试剂的存在下依次缩合，从而合成多肤的合成方法。
[0033] 优选地，所述制备方法还包括：5)将制得的模拟肤纯化，经脱盐及冷冻干燥得到 多肤冻干粉；优选地，所述纯化使用HPLCC18半制备柱进行，流动相为乙腊。
[0034] 任选地，将得到的不同烧酸偶联的模拟肤成盐。
[0035] 本发明提供的促红细胞生成素模拟肤通过公知技术可使用酸性或碱性化合物与 之反应成加成盐，通常采用的形成酸加成盐的酸为：盐酸、氨漠酸、氨舰酸、硫酸、憐酸、对甲 苯横酸、甲横酸、草酸、对漠苯基横酸、碳酸、班巧酸、巧樣酸、苯甲酸、乙酸。
[0036] 优选地，所述促红细胞生成素模拟肤的可药用盐选自硫酸盐、焦硫酸盐、Ξ氣乙酸 盐、亚硫酸盐、亚硫酸氨盐、憐酸盐、憐酸氨盐、憐酸二氨盐、偏憐酸盐、焦憐酸盐、盐酸盐、漠 化物、舰化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙締酸盐、甲酸盐、异下酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙烘 酸盐、草酸盐、丙二酸盐、下二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、下烘-1，4-二酸盐、己 烘-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、径基苯甲酸盐、 甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯下酸盐、巧樣酸盐、乳酸盐、丫-径基下酸盐、甘醇 酸盐、酒石酸盐、甲横酸盐、丙横酸盐、糞-^横酸盐、糞-2-横酸盐和扁桃酸盐等，优选Ξ氣 乙酸盐。
[0037] 碱性化合物也可W和促红细胞生成素模拟肤成盐，运些碱性化合物包括锭，碱金 属或碱±金属的氨氧化物，W及碳酸盐、碳酸氨盐，典型的有氨氧化钢、氨氧化钟、氨氧化 锭、碳酸钢、碳酸钟等。
[0038] 本发明还提供了所述促红细胞生成素模拟肤在制备用于治疗W缺乏红细胞生成 素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的药物中的应用。
[0039] 优选地，所述W缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病选自末期 肾功能衰竭或透析;AIDS相关性贫血，自身免疫性疾病，或恶性肿瘤；囊性纤维变性；早期 早熟性贫血；与慢性炎性疾病相关的贫血；脊髓损伤；急性失血；衰老和伴有异常红细胞产 生的肿瘤疾病。
[0040] 本发明还提供了一种含上述促红细胞生成素模拟肤及其药用盐的药物组合物，所 述药物组合物用于治疗W缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病。
[0041] 本发明的药物组合物包括一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料选自水溶性 填充剂、抑调节剂、稳定剂、注射用水和渗透压调节剂中的一种或多种。
[0042] 本发明所述的水溶性填充剂辅料选自W下的一种或多种：甘露醇、低分子右旋糖 巧、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖。
[0043] 所述抑调节剂选自W下的一种或多种：构祿酸、憐酸、乳酸、酒石酸、盐酸等非挥 发性的酸，w及氨氧化钟、氨氧化钢或氨氧化锭、碳酸钢、碳酸钟、碳酸锭盐、碳酸氨钢、碳酸 氨钟或碳酸氨锭盐等生理可接受的有机或无机酸、碱或盐等。
[0044] 所述稳定剂选自W下的一种或多种：邸TA-2化、硫代硫酸钢、焦亚硫酸钢、亚硫酸 钢、憐酸氨二钟、碳酸氨钢、碳酸钢、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烧 基硫酸钢或Ξ径甲基氨基甲烧等。优选为焦亚硫酸钢、憐酸氨二钟、精氨酸、聚乙二醇6000 和Ξ径甲基氨基甲烧。
[0045] 所述渗透压调节剂为氯化钢和/或氯化钟。
[0046] 本发明的药物组合物可W通过肌肉、静脉内、皮下注射途经进行给药，优选的剂型 为冻干粉或溶液注射剂。
[0047] 冷冻干燥注射剂的制备方法：取促红细胞生成素模拟肤溶液适量，加入水溶性填 充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节抑值至4-8使其溶解，加水稀释至 适当浓度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下揽拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除 菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即得，每个规格分别含有的 促红细胞生成素模拟肤5μg、100μgW及Img。
