一种新的二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物领域，具体涉及从东风桔的干燥根中分离得到的一种新的二萜化 合物及其制备方法和医药用途。
【背景技术】
[0002] 东风桔Atalantiabuxifolia(Poir).Oliv.为芸香科酒饼勒属植物，始载于 《岭南采药录》，目前为《全国中草药汇编》及《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册附录收 载。东风桔药用根与根茎，其性辛、苦，微温，归肺、胃、脾经，有祛风解表、化痰止咳、理气定 痛的功效。海南、广西、广东、福建等地历来沿用本品治疗急、慢性气管炎，临床效果较好，另 外有研究表明其具有较好的化痰、止咳、平喘的功效。东风桔作为一种民间用药，其疗效明 显，而且广泛应用于各大医院复方中，引起了国内外学者的兴趣，对其研究逐渐深入。随着 研究的不断深入，东风桔的化学成分和药理活性越来越受到人们的重视。
[0003]东风桔包含的化学成分复杂多样，迄今为止主要分离得到挥发油、柠檬苦素类、生 物碱、香豆素类、黄酮类等成分。柠檬苦素类化合物是由大戟烷或甘遂烷型三萜衍生而来的 一类高度氧化的四降三萜类化合物，是芸香科植物主要特征的化学成分，结构独特，具有明 显的抗癌和抗菌等生物活性。近年来的研究比较多，主要集中在其化学结构、生物合成和生 物活性等方面。芸香科植物中柠檬苦素类化合物主要分为3类:柠檬苦素苷元类、降解型柠 檬苦素类和糖苷型柠檬苦素类，其中以苷元居多。
[0004]海南、广西、广东、福建等地历来沿用东风桔治疗急、慢性气管炎，取得了较好的临 床效果，但对于本品药理活性研究的文献报道相对比较少。曾广辉等报道东风桔药材具有 止咳、化痰的功效，能减少痰液蛋白的水平，其生物碱有解痉作用，平喘效果较好。东风桔糖 衣片是以东风桔的根与茎经过水煎液提取而成，在对东风桔糖衣片的止咳平喘药理实验研 究中，用18~22g小鼠按成人20倍剂量ig给药，浓氨水喷雾致咳，EDT5Q为131.9%，表明其有止 咳作用；用220~250g豚鼠以磷酸组织胺喷雾致喘，给药前致喘时间为136s，给药后为412s， 平喘有效率302.94%，证明东风桔糖衣片有平喘作用。
[0005]东风桔药理活性多样，尤以抗肿瘤活性报道最多，涉及皮肤、肺、结肠等多个部位 的肿瘤，对胃肠道也有较好的保护作用，此外，还具有抗菌、抗氧化、抗炎、镇痛等作用。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种从东风桔根中分离得到的一种新的二萜化合物;本发 明的另一目的在于提供该新化合物的制备方法;本发明的再一目的在于提供该化合物用于 制备治疗乳腺癌药物的医药用途。
[0007]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 具有下述结构式的化合物（I)，
所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)东风桔的干燥根粉碎，用70%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取 物用大孔树脂除杂，依次用10%乙醇和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙 醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40: 1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（(1)步骤((3)中组分3用正相硅 胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水 溶液等度洗脱，收集9-13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0008] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0009] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(I)和药学上可接受的载体。
[0010] 所述的化合物(I)在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0011] 所述的药物组合物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0012] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0013]该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0014]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0015] 说明书附图 图1为化合物（I)结构式； 图2为不同剂量化合物（I)对乳腺癌细胞增殖活力的影响； 图3为不同剂量化合物（I)对乳腺癌细胞凋亡的影响。
【具体实施方式】
[0016]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0017] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证 药材和试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰 化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。小豆蔻的干燥成熟果 实购自安徽亳州中药材市场，产地福建。
