和IL-1 β，可以活化NF_kB转录活性，这一点在空载体 对照道中可以观察到。对照细胞中TNF-a和IL-Ιβ诱导的NF-kB转录活性分别是大约3 倍和4倍。但是，在片段1-6表达细胞中，TNF-a、IL-1 β和TNFa /IL-1 β -诱导的NF_kB 转录活性增加显著降低（图10)。特别是，表达N-末端信号肽（1-18)的片段显著抑制了 NF-kB的IL1 β和TNF-a活化。片段1. 4 (1-79)和2. 4 (1-87)强劲地抑制了 NF-kB活化， 表明NFkB的抑制需要硫酸乙酰肝素结合位点和信号肽。
[0263] 这一数据表明了 SDC2的免疫抑制特性，以及可能的迀移特性归功于SDC-2的 N-末端。通过抑制NF-kB活性，SDC2片段可以降低免疫响应，并作为抗炎剂使用，以及用于 伤口愈合、癌症治疗和炎性疾病。
[0264] 实例 13
[0265] 多配体蛋白聚糖-2抑制响应IL-1 β、TNF α和IL 1 β /TNF α的NF-kB信号传导 以及IL6和1L8分泌
[0266] 为了确定SDC-2是否影响NF_kB的信号传导，我们采用kB基序控制的荧光素酶报 告基因系统。我们采用空载体对照腺病毒（Ad-对照）或SDC2表达腺病毒（Ad-SDC2)对这 些细胞进行转导，确定对NF-kB转录活性的影响。促炎性细胞因子如TNF a、IL-1 β，以及 TNF a /IL-1 β组合可以激活NF_kB转录活性，如图11Α所示。对照细胞中TNF a、IL-1 β和 TNF a /IL-1 β诱导的NF-kB转录活性分别是大约3倍、3. 5倍和4-倍。但是，在SDC-2表 达细胞中，TNF a、IL-1 β和TNF a /IL-1 β诱导的NF_kB转录活性增加显著降低（图11)。
[0267] 除NF_kB转录活性下降之外，还存在TNFa-、IL-Ιβ-和TNFa/IL-Ιβ-诱导的 IL-6和IL-8释放的相关的显著减少，IL-6和IL-8都是由NF-kB调节的（图11B和11C)。
[0268] 这些数据共同表明了 SDC2通过调节NF_kB通路具有抗炎特性。
[0269] 实例 14
[0270] 将SDC2抗体靶向定位于癌症基质的SDC2
[0271] 我们对在癌症模型中SDC2+细胞定位进行了研究，以验证早期工作和确定癌症中 的治疗性干预战略。
[0272] 旧金山加利福尼亚大学（）的Matt Krummel教授友善地准备了 MMTV PyMT-P2A-mCherry-P2A-0VA(PyMT ChOVA)小鼠。其中 mCherry 和 0VA(卵白蛋白）序列连 接至多瘤病毒的中间T抗原（PyMT)，以及整个序列采用MMTV(小鼠乳腺瘤病毒）启动子驱 动。
[0273] 肿瘤生长-通过触诊乳腺监测雌性PyMT ChOVA小鼠的肿瘤发生情况，及采用游 标卡尺测量肿瘤尺寸，每周对总肿瘤负荷进行监测。将所有触摸到的肿瘤面积相加，计算合 并的肿瘤负荷。肿瘤面积定义为肿瘤长度X宽度。当肿瘤负荷超过200mm2时，按照ACREC 动物协议处死小鼠。
[0274] 肿瘤消化-从小鼠身上剖下PyMT肿瘤，测定切下来的肿瘤总重。然后，用解剖刀 切碎肿瘤，每〇. 3g肿瘤重量用2mg/ml胶原酶IV(Sigma)和200ug/ml DNA酶消化1. 5小时。 然后，将肿瘤通过100 μ m细胞过滤器，脱除较大块的未消化肿瘤。然后，运行70% /37% /30% Percoll梯度，脱除死细胞和红细胞，收集两个界面。
[0275] 流式细胞术-所有抗体均购自 R&D Systems、BD Pharmingen、eBioscience、 Invitrogen或Biolegend。为了进行表面染色，采用抗Fc受体抗体（24G2)培养细胞，并采 用PBS 2% FCS中的合适的抗体染色。在FACSCanto流式细胞仪（BD Biosciences)上开展 所有流式细胞分析。采用FlowJo(Treestar)开展流式细胞数据分析。
[0276] 肿瘤基质细胞根据下述标记物⑶45一、mCherry一、gp38+、0)362 +和DAPI 一分类。上 皮肿瘤细胞根据⑶45、DAPI和mCherry +进行分类。
[0277] 结果表明，SDC2(CD362/多配体蛋白聚糖-2)蛋白表达定位于CD45、mCherry、 gp38+、CD362+和DAPI肿瘤基质。因此，SDC2-阳性细胞定位于癌症基质内，对早期表明SDC2 拮抗剂，如SDC2抗体在癌症治疗中具有抗癌效果的工作提供了进一步的支持。
[0278] 因此，本发明通过调节SDC2水平与/或活性提供免疫调节和其它治疗。
【主权项】
