一种灵芝培养基以及灵芝的培养方法

一种灵芝培养基以及灵芝的培养方法
【专利摘要】本发明涉及食用菌培养领域，特别涉及一种灵芝培养基以及灵芝的培养方法。一种灵芝培养基，含有硒元素，硒元素在灵芝培养基中的质量浓度为5～60mg/L。本发明提供的灵芝培养基，通过在基本培养基中添加硒元素，培养得到的灵芝菌丝体生长状态佳，培养得到的灵芝菌丝体中含有硒元素，增加灵芝菌丝体的营养价值。本发明还提供了一种灵芝的培养方法，先对灵芝菌丝体进行硒元素的耐受驯化，得到适宜硒浓度耐受浓度的菌丝体，然后将该菌丝体保存作为原始菌种；将该菌丝体进行摇床培养，得到种子液，然后见种子液进行发酵，发酵产物分离纯化得到灵芝菌丝体。
【专利说明】
一种灵芝培养基以及灵芝的培养方法
技术领域
[0001] 本发明涉及食用菌培养领域，具体而言，涉及一种灵芝培养基以及灵芝的培养方 法。
【背景技术】
[0002] 灵芝属于担子菌类多孔菌科赤芝或紫芝的干燥子实体，是一种大型真菌，有"仙 草"、"瑞草"之称，自古以来就是我国传统的名贵药用真菌，具有滋补强壮、扶正固本的功 效。
[0003] 近代医学研究表明，灵芝中含有大量生物活性物质，如灵芝多糖、三萜、生物碱、有 机锗和腺苷类等，具有增强免疫力、促进新陈代谢、抗肿瘤、护肝、改善记忆力，促进睡眠，延 缓衰老等作用。灵芝多糖作为灵芝的主要生物活性成分，存在于天然灵芝子实体和菌丝体 中，具有很强的抗肿瘤、抗氧自由基、抗装老、提尚免疫力、活血化癖等生物活性。
[0004] 鉴于灵芝自身含有多种重要的生物活性物质，目前市场上出现名目繁多的灵芝产 品，由于灵芝天然子实体生产周期长，受气候影响大，产量及质量不稳定，且子实体木质化 程度高，多糖提取利用率较低。采用生物发酵技术生产菌丝体，周期短、成本低、产量大，且 具有工业化生产前景。然而现有的灵芝产品，无论从产品种类还是科技含量上来看，均迫切 需要进一步深化灵芝产业的开发及应用研究。
[0005] 有鉴于此，特提出本发明。

