7] 连施例3:化奸细胸牛成素横拟化对输猴的作用
[0078] 采用雜猴用于评价促红细胞生成素模拟肤对红细胞生成的影响，雜猴，体重 5. 5-8.化g，雌雄不限，购自海南实验动物中屯、。雜猴根据基础血红蛋白分组，分为四组，每 组Ξ只。对照组注射PBS缓冲液（25Mm/l)，一组使用模拟肤1，一组使用模拟肤2,每周静脉 注射一次，每次4. 5mg/kg，一组使用EP0,Ξ次/周，每次240μ/kg，连续给药Ξ周，每周测1 次血液学指标。实验结果见表2:
[0079] 表2.促红细胞生成素模拟肤对雜猴网织红细胞生成的影响
[0080]
[0082] 结果发现，模拟肤1和模拟肤2都可W导致外周血红蛋白含量上升30%W上，血细 胞压积升高，说明模拟肤2刺激血红蛋白生成。阳性对照促红细胞生成素同样升高雜猴外 周血血红蛋白含量30%W上，升高血细胞压积，但明显不具备长效性，需要每周注射Ξ次。
[0083] 连施例4.化奸细胸牛成素横拟化2对大鼠的作用
[0084] 采用大鼠评价并比较促红细胞生成素模拟肤2及促红细胞生成素蛋白对大鼠红 细胞生成的影响。
[00财其中，EP0药品购自沈阳Ξ生制药有限责任公司；
[0086] SD大鼠，购自中科院上海实验动物中屯、，体重25-30g，均为雌性大鼠，试验中各组 动物数：10只，分为3组。
[0087] 其中，一组大鼠皮注射促红细胞生成素模拟肤1、一组大鼠皮注射促红细胞生成 素模拟肤2, 一组大鼠注射促红细胞生成素蛋白，一组大鼠为空白对照，注射PBS缓冲液 (25mM/l)，剂量均为4. 5mg/kg，单次给药后，连续Ξ天取血进行外周血细胞及网织红细胞计 数，血细胞计数用全自动血球计数仪计数，并计算模拟肤1、2的长效性，结果发现模拟肤1、 2在单次给药后2周内依然具有刺激红细胞生成作用，结果见表3。
[0088] 表3.促红细胞生成素模拟肤对大鼠网织红细胞生成的影响
[0089]
[0090] 连施例5化奸细胸牛成素横拟化祈牛曲对小鼠的作用
[0091] 本实施例所使用的序列为：促红细胞生成素模拟肤1，促红细胞生成素模拟肤2， 促红细胞生成素模拟肤1甲氧基苯甲酸盐，促红细胞生成素模拟肤2Ξ氣乙酸盐。
[0092] 采用小鼠评价并比较促红细胞生成素模拟肤二聚体及其甲氧基苯甲酸盐，Ξ氣乙 酸盐对小鼠红细胞生成的影响。
[0093] 其中，阳性对照为：EP0药品（重组人促红细胞生成素注射液，批号：201405YC12) 购自沈阳Ξ生制药有限责任公司；
[0094] 昆明种小鼠，购自中科院上海实验动物中心体重25~30g，均为雄性小鼠，试验 中各组动物数：10只，分为6组。 阳0巧]其中，6组小鼠分别皮下注射促红细胞生成素模拟肤1、促红细胞生成素模拟肤2、 促红细胞生成素模拟肤1甲氧基苯甲酸盐、促红细胞生成素模拟肤2Ξ氣乙酸盐、EP0药品、 PBS缓冲液（25mM)剂量均为4. 5mg/kg，单次给药后，连续Ξ天取血进行外周血细胞及网织 红细胞计数，血细胞计数用全自动血球计数仪计数。结果见表4。
[0096] 表4.促红细胞生成素模拟肤的酸式盐和碱式盐的效果
[0097]
[0098] 尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的 条件下，可进行各个条件的适当变化。可W理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利 要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。
【主权项】
1. 一种促红细胞生成素模拟肤，其特征在于，所述模拟肤如下述式I所示： GGLYACHMGPI?a1VCQPLRSarK-X， 式I 其中，化1为3-(1-糞基）A-丙氨酸，其结构式如下：Sar为肌氨酸，其结构式如下：两个半脫氨酸形成分子内二硫键，X表示不同长度的烧酸，其中N末端乙酷化，优选地，X表示十二烧酸或十六烧酸。2. 根据权利要求1所述的促红细胞生成素模拟肤，其特征在于，所述促红细胞生成素 模拟肤为单体肤，优选地为多聚体。3. 根据权利要求1所述的促红细胞生成素模拟肤的可药用盐，其特征在于，所述可药 用盐为促红细胞生成素模拟肤与酸性化合物或碱性化合物反应生成的盐； 优选地，所述酸性化合物选自盐酸、氨漠酸、氨舰酸、硫酸、憐酸、对甲苯横酸、甲横酸、 草酸、对漠苯基横酸、碳酸、班巧酸、巧樣酸、苯甲酸或乙酸； 优选地，所述碱性化合物选自锭，碱金属或碱±金属的氨氧化物，W及碳酸盐、碳酸氨 盐；更优选地，所述碱性化合物选自氨氧化钢、氨氧化钟、氨氧化锭、碳酸钢或碳酸钟； 更优选地，所述促红细胞生成素模拟肤的可药用盐选自硫酸盐、焦硫酸盐、=氣乙酸 盐、亚硫酸盐、亚硫酸氨盐、憐酸盐、憐酸氨盐、憐酸二氨盐、偏憐酸盐、焦憐酸盐、盐酸盐、漠 化物、舰化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙締酸盐、甲酸盐、异下酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙烘 酸盐、草酸盐、丙二酸盐、下二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、下烘-1，4-二酸盐、己 烘-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、径基苯甲酸盐、 甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯下酸盐、巧樣酸盐、乳酸盐、丫-径基下酸盐、甘醇 酸盐、酒石酸盐、甲横酸盐、丙横酸盐、糞-^横酸盐、糞-2-横酸盐或扁桃酸盐，优选地为= 氣乙酸盐。