淡紫拟青霉孢子的保存方法
【专利摘要】本发明公开了淡紫拟青霉孢子的保存方法，它属于生防菌保存领域。本发明主要解决现有淡紫拟青霉保存时间短、成本高、孢子死亡率高的技术问题。本发明淡紫拟青霉孢子的保存方法是将淡紫拟青霉孢子和粉状多孔材料混合均匀，加水至含水量为20%~40%，密封在0℃~30℃条件下保存。将本发明方法淡紫拟青霉生防菌剂产品直接施放到土壤中使用即可，使用方法简单、方便，能很均匀的施放到土壤中。本发明采用简便的便于工业化使用方法提高产品的保质期，并且采用常温保存，冰点到30℃均可以，便于运输，能降低保存成本，常温保存1年以上，孢子萌发率大于80%，便于产品的推广使用。
【专利说明】淡紫拟青霉孢子的保存方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生防菌保存领域；具体涉及淡紫拟青霉孢子的保存方法。
【背景技术】
[0002] 近年来我国的植物线虫危害日益严重，植物线虫病是植物四大病害之一，同时线 虫病还还能引起枯萎病、根腐病等多种病害，给农业生产造成严重损失。目前采取的方法普 遍采用轮作防病、抗病育种、化学防治等方法，由于潜在的环境问题，涉及人类和动物健康， 杀线虫剂的使用受到很大的限制，同时防治的效果不是很好。由于淡紫拟青霉对于线虫的 防治的效果较好，还不会环境造成伤害，因而植物线虫的生物防治受到广泛重视，因此开发 高效稳定安全的生物杀线虫剂已迫在眉睫。生物防治由于安全、环保越来越受到人们的重 视，植物寄生线虫生防菌的研究和开发在这几年来有很大的发展。
[0003] 淡紫拟青霉（hVaci/HAs)是控制植物病原线虫的优良生防菌，同 时对多种土传尖孢镰刀菌引起的枯萎病等病害也具有防治作用。淡紫拟青霉，在国外己进 行登记和推广使用，在国内也己进行中试和小面积推广应用。淡紫拟青霉产品中的孢子数 量是生防真菌的生物学指标之一，淡紫拟青霉通常以孢子形态存在于基质中，当温度、湿 度、营养等条件适宜时萌发形成菌丝侵入寄主来实现其抗病作用。起作用的方式主要是通 过淡紫拟青霉活孢子的作用而实现的，因而产品中的淡紫拟青霉的孢子的成活率对产品使 用效果尤为重要。衡量产品的质量主要产品中的活孢子数。为开发高效的淡紫拟青霉制剂， 国内外学者选择农副产品作为营养基质，通过发酵提高拟青霉的孢子产量。虽然国内外科 研人员已将淡紫拟青霉室内培养或中试生产制成相应菌剂。但是对于产品中孢子保存方面 的研究较少。由于自身的生物学特性，淡紫拟青霉的孢子的抗逆性较差，容易死亡。因而影 响到产品的使用效果。
[0004] 目前淡紫拟青霉生产工艺有两种，液体深层发酵、固体发酵生产。通过微生物的发 酵技术生产出淡紫拟青霉的孢子，然后将孢子制成生防菌剂产品。
[0005] 采用冻干将含有孢子粉的菌种进行保存，成本很高，是我们技术的十倍以上，不便 于农业生产上应用，一般为实验室保存菌种中使用。
[0006] 还有一种存放方法是将含有孢子的物料利用海藻酸钙进行包埋，产品的成本很 高，产品呈液固混合物，不便于农业生产上应用，产品易破碎，而且使用不方便，不能很均匀 的施放到土壤中。
[0007] 现有普遍的做法为将制备好的孢子直接干燥或者吸附到河沙等载体上，干燥到含 水10%以下，然后低温保存，目前市场产品采用此方法，但是产品需要低温保存，不便于使 用及运输。
[0008] 综上所述，现有淡紫拟青霉保存方法的保质期短，孢子的死亡率高，而且保存成本 高，不便于运输、使用，不利于大面积的推广使用。
【发明内容】
[0009] 本发明要解决现有淡紫拟青霉保存时间短、成本高、孢子死亡率高的技术问题；而 提供了淡紫拟青霉孢子的保存方法。本发明采用一种简便的方法提高淡紫拟青霉产品的保 质期即提高淡紫拟青霉孢子的成活率。
