多配体蛋白聚糖-2的医学用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫调节和治疗试剂和组合物及其用途。此外，本发明涉及现有基于 细胞的产品的试验和修饰，从而影响其免疫调节与/或其它治疗特性。
【背景技术】
[0002] 人们对许多临床应用的间充质干细胞（MSC)相关产品非常熟悉，还有更多的产品 正在研发之中，并预期将来可批准用于人类。MSC具有某些免疫调节特性，使其具有治疗价 值，特别是，MSC可用于治疗自身免疫性疾病。人MSC的免疫抑制潜力得到了证明，例如，研 究表明，人MSC对T-细胞、B-细胞、树突细胞和自然杀伤细胞的增殖具有抑制效果（Han等， 2012)〇
[0003] EP 1795588描述了将源自脂肪组织的MSC用于治疗移植物抗宿主病（GVHD)的用 途；据称，这种细胞具有免疫抑制特性。
[0004] EP 2545928涉及含MSC的细胞制备物，通过无血清或低血清培养，其免疫抑制能 力得以保持。
[0005] W0 2012/111997公开了一种组合治疗方法，其中MSC与免疫调节性T细胞一起使 用，为基于MSC的疗法实现合适的免疫抑制效果。
[0006] W0 2009/1105624公开了向细胞共同传输分子和多肽从而改善分子治疗效果的组 合物和方法。将生长因子与其受体和共受体，如多配体蛋白聚糖（)1、2、3和4共传输，改善 了这些生长因子的传输。多配体蛋白聚糖和生长因子的共传输可以防止生长因子发生蛋白 水解，增强其活性，将生长因子靶向细胞表面，从而促进生长因子的信号传导。
[0007] KR1020100106744涉及一种预防或治疗转移性皮炎或黑素生成相关疾病的组合 物。预防或治疗转移性皮炎的组合物包含活性成分多配体蛋白聚糖-2。考虑的转移性皮炎 疾病有黑色素瘤、色素沉着过度、色素沉着不足或白癜风。
[0008] W0 02/087609涉及一种预防哺乳动物乳头瘤病毒感染的药物组合物，包括可溶 肽、蛋白质或融合蛋白，它们与乳头瘤病毒粒子结合，作为连接硫酸乙酰肝素粘多糖链的多 配体蛋白聚糖的配体。
[0009] W0 03/062386涉及调节动物体内多配体蛋白聚糖水平和血管形成的方法和材料。 其公开了多配体蛋白聚糖多肽和编码多配体蛋白聚糖多肽的核酸。这些都用于制备调节血 管形成的多核苷酸和多核苷酸类似物。亦探讨了鉴定多配体蛋白聚糖调节剂和血管形成调 节剂的方法。
[0010] Mukhopadhyay, A. et al. , J. Trauma Injury Infect. Crit. Care，2010, vol. 68, pp. 999-1008得出了以下结论：多配体蛋白聚糖-2和FGF-2可相互作 用，使多配体蛋白聚糖-2从细胞上脱落，反过来激活负责瘢痕瘤表型的事件。
[0011] Kaur，C. et al.，Glia，2009, vol. 57, ρρ· 336-349 研究了多配体蛋白聚糖-2 在变 形虫小胶质细胞中的表达，并指出这是缺氧上调的。
[0012] Contreras, H. R. et al. , Biochem. Biophys. Res. Comm.，2001，vol. 286, pp. 742-751研究了多配体蛋白聚糖-2在癌症中的表达，并指出多配 体蛋白聚糖-2表达包含在某些细胞朝转移性间充质样表型的分化中。
[0013] Sojoong Choi, e t al. , Biochem. Biophys. Res. Comm.，2012, vol. 417, pp. 1260-1264研究了基质金属蛋白酶-7 (MMP-7)在多配体蛋白聚 糖-2从结肠癌细胞上脱落中的作用。据其观察，MMP-7直接调节多配体蛋白聚糖-2从这 些细胞上的脱落。
[0014] Alexopoulou,A. N. et a 1. , BMC Cell Biol. , vol. 9, 2008, d oi: 10:10. 1186/1471-2121-9-2研究了干细胞朝中胚层分化期间用于转基因长期表达的载 体。使用的其中一个载体编码多配体蛋白聚糖-2。
[0015] W0 2011/153458公开了一种干扰登革热感染的方法，包括米用与登革热病毒革巴向 的细胞上的多配体蛋白聚糖结合的登革热病毒进行干扰。还公开了涉及这种用途的药物组 合物。