[0048] 注射液的制备方法：取促红细胞生成素模拟肤溶液或冻干粉适量，加入水溶性填 充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节抑值至4-8使其溶解，加水稀释至 适当浓度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下揽拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除 菌，滤液进行分装，封口即得，每个规格分别含有的促红细胞生成素模拟肤5μg、100μgW 及Img。
[0049] 本发明的药物组合物可W通过肌肉、静脉内、皮下注射途经进行给药，优选的剂型 为冻干粉或溶液注射剂。虽然剂量依治疗对象、给药方式、症状及其它因素而改变，本发明 的组合物在相当宽的剂量范围内是有效的。在成人的治疗中，剂量范围在50μg/人-lOmg/ 人，每日一次或每几日一次给药。实际剂量应该由医生根据有关的情况来决定，运些情况包 括被治疗者的身体状态、给药途径、年龄、体重、患者对药物的个体反应，患者症状的严重程 度等等，因此上述剂量范围并不是W任何方式限制本发明的范围。
[0050] 与现有技术相比，本专利设及的促红细胞生成素模拟肤或其可药用盐能够明显刺 激小鼠外周血网织红细胞计数的升高，说明它们刺激红细胞生成，同时还能够大大延长药 物在体内的半衰期。促红细胞生成素模拟肤和促红细胞生成素蛋白对成熟的红细胞、血细 胞压积、血红蛋白含量没有明显的影响，对外周血白细胞计数也没有明显影响。
【附图说明】
[0051] W下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0052] 图1显示实施例1中合成的促红细胞生成素模拟肤1的MS验证结果；
[0053] 图2显示实施例1中合成的促红细胞生成素模拟肤2的MS验证结果。
【具体实施方式】
[0054] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0055] 在W下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
[0056] 连施例1化奸细胸牛成素横拟化的合成
[0057]W下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
[0058] 本发明的促红细胞生成素模拟肤为烧酸偶联物，其中肤链的制备使用Fmoc固相 多肤合成方法，使用CSBio公司生产的CS336X型仪器进行本发明的多肤的合成。合成的 方法按照生产商的仪器说明书进行。本文所述的Fmoc固相多肤合成方法是指W聚合物树 脂作为固相反应基质，将氨基端Fmoc保护的氨基酸在偶联试剂的存在下依次缩合，从而合 成多肤的合成方法。其具体方法参见FmocsolidphaseP巧tidesynthesis:apractical approach, 2000,OxfordUniversityPress。并通过氧化方法形成单体内二硫键，例如20% DMS0氧化法W及舰氧化法。将制得的多肤使用HPLCC18半制备柱进行纯化，流动相为乙 腊。经脱盐及冷冻干燥得到多肤冻干粉。
[0059] 使用上述方法制备的肤链通过末端赖氨酸（K)侧链的酷胺键反应，形成下述烧酸 偶联物。具体方法为：首先采用DDE保护赖氨酸，使用Fmoc固相多肤合成法合成模拟肤单 体肤，采用孤E专用托保护剂脱去赖氨酸的孤E基团，然后利用赖氨酸侧链上游离的氨基进 行烧酸偶联反应，形成通式：GGLYACHMGP口化IVCQPLRSarK-X。
[0060] 其中，两个半脫氨酸形成二硫键；X表示不同长度的烧酸。
[0061] 通过上述方法，制备了烧酸分别为十二烧酸和十六烧酸的2种促红细胞生成素模 拟肤，其结构式分别如下：
[0062]G化YACHMGPITNalVCQPLRSa巧一十二烧酸
[0063] 促红细胞生成素模拟肤1 W64] 其中，N末端乙酷化。 阳0化]G化YACHMGPITNalVCQPLRSa巧一十六烧酸
[0066] 促红细胞生成素模拟肤2
[0067] 其中，N末端乙酷化。
[0068] 通过MS分别验证了所得促红细胞生成素模拟肤1和2,验证结果分别见图1和图 2。 阳〇~]连施例2.化奸细胸牛成素横拟化对小鼠的作用
[0070] 采用小鼠评价并比较促红细胞生成素模拟肤及促红细胞生成素蛋白对小鼠红细 胞生成的影响。
[0071] 其中，EP0(重组人促红素注射液，批准文号：国药准字S20000026)药品购自沈阳 Ξ生制药有限责任公司；
[0072] 昆明种小鼠，购自中科院上海实验动物中屯、，体重25-30g，均为雌性小鼠，试验中 各组动物数：10只，分为4组。
[0073] 其中，两组小鼠分别皮下注射促红细胞生成素模拟肤1、2;-组小鼠注射促红细 胞生成素蛋白；一组小鼠为空白对照，注射PBS缓冲液（25mM/l)，剂量均为4. 5mg/kg，连续 Ξ天，然后处死小鼠，取全血进行外周血细胞及网织红细胞计数，血细胞计数用全自动血球 计数仪计数。
[0074] 结果如表1所示，发现促红细胞生成素模拟肤及促红细胞生成素蛋白均能明显刺 激小鼠外周血网织红细胞计数的升高，说明它们剌激红细胞生成。并且，实施例1制备的模 拟肤1和2与商购EP0相比，在同样4. 5mg/kg的剂量下，对小鼠网织红细胞生成的影响更 大（见表1)。
[00巧]表1.促红细胞生成素模拟肤对小鼠网织红细胞生成的影响
[0076]
[007