专利名称：黑青霉及其代谢产物的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物及其代谢产物的培养生产方法。
背景技术：
黑青霉(Penicillium nigricans Bainier)是一种青霉属丝状真菌，天然存在于 土壤中，能抑制引起多种植物枯萎病等病害发生的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)的生 长繁殖，是西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、番茄枯萎病、辣椒枯萎病等多种植物枯萎病病原菌的 天然拮抗微生物。
发明内容
本发明目的在于提供一种黑青霉及其代谢产物的生产方法，通过工业化生产，大
量获取黑青霉菌体、孢子及其代谢产物的人工培养方法。 本发明的目的是通过以下措施实现的 黑青霉及其代谢产物的生产方法，其特征是生产过程如下 将重量份为0-13%豆饼粉、0-6.8%菜子饼粉、0. 5-6%小麦粉、0_4%硫酸铵、 0-0. 2%硫酸镁、0_0. 3%氯化钙、0_0. 4%磷酸氢二钾，上述原料投入发酵罐内，以自来水配 制培养基，调整ra为4. 5 5. 5，保持发酵罐内温度为12rC，压力为0. 12MPa，灭菌30 45分钟; 发酵罐降温，使罐内培养基质温度为32 35t:后，接种黑青霉，接种量占罐内培 养基的重量比为1 8. 5% ; 接种后，保持发酵罐压力为0.03 0. 1Mpa，连续向罐内通入无菌空气，通气量保 持在0. 4 0. 5VVM ; 液体培养时间约为3 5天，结束后，收集活菌及代谢产物，再进行干燥、浓縮、吸
附、蒸发，添加吸附剂，在胶体磨中碾磨，制得产品。 发酵罐压力控制为前期0. 04Mpa，中期0. 1Mpa，后期0. 03Mpa。 本发明与现有技术相比具有以下优点 黑青霉在生长过程中与病原菌争夺营养和空间，并分泌拮抗物质直接抑制尖孢镰 刀菌的生长，从而控制植物病害的发生，是一种生态有益微生物。由于其能在土壤中存活多 年，孢子的抗逆性很强且能在大田土壤中重复循环增殖，施用到植物和土壤后，能较长时间 的保持对植物病原菌尖孢镰刀菌产生抑制作用，因此是有很有前途的微生物源农药。可用 于防治农田葫芦科、茄科、禾本科等作物的枯萎病，有独特的效果，用量省、成本低、效果好、 专业性强、污染少、不伤害天敌、环境友好，因此是农林牧及园艺上的优良生物农药，有利于 人类可持续发展和生态平衡。 本发明生产方法，操作简便，生产过程不要高温、高压和易燃易爆原辅材料，也不 产生三废，同时利用现代微生物工艺技术能很容易实现室内工业化、规模化生产，生产条件 和生产过程容易人工调控，质量容易控制，产品能进行连续化、批量化生产，特别是作为生物农药使用的黑青霉制剂能大大降低生产和使用成本，提高产品单位效价，而且不同于一
般的制剂类生物农药，该制剂由活菌、孢子和代谢产物组成，施用到土壤和植物上后，活菌
和孢子能继续生长繁殖，并抑制病原菌，具有很高的经济价值和良好的应用前景。 为了提高生产率，本发明还对各类步骤工艺选择了适宜的相应条件，利于黑青霉
的生长。 生产方法简便，生产过程不需要高温、高压、易燃易爆原辅材料，无三废排放；产 品为培养基和活菌体、活孢子及次生代谢产物组成，不是提取的纯制剂，不需要提取醇化设 备，节省投资，同时产品使用到植物和土壤上后，活菌和活孢子能循环生长繁殖，持续控制 土传病害。本发明中接种所使用的黑青霉可以从有关高等院校、科研院所或科技公司购买。
具体实施例方式
现举两个实施例，进一步说明。
液体培养法 1、将0-13 %豆饼粉、0-6. 8 %菜子饼粉、0. 5-6 %小麦粉、0_4 %硫酸铵、0-0. 2 % 硫酸镁、0-0.3%氯化钙、0-0.4%磷酸氢二钾等上述原料投入发酵罐内，加入足量水份， 使培养料含水量约为80-99 % ，调整ra为4. 5-5. 5 ，保持发酵罐内温度为121°C ，压力为 0. 12MPa，灭菌30-45分钟。 2、发酵罐降温，使罐内培养基质温度为35t:后，接种黑青霉，接种量占罐内培养基 的重量比为1_8%。 3、接种后，保持发酵罐压力为0. 04MPa(前期)、0. lMPa(后期)、0. 03MPa(后期)， 连续向罐内通入无菌空气，通气量保持在0. 4-0. 5VVM。 4、液体培养时间约为3 5天，结束后，可进行干燥、浓縮、吸附、蒸发、胶体磨碾 磨，添加占产品总重10%吸附剂(300-400目碳酸钙)和占产品总重10%载体(粘土)及 不同助剂(1_2%洗衣粉)，在胶体磨中碾磨，制成产品。
权利要求
黑青霉及其代谢产物的生产方法，其特征是生产过程如下将重量份为0-13％豆饼粉、0-6.8％菜子饼粉、0.5-6％小麦粉、0-4％硫酸铵、0-0.2％硫酸镁、0-0.3％氯化钙、0-0.4％磷酸氢二钾，上述原料投入发酵罐内，以自来水配制培养基，调整PH为4.5～5.5，保持发酵罐内温度为121℃，压力为0.12MPa，灭菌30～45分钟；发酵罐降温，使罐内培养基质温度为32～35℃后，接种黑青霉，接种量占罐内培养基的重量比为1～8％；接种后，保持发酵罐压力为0.03～0.1Mpa，连续向罐内通入无菌空气，通气量保持在0.4～0.5VVM；培养过程中不断进行搅拌，搅拌速度初期30-50转/分，中期80-100转/分，后期30-40转/分。液体培养时间约为3～5天，结束后，收集活菌及代谢产物，再进行干燥、浓缩、吸附、蒸发，添加吸附剂，在胶体磨中碾磨，制得产品。
2. 根据权利要求1所述的生产方法，其特征是接种后，控制发酵罐压力控制为前期 0. 04Mpa，中期0. 1Mpa，后期0. 03Mpa。
3. 根据权利要求l所述的生产方法，其特征是所述吸附剂为碳酸钙、粘土或两者的混 合，吸附剂的添加量为产品总重的10-60 % 。
4. 根据权利要求1所述的生产方法，其特征是制得产品中还可以添加占产品总重 1-2%的助剂。
5. 根据权利要求4所述的生产方法，其特征是所述助剂为洗衣粉。
全文摘要
本发明提供一种黑青霉及其代谢产物的生产方法，通过工业化生产，大量获取黑青霉菌体、孢子及其代谢产物的人工培养方法。将培养基置入培养容器内，灭菌后，接种一定量的黑青霉，在一定的温度、湿度、压力、pH条件下，通以无菌空气，经一段时间培养后，将培养基质连同黑青霉菌体、孢子和次生带产物一起收集，制得产品。该生产方法简便，生产过程不需要高温、高压、易燃易爆原辅材料，无三废排放。
文档编号A01N63/04GK101735953SQ20091002593
公开日2010年6月16日 申请日期2009年3月13日 优先权日2009年3月13日
发明者吴洪生 申请人:南京信息工程大学