[0016] Mytilinaiou, M. et al.，IUBMB Life, 2013, vol. 65, ρρ· 134-143 研究了多配体蛋 白聚糖-2作为TGFi3 2/Smad2介导的纤维肉瘤细胞的细胞粘附的调节剂的作用。
[0017] 据 Kim, Y. et al·，Oncogene (2003)，vol. 22, ρρ· 826-830 观察，多配体蛋白聚糖-2 表达减少与曲古柳菌素-A-诱导的形态变化及结肠癌细胞中肿瘤发生活性降低有关。此 外，反义cDNA引起的多配体蛋白聚糖-2表达下调模拟了形态变化及减少了结肠癌细胞的 非贴壁依赖性生长。
[0018] Chung, H. et al. , Journal of Biological Chemistry, vol. 287, no. 23, pp. 19326-19335, 2012发现，黑皮质素1受体通过控制多配体蛋白聚糖-2表达来调节黑色 素瘤细胞的迀移。这是因为黑皮质素1受体抑制了 P38MAPK的活化，继而增强了多配体蛋 白聚糖-2的表达和黑色素瘤细胞的迀移。
[0019] 据 P6terfia, B. et al·，PLoS ONE, vol. 7, no. 6, e39474 观察，多配体蛋白聚糖-1 通过诱导多配体蛋白聚糖-2表达增强了间充质肿瘤细胞系的恶性程度。因此，多配体蛋白 聚糖-1与多配体蛋白聚糖-2 -起增强了人纤维肉瘤细胞系的增殖、迀移和转移。
[0020] Ruiz, X. et al·，PLoS ONE, vol. 7, no. 8, e43049 描述 了他们的发现：多配体蛋白 聚糖-2是一种与蛋白-3(IGFBP-3)结合的胰岛素样生长因子新型靶，以及多配体蛋白聚 糖-2在纤维化中过度表达。SDC2表达的增加至少部分是由于两种促纤维化因子TGF0和 IGFBP-3 的活性引起的。Dieudonn6，F_X et al·，Journal of Bone and Mineral Research ，vol. 27, no. 10, pp. 2118-2129描述了多配体蛋白聚糖-2表达是如何被骨肉瘤细胞中的阿 霉素上调的。T-细胞因子（TCF)负责抑制多配体蛋白聚糖-2。因此，TCF活性的靶向抑制 促进了多配体蛋白聚糖-2的表达和对小鼠骨肉瘤细胞和骨肿瘤中阿霉素的敏感性。
[0021] KR 20120013915描述了一种用于诊断结肠癌的组合物，包含一种测定多配体蛋白 聚糖-2肽片段表达水平的试剂。该试剂包含一种对多配体蛋白聚糖_2肽片段具有特异性 的抗体。
[0022] Huang, X. et al·，Oncology Reports 2009, vol. 21，ρρ· 1123-1129 讨论了食管鱗 状细胞癌中多配体蛋白聚糖-2 (SDC2)和富半胱氨酸61 (CYR61)表达改变的预后意义。
[0023] 现有技术中存在的一个共同问题是，MSC-类产品单独使用时免疫抑制性不够或 MSC的免疫抑制特性在细胞培养传代中随时间而丧失，即得不到保持。理想的是保持、刺激 起或能够恢复这些特性。
[0024] 免疫抑制方案可用于防止或减少移植排斥，临床使用的免疫抑制方案通常包括同 时使用几种试剂的组合。最好是鉴定替代免疫抑制剂和治疗方法。同样，最好鉴定促进血 管形成的试剂和治疗方法。此外，最好能够对此领域潜在治疗产品的效力进行试验。建议 的一种试验是基于可溶TNFR1，但是，需要替代且最好是改进的试验。
[0025] 发明目的
[0026] 本发明的一个目的是提供具有此处指出的免疫调节性与/或其它治疗特性的替 代试剂和治疗方法。本发明具体实施例的一个目的是提供赋予包含细胞或组织的产品或组 合物的较低免疫原性或较高免疫抑制性的试剂和疗法。
[0027] 发明概沐
[0028] 本发明实施例在使用时表明，增强的多配体蛋白聚糖-2 (SDC2)表达和/或活性增 强了免疫抑制和/或具有其它治疗特性。因此，本发明提供了 SDC2、包含SDC2的组合物、 编码SDC2的载体和调节SDC2表达的化合物，用于治疗细胞一一然后那些细胞用于治疗用 途。这些组合物、载体和化合物本身可用于治疗性处理，特别是人的治疗性处理，例如，用于 如本文描述的免疫调节或用于其它治疗用途。
[0029] 本发明还提供处理细胞群的方法，包括将细胞与SDC2结合，采用与SDC2结合的抗 体或抗体片段处理细胞与/或通过细胞调节SDC2的表达或活性。这种方法制备的细胞以 及来源于经处理细胞的细胞和组织构成本发明的其它部分。
