一种尖孢镰孢及其在苦荞麦种子萌发预处理上的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物技术领域，设及一种真菌及其在苦养麦种子萌发预处理上的应 用，尤其设及一种尖抱镶抱及其在苦养麦种子萌发预处理上的应用。
【背景技术】
[0002] 苦养又称鞍醒养麦(Fagopyrum tataricum)，是一种著名的食药两用杂粮作物，具 有很高的营养价值和保健功能。苦养富含蛋白质、淀粉、脂肪、维生素、矿物质和微量元素等 营养功能成分，尤其是苦养中所含有的芦下、搬皮素等生物黄酬类活性成分，具有降低血 糖、胆固醇、血脂和增强人体免疫力等功效。我国是世界上第一大苦养种植生产国，其常年 种植面积在600万亩W上，年产量约40万吨，主产区主要集中在长江W南的四川、云南、贵州 和西藏等省区。
[0003] 目前当季收获的新鲜苦养麦子发芽率通常在95% W上。然而，苦养麦种子在自然 环境存储过程中随着储存时间的增加，其酶蛋白逐渐发生变性，胚乳内的养分有所减少，从 而导致发芽质量下降，造成发芽率降低，其中一年后其发芽率降为80-85%，两年后降低为 50-60%，S年后发芽率仅为20-25%，甚至不发芽，其幼苗的质量及活力也大为降低，严重 影响苦养麦的种植生产及进一步开发利用。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的缺陷，提供一种尖抱镶抱及其在 苦养麦种子萌发预处理上的应用。尖抱镶抱对苦养麦种子的预处理方法简单易行，成本低 廉、容易操作、无过高的技术要求，且在提高苦养种子发芽率和缩短萌发时间效果十分明 显。
[0005] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006] 本发明提供一种新型的尖抱镶抱，命名为尖抱镶抱（Fusarium oxysporum) 化化巧，所述尖抱镶抱于2014年11月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中屯、，保藏编号〔61〔〔齡.10102。尖抱镶抱化113日1'；[111110巧3901'11111处日1日巧自健康苦养植 株中分离所得，为一株苦养内生真菌。
[0007] 尖抱镶抱化usarium O巧spo;rum)Fataf9具有W下特征：
[000引在PDA平板上的菌落为紫色，边缘白色，背部轮纹状，白色和紫色相间，菌落边缘整 齐，气生菌丝较长，大抱子近镶刀形或长楠圆形，2~3个隔，小抱子为卵圆形或楠圆形，两种 抱子大小为(4.3皿~17.5皿）X (1.祉m~4.7皿)。
[0009] 该尖抱镶抱(Fusarium oxysporum)化ta巧在PDA培养基上生长良好，适宜的生长 溫度为20°C~32°C，最佳生长溫度为25°C~28°C。另外，尖抱镶抱(Fusarium oxysporum) 化化巧培养是在好氧条件进行的，培养基的适宜抑范围为抑6.0~抑7.5。
[0010] 所述的尖抱镶抱的ITS序列为：
[0011]
[0013] 尘前镶前Fa t。fq的甚巧同姬化的态错货音M责.
[0012]
[0014]
[0015] 尖抱镶抱可W在苦养麦种子萌发预处理上有具体应用。
[0016] 所述的尖抱镶抱在苦养麦种子萌发预处理上的应用，包括W下处理方法：
[0017] A、尖抱镶抱菌丝水提多糖的制备:将尖抱镶抱菌丝接种培养，收获菌丝体;菌丝体 干燥后先去除单糖、二糖和脂类物质，再水提、精制后得到菌丝水提多糖；
[001引B、纯度测定：测定尖抱镶抱化ta巧菌丝水提多糖的糖含量及相应纯度，W葡萄糖 为标准品建立标准曲线；
[0019] C、处理液的配制：取尖抱镶抱菌丝水提多糖溶于无菌水中，调整其浓度为15-25mg/mL，过滤后备用；
[0020] D、苦养麦种子消毒:选取成熟饱满、大小一致、无霉变的苦养麦种子用消毒剂浸泡 消毒，然后用无菌水洗净，惊干；
[0021] E、苦养麦种子处理:将消毒后的苦养麦种子置于步骤C所制得的并稀释的处理液 中，在25°C、黑暗条件下浸泡10-1化，苦养麦种子重量与处理液的体积比为1:10(m/v);
[0022] 所述的尖抱镶抱在苦养麦种子萌发预处理上的应用，优选所述步骤A中，尖抱镶抱 菌丝接种培养时，采用将活化的菌丝接种在PD培养基上，所述PD培养基含有苦养粉水提液。