1.SDC2或包含SDC2的组合物，其用于（i)免疫抑制，（ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗， (iv)伤口愈合或（v)骨愈合。2. 根据权利要求1使用的SDC2或组合物，包括可溶SDC2。3. 根据权利要求1或2使用的SDC2或组合物，其中SDC2是人SDC2。4. 根据权利要求1至3任一项使用的SDC2或组合物，包括细胞培养基。5. 根据权利要求4使用的SDC2或组合物，其中所述SDC2从细胞培养上清液获得。6. -种编码SDC2的载体，用于（i)免疫抑制，（ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗，（iv)伤 口愈合或（v)骨愈合。7. 根据权利要求6使用的载体，其编码人SDC2。8. -种调节SDC2表达的化合物，用于⑴免疫抑制，（ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗， (iv)伤口愈合或（v)骨愈合。9. 根据权利要求8使用的化合物，其降低SDC2的表达。10. 根据权利要求8使用的化合物，其提高SDC2的表达。11. 根据权利要求10使用的化合物，选自激活P53的化合物。12. 根据权利要求10使用的化合物，选自激活ERK、p38或JNKSAPK激酶通路的化合 物。13. 根据权利要求10使用的化合物，选自激活缺氧诱导因子（HIF)-介导的通路的化合 物。14. 根据权利要求10使用的化合物，选自激动TGF、BMP、Lefty、Nodal和激活素通路的 化合物。15. 根据权利要求10使用的化合物，选自激动NOTCH通路，如Jaggedl、Jagged2、DLLl、 DLL2、DLL3和DII4的化合物。16. 根据权利要求10使用的化合物，选自激动Hedgehog信号传导通路的化合物。17. 根据权利要求10使用的化合物，选自激动WNT通路的化合物。18. 根据权利要求10使用的化合物，选自激活雄激素受体或雌激素受体通路的化合 物。19. 根据权利要求10使用的化合物，选自激活NFkB通路的化合物。20. -种处理细胞群的方法，包括将细胞与SDC2结合。21. 根据权利要求20所述处理细胞群的方法，从而所述细胞适合用于（i)免疫抑制， (ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗，（iv)伤口愈合或（v)骨愈合。22. 根据权利要求20或21所述的方法，包括将待处理细胞与表达SDC2的细胞结合。23. 根据权利要求20或21所述的方法，包括将细胞与SDC2结合或与权利要求1至19 任一项所述的组合物、载体或化合物相结合。24. 根据权利要求20至23任一项所述的方法，其中所述细胞是人细胞，以及所述SDC2 是人SDC2。25. 根据权利要求20至24任一项所述的方法，其中所述细胞是干细胞。26. 根据权利要求25所述的方法，其中所述细胞是基质干细胞。27. 根据权利要求25所述的方法，其中所述细胞是MSC。28. 根据权利要求20至27任一项所述的方法，包括从经处理细胞得到后代细胞或组 织。29. 由权利要求28所述方法得到的细胞或组织。30. -种处理细胞群的方法，包括通过细胞调节SDC2的表达或活性。31. 根据权利要求30所述处理细胞群的方法，从而所述细胞适合用于（i)免疫抑制， (ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗，（iv)伤口愈合或（v)骨愈合。32. 根据权利要求30或31所述的方法，包括调节SDC2的表达或活性，从而调节细胞的 免疫抑制特性。33. 根据权利要求30至32任一项所述的方法，包括提高SDC2的表达，从而增加细胞的 免疫抑制特性。34. 根据权利要求30至33任一项所述的方法，包括采用促进SDC2表达的化合物处理 细胞。35. 根据权利要求30至34任一项所述的方法，包括采用编码SDC2的载体转染细胞。36. 根据权利要求30至35任一项所述的方法，包括处理细胞，从而增加其外源SDC2表 达，例如，通过暴露于增加SDC2表达的培养条件或环境条件。37. 根据权利要求30至36任一项所述的方法，其中处理之前细胞的SDC2表达较低或 没有。38. 根据权利要求30至37任一项所述的方法，其中细胞的SDC2表达开始时高，但随时 间而降低，以及所述处理是用于恢复之前的SDC2表达水平。39. 根据权利要求30或38所述的方法，包括采用与SDC2结合的抗体或其片段处理细 胞。40. 