmol/kg的剂量进行灌胃给药，30分钟后腹腔注射20 %的乌拉坦进 行麻醉。仰卧位将大鼠固定于鼠板上，剪开颈部皮肤，分离右颈总动脉及左颈静脉，血管下 压线，结扎远心端，静脉靠远心端处剪一小口，进行静脉端插管，注射肝素，系线固定，再用 动脉夹夹住动脉近心端，靠近远心端方向剪一小口，进行动脉端结扎，系线固定后松开动脉 夹，建立体外循环旁路。循环15分钟后先剪断静脉端观察血液循环是否正常，若正常从动 脉端取出血栓线，在纸上沾干浮血后称量并记录其湿重，大鼠断颈处死。每组大鼠15只，最 后进行数据统计并评价化合物活性。数据列入表1。从表1可以看出，化合物5治疗大鼠 的血栓重量明显小于含吐温80的生理盐水治疗大鼠的血栓重量。表明化合物5在20nmol/ kg的剂量下有抗动脉血栓生成活性。
[0037] 表1.化合物5的抗栓活性
[0038]
[0039] a，与空白对照（NS)比较p< 0. 01;
[0040]b，与空白对照（NS)比较p< 0. 01，与阳性对照相比p> 0. 05。
【主权项】
1. 下式的3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醜-Met-Ser-OBzl。2. 权利要求1的3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醜-Met-Ser-OBzl的制备方法，该方 法包括： (1) k组氨酸在稀硫酸催化下与甲醒进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4, 5,6, 7-四 氨-3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸； (2) 6S-4, 5,6, 7-四氨-3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸转化为6S-4, 5,6, 7-四 氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋； (3) 6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醋用高儘酸钟氧化为3H-咪哇 并[4, 5-C]化巧-6-甲酸甲醋； (4) 3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋在化0H溶液（2脚中皂化成3H-咪哇并[4， 5-C]化巧-6-甲酸； 巧)Boc-Met-OH与丝氨酸予醋偶联得到Boc-Met-Ser-OBzl; 巧)Boc-Met-Ser-OBzl在4N氯化氨的己酸己醋溶液中得到L-Met-Ser-OBzl; (7) 3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸与kMet-Ser-OBzl残基偶联得到3H-咪哇并[4， 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Ser-OBzl。3. 权利要求1的3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醜-Met-Ser-OBzl对SD大鼠的抗血 栓作用。4. 权利要求1的3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Ser-OBzl作为抗血栓药物的 应用。
【专利摘要】本发明公开了下式的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl。公开了它的制备方法、公开了它的抗血栓活性及应用。
【IPC分类】A61K38/06, A61P7/02, C07K5/097
【公开号】CN105237619
【申请号】CN201410327789
【发明人】赵明, 彭师奇, 吴建辉, 王玉记, 张薪, 赵欣尉, 吕希佳
【申请人】首都医科大学
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2014年7月10日