[0023] 所述的尖抱镶抱在苦养麦种子萌发预处理上的应用中，优选所述步骤E中，稀释的 处理液的浓度为150-200iig/mL。
[0024] 本发明W源自苦养麦自身的有益内生真菌--尖抱镶抱化ta巧所产生的活性代谢 物(菌丝水提多糖WPS)为诱导物对苦养种子进行预处理，提高种子发芽率，且对苦养种子无 毒害作用，安全性高，促进萌发效果显著。尖抱镶抱化ta巧制备方便，有利于生产中规模化 使用。采用尖抱镶抱化ta巧进行预处理的处理方法简单易行，成本低廉，容易操作，无过高 的技术要求，并且提高苦养种子发芽率和缩短萌发时间效果十分明显。同时，该方法具有很 好的经济社会价值和应用前景。
【附图说明】
[0025] 下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：
[0026] 图1是对不同储存年限的苦养麦种子，本发明实施例与未处理的种子发芽率对比 图；
[0027] 图2是对不同储存年限的苦养麦种子，本发明实施例与未处理的种子发芽率对比 图。
[0028] 图1图示中每组柱形图中6个柱体分别依次代表西养1号（对照）、西养1号(WPS处 理）、川养1号（对照）、川养1号(WPS处理）、米养1号（对照）和米养1号(WPS处理)后的种子发 芽率。
[0029] 图2图示中每组柱形图中6个柱体分别依次代表西养1号(对照）、西养1号(WPS处 理）、川养1号（对照）、川养1号(WPS处理）、米养1号（对照）和米养1号(WPS处理)后的种子发 芽率。
【具体实施方式】
[0030] 为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现对照附图详细说明 本发明的【具体实施方式】。
[0031] 一、尖抱镶抱Fa化巧的分离培养和鉴定
[0032] 分离纯化
[0033] 1、苦养麦处理:选取健康的苦养麦根和茎，对其根茎表面先用70%乙醇处理30s， 然后用0.2%氯化隶处理20min进行表面消毒，去除苦养麦的根茎表皮，将根、茎分成约 0.5cm X 0.5cm X 0.5cm大小的块段，摆放在马铃馨葡萄糖琼脂(PDA)培养基上。
[0034] 2、培养：先将PDA培养基中加入200yg/mL硫酸链霉素（S化eptomycin SUlfate)抑 制细菌干扰，然后将其置于25 °C下进行暗培养。
[0035] 3、分离纯化:从培养第3天开始观察，观察PDA平板中苦养根、茎组织块上长出的真 菌菌落，在无菌操作条件下用接种针挑取其边缘菌丝进行分离培养;进一步对所分离得到 的真菌菌落进行分离纯化，连续纯化4-5次，至菌落形态一致，即得到苦养麦尖抱镶抱 Fataf9D
[0036] 然后将苦养尖抱镶抱化ta巧保存在PDA试管斜面和平板上，并对其进行形态特征 观察和分子生物学鉴定。
[0037] 培养性状观察
[0038] 将在PDA平板上生长良好的尖抱镶抱化ta巧打菌饼，菌饼直径为O =5mm，每个 PDA平板上放置一块直径6cm的玻璃纸，将菌饼接种到玻璃纸上，25 °C下黑暗培养，每2地观 察记录化化巧菌落的形状、大小、色泽变化、质地、生长速度、是否产生色素等。
[0039] 该尖抱镶抱(Fusarium oxysporum)化ta巧在PDA培养基上生长良好，适宜的生长 溫度为20°C~32°C，最佳生长溫度为25°C~28°C。另外，尖抱镶抱(Fusarium oxysporum) 化化巧培养是在好氧条件进行的，培养基的适宜抑范围为抑6.0~抑7.5。
[0040] 显微观察
[0041 ]将玻璃纸从PDA平板上取下，剪成Icm2大小，将其置于载玻片上，W无菌水为浮载 剂制成标本后，在显微镜下观察菌丝体的粗细、分生抱子体的着生部位、形状、类型、大小、 产抱方式等详细情况，W及分生抱子的出芽方式、是否有隔、大小、形状、表面特点、色泽等 形态特征。
[0042] 在PDA平板上的菌落为紫色，边缘白色，背部轮纹状，白色和紫色相间，菌落边缘整 齐，气生菌丝较长，大抱子近镶刀形或长楠圆形，2~3个隔，小抱子为卵圆形或楠圆形，两种 抱子大小为(4.3皿~17.5皿）X (1.祉m~4.7皿)。
[0043] 分子生物学鉴定
[0044] 活化苦养尖抱镶抱化化巧打菌饼，菌饼直径为O = 5mm，将其接种到P的夜体