根据权利要求30至39任一项所述的方法，其中所述细胞是人的细胞，以及所述 SDC2 是人SDC2。41. 根据权利要求34至40任一项所述的方法，其中所述细胞是干细胞。42. 根据权利要求41所述的方法，其中所述细胞是基质干细胞。43. 根据权利要求41所述的方法，其中所述细胞是MSC。44. 根据权利要求30至43任一项所述的方法，包括从经处理细胞得到后代细胞或组 织。45. 由权利要求44所述方法得到的细胞或组织。46. 用于人类治疗的SDC2抗体。47. -种SDC2抗体，用于（i)免疫抑制，（ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗，（iv)伤口愈 合或（v)骨愈合。48. 根据权利要求47所述的抗体，其用于免疫抑制。49. 包括SDC2片段或由SDC2片段组成的多肽，其中所述多肽具有SDC2活性，以及所述 片段包括不超过150个SEQIDNO:3氨基酸。50. 根据权利要求49所述的多肽，其中所述片段包括不超过120个SEQIDNO: 3氨基酸。51. 根据权利要求49所述的多肽，其中所述片段包括不超过100个SEQIDNO: 3氨基酸。52. 根据权利要求49-51任一项所述的多肽，其中所述片段是包括至少SEQIDNO: 3的 氨基酸1-18的N-末端片段。53. 针对权利要求49至52任一项所述的多肽的抗体，用于人类治疗。54. 针对权利要求49至52任一项所述的多肽的抗体，用于（i)免疫抑制，（ii)炎症治 疗，（iii)癌症治疗或（iv)伤口愈合。55. 根据权利要求54所述的抗体，用于免疫抑制。56. -种测试细胞治疗产品的方法，包括测试SDC2。57. 根据权利要求56所述的方法，使用SDC2特异性抗体。58. 根据权利要求56或57所述的方法，包括将SDC2水平与预定标准进行对比。59. 根据权利要求56至58任一项所述的方法，实施以确定是否按照本发明任何其它方 法的方法来处理细胞或组织。60. -种包含细胞的治疗产品的效力试验，包括检测细胞的SDC2表达。 61. SDC2水平在细胞治疗产品的效力试验中的用途。62. 根据权利要求1至5任一项使用的SDC2,其中所述SDC2是长度至少30个氨基酸 的SEQIDNO:3且保留天然SDC2至少50%活性的片段，或包含这样的片段。63. 根据权利要求62使用的SDC2,其中所述SDC2是长度至少40个氨基酸的SEQID NO:3片段或包含这样的片段。64. 根据权利要求62或63使用的SDC2,包括SEQIDNO:3的氨基酸1-18。65. -种治疗患者的方法，从而导致免疫抑制，包括给予患者SDC2或SDC2抗体。66. -种治疗患者炎症的方法，包括给予患者SDC2或SDC2抗体。67. -种治疗患者癌症的方法，包括给予患者SDC2或SDC2抗体。68. -种促进患者伤口愈合的方法，包括给予患者SDC2或SDC2抗体。69. -种SDC2拮抗剂，用于（i)免疫抑制，（ii)炎症治疗，（iii)癌症治疗，（iv)伤口 愈合或（v)骨愈合。70. -种根据权利要求69使用的拮抗剂，选自权利要求1至5任一项所述的SDC2,权 利要求6至7任一项所述的载体，权利要求8至19任一项所述的化合物，权利要求46至48 或53至55任一项所述的抗体，权利要求49-52任一项所述的多肽及权利要求62至64任 一项所述的SDC。71. 根据权利要求69或70使用的拮抗剂，用于免疫抑制。72. 根据权利要求69或70使用的拮抗剂，用于治疗炎症。73. 根据权利要求69或70使用的拮抗剂，用于治疗癌症。74. 根据权利要求69或70使用的拮抗剂，用于伤口愈合。75. 根据权利要求69或70使用的拮抗剂，用于骨愈合。
【专利摘要】本发明将SDC2、包含SDC2的组合物、编码SDC2的载体及通过细胞调节SDC2表达的化合物用于处理哺乳动物如人的细胞，以实现免疫调节或用于其它特定治疗干预。将细胞与SDC2结合，采用与SDC2结合的抗体或其抗体片段处理细胞或通过细胞调节SDC2的表达或活性，对细胞进行处理。从经处理细胞获取细胞或组织，根据其免疫调节或其它治疗特性用于治疗用途。
【IPC分类】A61K38/00, C07K14/47
【公开号】CN105324391
【申请号】CN201480025184
【发明人】S·J·埃利曼
【申请人】奥尔布森治疗学有限公司
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年4月16日
【公告号】CA2909356A1, EP2986631A1, US20160058832, WO2014170411A1