4. 根据权利要求I或2所述的促红细胞生成素模拟肤的制备方法，所述方法包括W下 步骤： 1) 根据SEQIDNO: 1选择氨基酸； 2) 采用DDE保护赖氨酸，使用Fmoc固相多肤合成法合成模拟肤单体； 3) 采用孤E专用脱保护剂脱去赖氨酸的孤E基团； 4) 利用赖氨酸侧链上游离的氨基与烧酸偶联； 5) 任选地，将得到的单体肤或多聚体成盐。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述多聚体是通过包括W下步骤的方法 实现的： 首先，采用孤E保护赖氨酸，合成单体肤后，采用孤E专用脱保护剂脱去赖氨酸的DDE基团，然后利用赖氨酸侧链上游离的氨基进行偶联。6. 根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述制备方法还包括：将制得的模拟 肤进行纯化，经脱盐及冷冻干燥得到多肤冻干粉；优选地，所述纯化使用HPLCC18半制备 柱进行，流动相为乙腊。7. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1或2所述的促红细胞生成素模拟肤， 或权利要求3所述的可药用盐， 优选地，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料选自水溶性 填充剂、抑调节剂、稳定剂、注射用水和渗透压调节剂中的一种或多种； 优选地，所述水溶性填充剂辅料为选自W下的一种或多种：甘露醇、低分子右旋糖巧、 山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖； 所述抑调节剂选自W下的一种或多种：构祿酸、憐酸、乳酸、酒石酸、盐酸等非挥发性 的酸，W及氨氧化钟、氨氧化钢或氨氧化锭、碳酸钢、碳酸钟、碳酸锭盐、碳酸氨钢、碳酸氨钟 和碳酸氨锭盐； 所述稳定剂选自W下的一种或多种：邸TA-2化、硫代硫酸钢、焦亚硫酸钢、亚硫酸钢、憐 酸氨二钟、碳酸氨钢、碳酸钢、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫 酸钢和=径甲基氨基甲烧；优选地选自W下的一种或多种：焦亚硫酸钢、憐酸氨二钟、精氨 酸、聚乙二醇6000和=径甲基氨基甲烧； 所述渗透压调节剂为氯化钢和/或氯化钟。8. 权利要求1所述的促红细胞生成素模拟肤或权利要求3所述的可药用盐在制备用于 治疗W缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的药物中的应用， 优选地，所述W缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病选自末期肾功 能衰竭或透析;AIDS相关性贫血，自身免疫性疾病，或恶性肿瘤；囊性纤维变性；早期早熟 性贫血；与慢性炎性疾病相关的贫血；脊髓损伤；急性失血；衰老和伴有异常红细胞产生的 肿瘤疾病。9. 权利要求7所述的药物组合物在制备用于治疗W缺乏红细胞生成素或红细胞群缺 少或缺陷为特征的疾病的药物中的应用， 优选地，所述W缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病选自末期肾功 能衰竭或透析;AIDS相关性贫血，自身免疫性疾病，或恶性肿瘤；囊性纤维变性；早期早熟 性贫血；与慢性炎性疾病相关的贫血；脊髓损伤；急性失血；衰老和伴有异常红细胞产生的 肿瘤疾病。
【专利摘要】本发明涉及一种具有长效促红细胞生成功能的促红细胞生成素模拟肽或其可药用盐。本发明还提供了上述促红细胞生成素模拟肽的制备方法以及其在用于制备治疗以缺乏红细胞缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的药物中的用途。其中，本发明提供的促红细胞生成素模拟肽由SEQ？ID？NO:1中所示的肽链通末端的赖氨酸(K)侧链游离氨基形成的烷酸偶联物，所述结构通式如式Ⅰ所示:GGLYACHMGPITNalVCQPLRSarK—X其中，两个半胱氨酸形成二硫键，N末端乙酰化，X表示十二烷酸或十六烷酸。
【IPC分类】C07K1/06, A61P25/00, C07K1/16, A61P13/12, A61P7/06, A61K38/16, A61P37/02, C07K1/04, A61P35/00, A61P29/00, C07K14/00
【公开号】CN105367629
【申请号】CN201510757484
【发明人】龚珉, 魏群超, 夏广萍, 周植星, 赵娜夏, 郑学敏, 韩英梅, 孔维苓, 王士伟
【申请人】天津药物研究院有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年11月9日