【具体实施方式】
[0030] 本发明的实施例包括含SDC2的组合物、使用SDC2的方法及SDC2的特定用途。适 宜的是，这是可溶形式的，以及在特定实施例中，是人或马SDC2,虽然本发明包括通常源自 哺乳动物的SDC2，特别是源自人、小鼠、大鼠、狗、马、兔、羊、牛和猪的SDC2。
[0031] 所述组合物可包含药学上可接受、适合医药用途的赋形剂与/或载体。组合物可 以包含细胞培养基或配制为细胞培养基--例如，在细胞培养基中的SDC2--适合用于细 胞培养，例如，用于加入到培养的细胞中，用于制备基于治疗性细胞的产品。该组合物可配 制用于缓释和任选经修饰而改善半衰期，例如，SDC2 (或片段、变体、衍生物或类似物）可聚 乙二醇化（PEGylated)或多聚唾液酸化（PSAylated)。组合物可配制用于注射，例如，配制 在水中或盐水溶液中用于注射。组合物可配制用于吸入，例如，通过雾化。SDC2可以重组 体形式制备或从表达或过度表达SDC2的细胞分离。在试验的实例中，从表达SDC2的细胞 上清液中分离出，并且重组制备；正如其它地方所指出的那样，SDC2可脱落到培养基内，因 此，可从表达SDC2的细胞培养物中收获SDC2。
[0032] 本发明还提供编码SDC2的表达载体；再一次，优选人或马SDC2,但是，通常来源于 上文所述哺乳动物的编码SDC2的载体亦构成本发明的实施例。词语"表达载体"指的是核 酸，例如，线性或环状DNA或RNA，包括编码SDC2的片段，该片段可与用于其转录的其它片段 可操作地连接。这种其它片段可包括启动子（许多是人们已知的，合适的实例包括CMV和 UbC启动子）、终止子和UTR序列，并可任选包括一个或多个复制起点、一个或多个可选择标 记物、增强子、多腺苷酸化信号等。表达载体通常源于质粒或病毒DNA，或包含两者的元件。 本发明下文一个实例中采用的合适载体是腺病毒载体。其它合适的病毒载体包括逆转录病 毒、慢病毒和腺相关病毒。表达人SDC2的优选载体包括源于SEQ ID NO: 1或2 (例如，没有 polyA尾）的编码序列，或其等位变体，或编码SEQ ID N0:3或4的替代核苷酸序列。
[0033] SDC2可被细胞脱落进入到培养基中，这种胞外域脱落是由通常称为脱落酶的高 度调节直接作用引起的。已知基质金属蛋白酶（MMP)是多配体蛋白聚糖的脱落酶。特别 是，已经证明，MMP-7是SDC2脱落必须的（Ryu et al.，2007)。然而，亦已经证明，各种细 胞外刺激，包括生长因子（Subramanion et al.，1997)、趋化因子（Li et al.，2002;Brule et al·，2006 ;Charnaux et al·，2005)、乙酰肝素酶（Yang et al·，2007)和细胞应激 (Fitzgerald et al.，2000)都可以诱导 SDC2 的脱落。
[0034] 在本发明下文更详细地描述的具体实施例中，当含SDC2的培养基用于处理分开 的细胞群时，从人MSC表面脱落进入到培养基内的SDC2具有免疫抑制特性。因此，本发明 提供SDC2用于提供这种治疗效果一一免疫抑制的用途。用于疗法例如移植的细胞可以采用 这种方式进行处理，例如，暴露于SDC2,以降低其免疫原特性。本发明实现的免疫抑制效果 还可以与其它基于细胞的疗法一起平行使用，例如，从而降低或延迟患者出现不良免疫反 应的风险或发生。因此，本发明的SDC2和含SDC2的组合物，以及本发明的载体和化合物， 可与另一治疗组合物，例如，细胞治疗产品一起对患者给药，这种细胞治疗产品可以是MSC 与/或基质干细胞或包含MSC与/或基质干细胞。
[0035] 本发明另外还提供用于处理细胞的调节细胞SDC2表达的化合物。在本发明的实 施例中，所述化合物增加 SDC2的表达。这类化合物的实例包括激活p53的化合物、激活ERK、 p38或JNK SAPK激酶通路的化合物、激活缺氧诱导因子（HIF)-介导的通路的化合物、激动 (agonize) TGF、BMP、Lefty、Nodal和激活素（）通路的化合物、激动NOTCH通路（如Jagged 1、Jagged2、DLL1、DLL2、DLL3和DII4)的化合物、激动Hedgehog信号传导通路的化合物， 激动WNT通路的化合物、激活雄激素受体或雌激素受体通路的化合物及激活NFkB通路的化 合物。用于增强SDC2表达的化合物实例包括，p53调节化疗剂（如nutlins、5-FU、阿霉素、 顺铂、