[0018] 制备方法：（a)东风桔的干燥根(8kg)粉碎至绿豆大小，用70%乙醇热回流提取(25L X3次），合并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯(6LX3次）和 水饱和的正丁醇(6LX3次）萃取，浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（315g)和 正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用纯净水溶解至2L，医用脱脂棉过滤，滤液用 AB-8型大孔树脂（1.5kg)分离，依次用10%乙醇（10L)和75%( 12L)乙醇洗脱，收集75%乙醇洗 脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（155g);(c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用200-300目 正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (10个柱体积）、40 :1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、 10:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c) 中组分3(36g)用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积)和10:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;（e)步骤(d)中组 分2( 12g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶0DS-C18分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶 液等度洗脱，收集9-13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(25mg)。
[0019] 结构确证:淡黄色针状结晶，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z545.2014，结合核磁特征可得分子式为〇26出4〇11，不饱和度为10。核磁共振氢谱 数据δΗ(ρρπι，DMS〇-d6，500MHz) :Η-1(5· 16，br，s)，H-2( 1.78，m)，H-2( 1.91，m)，H-3( 1.02， br，d，J=14.2)，H-3(2.11，m)，H-6(5.82，d，J=8.7)，H-7(6.16，dd，J=11.5,8.7)，H-8(3.21， dd，J=11.5，11.5)，H-9(3.76，m)，H-ll(2.32，m)，H-ll(2.55，m)，H-15(7.25，s)，H-17(2.30， s)，H-18(1.33，s)，H-19(1.15，s)，H-20(l.15，s)，l-0Ac(2.02，s)，6-0Ac(1.99，s)，7-0Ac (2 · 21，s)，5-0H(4 · 70，s);核磁共振碳谱数据&(ppm，DMS〇-d6，125Hz) : 75 · 1 (CH，1-C)， 22.3(CH2,2-C)，33.0(CH2,3-C)，39.4(C，4-C)，80.3(C，5-C)，74.9(CH，6-C)，74.5(CH，7-C)， 57.5(CH，8-C)，36.4(CH，9-C)，46.8(C，10-C)，25.5(CH2，n-C)，172.2(C，12-C)，135.7(C， 13-C)，209.8(C，14-C)，147.3(CH，15-C)，178.2(C，16-C)，31.3(CH3，17-C)，31.2(CH3，18-C)，24.8(CH3，19-C)，17.4(CH3,20-C)，170.7(C，1-0Ac)，21.8(CH3，1-0Ac)，170.7(C，6-(^)，21.0((^3,6-(^)，170.4((：，7-(^)，21.9(〇13,7-(^) ;碳原子标记参见图1。11?谱表明 化合物1含有羟基(34700^1)和羰基（1754,17290^1)HNMR谱可知有一个烯烃质子信号δ !17.25(8，!1-15);3个含氧次甲基信号5!15.16(1^，8，!1-1)，5.82((1，了=8.7抱，!1-6)，6.16((1(1， J=11·5,8·7Ηζ，Η-7);2 次甲基信号SH3.21(dd，J= 11·5，11·5Ηζ，Η-8)和 3.76(m，H-9);l个 乙酰甲基信号狃2.30(8，!1-17);3个乙酰氧甲基信号；三个甲基单峰信号6!11.33(!1-18)和 1.15(H-19和!1-20)。13(：-匪1?谱显示有26个碳信号，包含7个甲基、3个亚甲基、6个次甲基(其 中1个烯烃基和3个含氧基)和10季碳(其中1个酮羰基，5个酯羰基，1个烯烃基，1个含氧基）。 这些数据表明，该化合物是一个由3个乙酰氧基取代的三环二萜类化合物。综合HMBC谱、1H-咕COSY谱和N0ESY谱可得该化合物结构如图1所示。
[0020] 实施例2:化合物（I)药理作用试验 一、材料和仪器 DMEM/F12高糖培养液购于北京Hyclone公司。改良型RPMI-1640培养基购于北京Hyclone公司。标准胎牛血清购于天津TBD公司。CCK-8细胞活力检测试剂购于日本株式会社 同仁化学研究所。AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒购于上海炎彬化工科技有限公司。Κ-?线粒体膜电位探针购于江苏碧云天生物技术研究所。二甲基亚矾 (DMS0) 和磷酸盐缓冲溶 液(PBS)购于Sigma公司产品。
[0021 ] -70°C低温冰箱(FormaScientificlnc.公司，美国），电子天平（岛津AEL-200型， 日本），超净工作台（SW-CJ-IC型，苏州），恒温振荡器(THZ-C型，国产），高压蒸汽消毒锅 (YX-400B型，国产），C〇2细胞培养箱（FormaSeriesΠ，Thermalelectroncorp·，美国），恒温 水浴锅（BHW2-I型，国产）