[0010] 本发明中淡紫拟青霉孢子的保存方法是将淡紫拟青霉孢子和粉状多孔材料混合 均匀，加水至含水量为209Γ40%，密封在(TC?30°C条件下保存。 上述方法中将淡紫拟青霉孢子和粉状多孔材料混合使混合后的孢子数为5X108cfu/g至Ij2X109cfu/g。 toon] 所述的淡紫拟青霉孢子获得的方法按淡紫拟青霉生产方法分为两种。采用液体深 层发酵工艺孢子获取的方法是将经液体深层发酵的含有淡紫拟青霉孢子发酵原液经过离 心机离心，将得到的固体物质用无菌水洗涤后进行二次离心，得到淡紫拟青霉孢子。采用 固体发酵工艺孢子获取的方法是固体发酵的淡紫拟青霉用分样筛筛分，得到淡紫拟青霉孢 子。
[0012] 所述粉状多孔材料为粉状活性炭。
[0013] 所述粉状活性炭的含水在10%以下，粒度80目以上，比表面积在500m2/g以上。所 述粉状活性炭是由果壳或木炭制成的。
[0014] 将本发明方法淡紫拟青霉生防菌剂产品直接施放到土壤中使用即可，使用方法简 单、方便，能很均匀的施放到土壤中。
[0015] 本发明采用简便的便于工业化使用方法提高产品的保质期，并且采用常温保存， 冰点到30°C均可以，便于运输，能降低保存成本，常温保存1年以上，孢子萌发率大于80%， 便于产品的推广使用。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0016] 一：本实施方式中淡紫拟青霉孢子的保存方法是按最后孢子数为 5X108cfu/g的比例将淡紫拟青霉孢子和粉状椰果壳活性炭混合均勻，加水至含水量为 40%，密封在(T30°C条件下保存。本实施方式中活性炭的含水5%，粒度100目，比表面积为 600m2/g。
[0017] 本实施方式采用液体深层发酵工艺孢子获取的方法是将经液体深层发酵的含有 淡紫拟青霉孢子发酵原液经过离心机离心，将得到的固体物质用无菌水洗涤后进行二次离 心，得到淡紫拟青霉孢子。
[0018] 本实施方式的存放时间和萌发率结果见表1和2。
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【权利要求】
1. 淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征在于淡紫拟青霉孢子的保存方法是将淡紫拟青 霉孢子和粉状多孔材料混合均匀，加水至含水量为209Γ40%，密封在0°C?30°C条件下保存。
2. 根据权利要求1所述的淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征在于将淡紫拟青霉孢子 和粉状多孔材料混合使混合后的孢子数为5X 108cfu/g到2X 109cfu/g。
3. 根据权利要求1所述的淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征在于所述的淡紫拟青霉 孢子获得方法：固体发酵的淡紫拟青霉用分样筛筛分，得到淡紫拟青霉孢子。
4. 根据权利要求1所述的淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征在于所述的淡紫拟青霉 孢子获得方法：将经液体深层发酵的含有淡紫拟青霉孢子发酵原液经过离心机离心，将得 到的固体物质用无菌水洗涤后进行二次离心，得到淡紫拟青霉孢子。
5. 根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征 在于所述粉状多孔材料为粉状活性炭。
6. 根据权利要求5所述的淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征在于粉状活性炭的含水 在10%以下，粒度80目以上，比表面积在500m 2/g以上。
7. 根据权利要求5所述的淡紫拟青霉孢子的保存方法，其特征在于所述粉状活性炭是 由果壳或木炭制成的。
【文档编号】C12N1/04GK104263648SQ201410564788
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月22日 优先权日:2014年10月22日
【发明者】谷军, 高娃, 沙长青, 张小彦, 王玉文 申请人:黑龙江省科学院微生物研究所