一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，在去离子水中加入贻贝糖胺聚糖、膳食纤维、海藻多糖、灵芝多糖液、复合维生素、复合矿物质与添加剂灌装，灭菌得到厚壳贻贝多糖口服液。本发明的原料来源广泛，价格低廉；技术工艺科学合理，制备方法简单易行，适合工业化生产；经过本发明的技术转化可以有效提高厚壳贻贝的附加值，能够大幅度提高厚壳贻贝的利用率，对促进水产加工业的发展有重要意义；本发明厚壳贻贝的提取物与灵芝多糖液、海藻多糖的结合，可用于免疫调节，抗菌、提高免疫力、抗衰老、易于消化吸收。
【专利说明】
一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及厚壳贻贝糖胺聚糖饮品，尤其涉及一种抗菌、提高免疫力、抗衰老、易于消化吸收的厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法。
【背景技术】
[0002]贻贝属软体动物门贻贝科，是我国传统的养殖贝类，具有生长快、繁殖力强、抗病能力和适应性强，易于人工养殖等特点。目前我国人工养殖的贝类主要有紫贻贝、翡翠贻贝和厚壳贻贝等。我国贻贝养殖产量极大，年产量达到56.83万吨，浙江省作为海洋大省贻贝资源尤其丰富，年产量达到4万吨。然而，贻贝在我国被认为是一种低值海产品，虽有极丰富的资源，但经济价值低，没有被充分利用，在我国贻贝主要是新鲜或粗加工后供民间食用，以活鲜品销售为主，销售范围狭窄，深加工率较低。
贻贝作为海洋生物中的重要一族，具有重要的药用价值，中国古代《本草拾遗》就记载贻贝主虚赢劳损，因产瘦瘠，血气结积，腹冷，肠鸣，下痢腰痛，带下”。近现代医学研究也表明贻贝具有抗炎、抗癌、抗心血管疾病等作用。国外流行病学、动物和人体试验研究结果显示，新西兰翡翠贻贝脂溶性提取物具有显著的抗炎作用，对慢性关节炎，如风湿性关节炎、骨关节炎等具有很好的疗效。动物试验研究表明，新西兰翡翠贻贝的脂溶性提取物_Lyprin0I具有显著的抗关节炎作用，其抗炎效果比治疗类风湿性关节炎的消炎痛强，比其它抗炎油(n-3多不饱和油)和抗关节炎油(夜来香油)对预防佐剂诱导的多发性关节炎肿胀强200倍以上。临床试验研究表明，新西兰翡翠贻贝脂溶性提取物对风湿性关节炎、骨关节炎以及骨质疏松引起的关节痛和关节肿胀都有很好的缓解和治疗作用。我国对贻贝的抗炎活性也有相关报道，袁高峰等对厚壳贻贝的抗炎活性进行了研究，结果显示经冷冻干燥和氯仿:甲醇(2:1，V:V)溶液提取得到的厚壳贻贝脂溶性提取物具有与新西兰翡翠贻贝相似的抗多发性关节炎活性。
[0003]专利公开号CN1768765A，该申请案公开了利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶从牡蛎蛋白中获得了抗氧化肽，其不足之处在于，产业化生产不经济，原料来源不够广泛，不耐贮运，成本较高，不利于工业化大规模生产。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于为了解决现有贻贝主要是新鲜或粗加工后供民间食用，以活鲜品销售为主，销售范围狭窄，深加工率$父低的缺陷而提供一种提尚赌贝深加工率、抗菌、提高免疫力、抗衰老、易于消化吸收的厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
一)在去离子水中加入贻贝糖胺聚糖、膳食纤维、海藻多糖与灵芝多糖液55-65°C下超声震荡2_4h，冷却至1 °C过夜得到混合液备用；
二)在步骤一)得到的混合液中加入复合维生素、复合矿物质与添加剂，混合均匀后加入去离子水，灌装，145°C下灭菌30-45min，得到厚壳贻贝糖胺聚糖饮品。
[0006]作为优选，厚壳贻贝糖胺聚糖饮品中各原料的重量份数为:70-85份贻贝糖胺聚糖、15-25份膳食纤维、5-10份复合维生素、3-5份复合矿物质、20-35份海藻多糖、5_15份添加剂、45-60份灵芝多糖液与150-300份去离子水。
[0007]在本技术方案中，原料来源广泛，价格低廉;技术工艺科学合理，制备方法简单易行，适合工业化生产;经过本发明的技术转化可以有效提高厚壳贻贝的附加值，能够大幅度提高厚壳贻贝的利用率，对促进水产加工业的发展有重要意义;膳食纤维主要起到将贻贝糖胺聚糖与灵芝多糖液结合起来的作用，可以使得贻贝糖胺聚糖的抗炎作用与灵芝多糖液中的抗免疫力的作用更好的发挥。
[0008]作为优选，所述膳食纤维为果胶、藻胶或魔芋;所述添加剂为质量比5:1的蜂蜜与梓檬汁。
[0009]作为优选，贻贝糖胺聚糖的制备方法如下:
a)取新鲜贻贝肉组织15-20g，加去离子水45-50mL，匀浆后调节pH至6.5-7，在磁力搅拌器作用下加入贻贝肉组织质量的0.1-0.3%的复合酶酶解，灭酶后在8000-12000r/min下离心15-20min，取上清液加无水乙醇至终浓度75%，0°C下沉淀过夜，再在12000-14000r/min下离心15-20min，沉淀用无水乙醇-丙酮交替洗涤4_5次，透析48h，浓缩后冷冻干燥得到粗多糖;b)将步骤a)得到的粗多糖进行离子交换柱层析和凝胶柱层析，首先采用Q SepharoseFast Flow阴离子交换柱对粗多糖进行纯化，上样量40mL，流速2mL/min，每管收集16mL，流动相分别为纯水、0.311101/1111^&(:1、1.611101/1111^&(:1;最后用截留分子量为81^)-141^的透析袋透析24h，浓缩后冷冻干燥再采用Sephacryl S_300High Resolut1n凝胶柱进行进一步分离，上样量5mL，流速0.8mL/min，每管收集5mL，流动相为纯水，浓缩后冷冻干燥，得到贻贝糖胺聚糖。
[0010]作为优选，步骤一)中去离子水的用量为去离子水总量的2/3;步骤二)中的加入去离子水的量为去离子水总量的剩余量。
[0011]作为优选，步骤一)中超声功率为75_85kw。
[0012]作为优选，灵芝多糖液的制备方法为:在100重量份的甘蔗残渣中加入2000-5000重量份的饮用水，加热至沸腾保持60-75min，向过滤后得到的甘蔗汁中添加甘蔗汁重量的15 %的蜂蜜，然后接种灵芝液体菌种，发酵条件为:接种量为25 %，转速500r/min，温度为45-50 °C，发酵时间15天。
[0013]作为优选，灵芝液体菌种的制备方法是:将-10°C的灵芝菌斜面菌株接入冬瓜斜面上进行活化，培养至菌丝长满斜面后，取菌丝斜面块接入土豆液体培养基中进行培养，室温下200r/min培养5天后得到。
[0014]本发明的有益效果是:
1)本发明的原料来源广泛，价格低廉;技术工艺科学合理，制备方法简单易行，适合工业化生产;经过本发明的技术转化可以有效提高厚壳贻贝的附加值，能够大幅度提高厚壳贻贝的利用率，对促进水产加工业的发展有重要意义；
2)本发明厚壳贻贝的提取物与灵芝多糖液、海藻多糖的结合，可用于免疫调节，抗菌、提高免疫力、抗衰老、易于消化吸收。
【具体实施方式】
[0015]为了进一步了解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为了进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
[0016]原料:厚壳贻贝购自舟山南珍菜场。
[0017]主要试剂:胰蛋白酶，广西南宁庞博生物工程有限公司；
木瓜蛋白酶，亚太恒信生物科技有限公司；
无水乙醇、丙酮、氯化钠等购置国药试剂；
主要器材:磁力搅拌器、Sephacryl S-3OOHigh Resolut1n凝胶柱、Q Sepharose FastFlow离子交换柱、组织匀浆机、高速离心机、旋转蒸发仪、冷冻干燥机。
[0018]其余原料均可从市场购得。
[0019]复合酶为质量比为1:2的胰蛋白酶与木瓜蛋白酶。
[0020]实施例1
一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
一)在100份去离子水中加入70份贻贝糖胺聚糖、15份膳食纤维、20份海藻多糖与45份灵芝多糖液55°C下超声震荡2h，超声功率为75kw，冷却至10°C过夜得到混合液备用；
二)在步骤一)得到的混合液中加入5份复合维生素、3份复合矿物质与5份添加剂，混合均匀后加入50份去离子水，灌装，145°C下灭菌30min，得到厚壳贻贝糖胺聚糖饮品。
[0021]灵芝多糖液的制备方法为:在100重量份的甘蔗残渣中加入2000重量份的饮用水，加热至沸腾保持60min，向过滤后得到的甘蔗汁中添加甘蔗汁重量的15%的蜂蜜，然后接种灵芝液体菌种，发酵条件为:接种量为25 %，转速500r/min，温度为45 V，发酵时间15天。灵芝液体菌种的制备方法是:将-10°C的灵芝菌斜面菌株接入冬瓜斜面上进行活化，培养至菌丝长满斜面后，取菌丝斜面块接入土豆液体培养基中进行培养，室温下200r/min培养5天后得到。
[0022]所述膳食纤维为果胶;所述添加剂为质量比5:1的蜂蜜与柠檬汁。
[0023]贻贝糖胺聚糖的制备方法如下:
a)取新鲜贻贝肉组织15g，加去离子水45mL，匀浆后调节pH至6.5，在磁力搅拌器作用下加入贻贝肉组织质量的0.1%的复合酶酶解，灭酶后在8000r/min下离心15min，取上清液加无水乙醇至终浓度75%，0°C下沉淀过夜，再在12000r/min下离心15min，沉淀用无水乙醇-丙酮交替洗涤4次，透析48h，浓缩后冷冻干燥得到粗多糖；
b)将步骤a)得到的粗多糖进行离子交换柱层析和凝胶柱层析，首先采用QSepharoseFast Flow阴离子交换柱对粗多糖进行纯化，上样量40mL，流速2mL/min，每管收集16mL，流动相分别为纯水、0.3mol/mLNaCl、1.6mol/mLNaCl;最后用截留分子量为8kD的透析袋透析24h，浓缩后冷冻干燥再采用Sephacryl S_300High Resolut1n凝胶柱进行进一步分离，上样量5mL，流速0.8mL/min，每管收集5mL，流动相为纯水，浓缩后冷冻干燥，得到贻贝糖胺聚糖。
[0024]实施例2
一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤: 一)在120份去离子水中加入80份贻贝糖胺聚糖、18份膳食纤维、25份海藻多糖与50份灵芝多糖液60°C下超声震荡3h，超声功率为80kw，冷却至10°C过夜得到混合液备用；
二)在步骤一)得到的混合液中加入7份复合维生素、4份复合矿物质与10份添加剂，混合均匀后加入60份去离子水，灌装，145°C下灭菌35min，得到厚壳贻贝糖胺聚糖饮品。
[0025]灵芝多糖液的制备方法为:在100重量份的甘蔗残渣中加入3000重量份的饮用水，加热至沸腾保持70min，向过滤后得到的甘蔗汁中添加甘蔗汁重量的15%的蜂蜜，然后接种灵芝液体菌种，发酵条件为:接种量为25 %，转速500r/min，温度为45-50 V，发酵时间15天。灵芝液体菌种的制备方法是:将-10°C的灵芝菌斜面菌株接入冬瓜斜面上进行活化，培养至菌丝长满斜面后，取菌丝斜面块接入土豆液体培养基中进行培养，室温下200r/min培养5天后得到。
[0026]所述膳食纤维为藻胶;所述添加剂为质量比5:1的蜂蜜与柠檬汁。
[0027]贻贝糖胺聚糖的制备方法如下:
a)取新鲜贻贝肉组织18g，加去离子水48mL，匀浆后调节pH至6.7，在磁力搅拌器作用下加入贻贝肉组织质量的0.2%的复合酶酶解，灭酶后在1000(^/1^11下离心171^11，取上清液加无水乙醇至终浓度75%，0°C下沉淀过夜，再在13000r/min下离心17min，沉淀用无水乙醇-丙酮交替洗涤5次，透析48h，浓缩后冷冻干燥得到粗多糖；
b)将步骤a)得到的粗多糖进行离子交换柱层析和凝胶柱层析，首先采用QSepharoseFast Flow阴离子交换柱对粗多糖进行纯化，上样量40mL，流速2mL/min，每管收集16mL，流动相分别为纯水、0.3mol/mLNaCl、1.6mol/mLNaCl;最后用截留分子量为1kD的透析袋透析24h，浓缩后冷冻干燥再采用Sephacryl S_300High Resolut1n凝胶柱进行进一步分离，上样量5mL，流速0.8mL/min，每管收集5mL，流动相为纯水，浓缩后冷冻干燥，得到贻贝糖胺聚糖。
[0028]实施例3
一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
一)在200份去离子水中加入85份贻贝糖胺聚糖、25份膳食纤维、35份海藻多糖与60份灵芝多糖液65°C下超声震荡4h，冷却至10°C过夜得到混合液备用；
二)在步骤一)得到的混合液中加入10份复合维生素、5份复合矿物质与15份添加剂，混合均匀后加入100份去离子水，灌装，145°C下灭菌45min，得到厚壳贻贝糖胺聚糖饮品。
[0029]灵芝多糖液的制备方法为:在100重量份的甘蔗残渣中加入5000重量份的饮用水，加热至沸腾保持75min，向过滤后得到的甘蔗汁中添加甘蔗汁重量的15%的蜂蜜，然后接种灵芝液体菌种，发酵条件为:接种量为25 %，转速500r/min，温度为50 V，发酵时间15天。灵芝液体菌种的制备方法是:将-10°C的灵芝菌斜面菌株接入冬瓜斜面上进行活化，培养至菌丝长满斜面后，取菌丝斜面块接入土豆液体培养基中进行培养，室温下200r/min培养5天后得到。
[0030]所述膳食纤维为魔芋;所述添加剂为质量比5:1的蜂蜜与柠檬汁。
[0031 ]贻贝糖胺聚糖的制备方法如下:
a)取新鲜贻贝肉组织20g，加去离子水50mL，匀浆后调节pH至7，在磁力搅拌器作用下加入贻贝肉组织质量的0.3 %的复合酶酶解，灭酶后在12000r/min下离心20min，取上清液加无水乙醇至终浓度75%，0°C下沉淀过夜，再在14000r/min下离心20min，沉淀用无水乙醇-丙酮交替洗涤5次，透析48h，浓缩后冷冻干燥得到粗多糖；
b)将步骤a)得到的粗多糖进行离子交换柱层析和凝胶柱层析，首先采用Q SepharoseFast Flow阴离子交换柱对粗多糖进行纯化，上样量40mL，流速2mL/min，每管收集16mL，流动相分别为纯水、0.3mol/mLNaCl、1.6mol/mLNaCl;最后用截留分子量为14kD的透析袋透析24h，浓缩后冷冻干燥再采用Sephacryl S_300High Resolut1n凝胶柱进行进一步分离，上样量5mL，流速0.8mL/min，每管收集5mL，流动相为纯水，浓缩后冷冻干燥，得到贻贝糖胺聚糖。
[0032]以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
【主权项】
1.一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤: 一)在去离子水中加入贻贝糖胺聚糖、膳食纤维、海藻多糖与灵芝多糖液55-65°C下超声震荡2_4h，冷却至1 °C过夜得到混合液备用； 二)在步骤一)得到的混合液中加入复合维生素、复合矿物质与添加剂，混合均匀后加入去离子水，灌装，145°C下灭菌30-45min，得到厚壳贻贝糖胺聚糖饮品。2.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，厚壳贻贝糖胺聚糖饮品中各原料的重量份数为:70-85份贻贝糖胺聚糖、15-25份膳食纤维、5-10份复合维生素、3-5份复合矿物质、20-35份海藻多糖、5-15份添加剂、45-60份灵芝多糖液与150-300份去尚子水。3.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，所述膳食纤维为果胶、藻胶或魔芋;所述添加剂为质量比5:1的蜂蜜与柠檬汁。4.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，贻贝糖胺聚糖的制备方法如下: a)取新鲜贻贝肉组织15-20g，加去离子水45-50mL，匀浆后调节pH至6.5-7，在磁力搅拌器作用下加入贻贝肉组织质量的0.1-0.3%的复合酶酶解，灭酶后在8000-12000r/min下离心15-20min，取上清液加无水乙醇至终浓度75%，0°C下沉淀过夜，再在12000-14000r/min下离心15-20min，沉淀用无水乙醇-丙酮交替洗涤4_5次，透析48h，浓缩后冷冻干燥得到粗多糖； b)将步骤a)得到的粗多糖进行离子交换柱层析和凝胶柱层析，首先采用QSepharoseFast Flow阴离子交换柱对粗多糖进行纯化，上样量40mL，流速2mL/min，每管收集16mL，流动相分别为纯水、0.311101/1111^&(:1、1.611101/1111^&(:1;最后用截留分子量为81^)-141^的透析袋透析24h，浓缩后冷冻干燥再采用Sephacryl S_300High Resolut1n凝胶柱进行进一步分离，上样量5mL，流速0.8mL/min，每管收集5mL，流动相为纯水，浓缩后冷冻干燥，得到贻贝糖胺聚糖。5.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，步骤一)中去离子水的用量为去离子水总量的2/3;步骤二)中的加入去离子水的量为去离子水总量的剩余量。6.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，步骤一)中超声功率为75-85kw。7.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，灵芝多糖液的制备方法为:在100重量份的甘蔗残渣中加入2000-5000重量份的饮用水，加热至沸腾保持60-75min，向过滤后得到的甘蔗汁中添加甘蔗汁重量的15 %的蜂蜜，然后接种灵芝液体菌种，发酵条件为:接种量为25 %，转速500r/min，温度为45-50 °C，发酵时间15天。8.根据权利要求7所述的一种厚壳贻贝糖胺聚糖饮品的制备方法，其特征在于，灵芝液体菌种的制备方法是:将-10°C的灵芝菌斜面菌株接入冬瓜斜面上进行活化，培养至菌丝长满斜面后，取菌丝斜面块接入土豆液体培养基中进行培养，室温下200r/min培养5天后得到。
【文档编号】A23L2/52GK105851746SQ201610197010
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月31日
【发明人】曲有乐
【申请人】浙江海洋学院