【发明内容】

[0006] 本发明的第一目的在于提供一种灵芝的培养基，该培养基不仅能增加灵芝的生长 速度，提高灵芝的产量，并且能提升灵芝的有效活性成分，使培养得到的灵芝菌丝体营养价 值更为丰富。
[0007] 本发明的第二目的在于提供一种灵芝的培养方法，该方法通过将灵芝先进行驯化 后再进行培养，使驯化的灵芝能很好的适应培养基的环境，通过特定的发酵条件控制，更好 的增加灵芝的营养价值。
[0008] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0009] -种灵芝培养基，含有硒元素，所述硒元素在所述灵芝培养基中的质量浓度为5~ 60mg/L〇
[0010] 本发明提供的灵芝培养基，通过在基本培养基中添加硒元素，培养得到的灵芝菌 丝体生长状态佳，培养得到的灵芝菌丝体中含有硒元素，增加灵芝菌丝体的营养价值。
[0011] 其中基本培养基可以为现有市场上的灵芝培养基，如PDA培养基等。
[0012] 灵芝对硒元素较为敏感，因此，一般并不被用来添加到培养基来培养灵芝。但是，
【申请人】发现，可通过逐步驯化的方式来使得灵芝耐受不同浓度的硒浓度。不同浓度的硒元 素对灵芝菌丝体的影响不同，若硒浓度太高，如硒在培养基中的质量浓度高于80mg/L，则灵 芝菌丝体在培养过程中会逐渐死亡；而硒元素的浓度太低，如低于5mg/L，则对灵芝菌丝体 的生长促进作用基本无作用。因此，硒元素在灵芝培养基中的质量浓度为5~60mg/L，即适 当浓度的硒既能保证灵芝菌丝体的生长状态，又能使培养得到的灵芝菌丝体中含有一定含 量的硒元素，增加灵芝菌丝体的营养价值。其中，尤以硒元素在灵芝培养基中的质量浓度为 20~30mg/L效果更佳。
[0013] 进一步地，所述硒元素以含硒物质的方式添加，所述含硒化合物包括亚硒酸钠、硒 酸钠、硒矿粉、氨基酸硒中的任一种或多种。经验证，这四种含硒物质添加到灵芝培养基中， 不仅能达到促进灵芝菌丝体增殖的作用，并且均能很好的转化为人体可利用的植物活性 硒。其中，氨基酸硒主要为硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸。
[0014] 进一步地，所述灵芝培养基还含有药食同源植物水提液，所述药食同源植物水提 液在所述灵芝培养基中的体积百分比为1%~6%。药食同源植物水提液不仅具有一定的药 用价值，并且营养成分更为丰富，为灵芝菌丝体的生长提供营养成分，促进灵芝菌丝体的生 长，并丰富灵芝菌丝体的营养价值。
[0015]但是，若是药食同源植物水提液在灵芝培养基中含量过多，则培养基提供的必需 元素欠缺而影响灵芝菌丝体的生长，经多次验证，药食同源植物水提液在灵芝培养基中的 体积百分比为1%~6%效果佳。如可以为1%、2%、3%、4%、5%、6%等等。
[0016] 药食同源植物水提液可按照现有的技术制得，也可以采用以下方式制备:将药食 同源植物粗粉一般在40-80目，加水煎煮2-3次，每次煎煮20-35min，取滤液，合并滤液;将滤 液浓缩1-1.5倍后，加乙醇至醇含量达50 %-55 %，静置8h以上；然后过滤，回收乙醇，至无 醇，然后静置后用〇. 22-0.35微米的滤膜过滤，得到药食同源植物水提液。
[0017] 该方法制得的药食同源植物水提液不含化学成分，且尽量保留了原药食同源植物 的营养成分。
[0018] 进一步地，所述药食同源植物包括丁香、八角茴香、山药、甘草、白芷、白果、龙眼 肉、决明子、百合、肉豆蔻、肉桂、沙棘、罗汉果、郁李仁、金银花、青果、鱼腥草、姜、枳犋子、枸 杞子、栀子、砂仁、胖大海、茯苓、香橼、香薷、菊花、荷叶、紫苏籽、葛根、橘皮、薄荷、藿香、黄 精中的任一种或多种。
[0019] 在筛选中发现，有些药食同源植物水提液添加到灵芝培养基中，并没有明显效果。 经大量筛选，上述种类的药食同源植物水提液均能与硒元素很好的配合，达到明显的促进 灵芝菌丝体的生长，并能增加灵芝菌丝体的活性成分。其中，药食同源植物更优选为丁香、 甘草、罗汉果、金银花、茯苓、菊花、荷叶、薄荷中的任一种或多种。
[0020] 灵芝培养基的基本培养基可以为现有的灵芝培养基，如现有的PDA培养基，这种培 养基的主要成分为马铃薯、葡萄糖。但实验发现，在以原始的PDA培养基的基础上，添加特定 含量的磷酸二氢钾、硫酸镁、碘化钾、硫酸锌、维生素 B1以及维生素 B6,并调整各成分的配 比，能更好的与硒元素以及药食同源植物水提液配合，达到更好的促进灵芝菌丝体的生长， 并增加药食同源植物水提液中的有效活性成分的转化，增加灵芝菌丝体的营养价值。
[0021 ]优选地，按每升PDA培养基计，所述PDA培养基的主要成分为：
[0022] 250-300g去皮马铃薯加水煮沸后的滤液，葡萄糖25-30g，磷酸二氢钾2.5-3.0g，硫 酸镁 2-2 · 5g，碘化钾0 · 02-0 · 03g，硫酸锌 0 · 005-0 · 008g，维生素 B1 0 · 002-0 · 005g，维生素 B6 0·002-0·005g，pH为6·5-6·8。
[0023] PDA培养基按照以下方式制备：
[0024] 取250-300g去皮马铃薯，切块后加水，煮沸15-30min，用纱布过滤，得到滤液；
[0025] 在滤液中加葡萄糖25-30g、磷酸二氢钾2.5-3.0g、硫酸镁2-2.5g、KI0.02-0.03g、 硫酸锌 0 · 005-0 · 008g、维生素 B1 0 · 002-0 · 005g、维生素 B60 · 002-0 · 005g;
[0026] 调节 pH至 6.5-6.8,定容至 1L;
[0027] 另外，若PDA培养基为固体培养基，每升添加琼脂粉18_20g。
[0028] 配置完成的PDA培养基，121°C灭菌10_15min，冷却至室温后即可使用。
[0029] 本发明还提供了一种灵芝的培养方法，包括以下步骤：
[0030] (a)、将灵芝菌丝体在不同浓度的权利要求1中所述的含硒培养基上逐步驯化，得 到耐受浓度下的富硒灵芝菌丝体，保存作为原始菌种；
[0031 ] (b)、将所述原始菌种接种至相应硒浓度的权利要求3-5任一项所述的灵芝培养基 上进行培养，得到液体种子液；
[0032] (c)、将所述液体种子液采用与步骤(b)同样的培养基进行发酵得到发酵产物；
[0033] (d)、将所述发酵产物进行分离纯化，得到灵芝菌丝体，干燥得到成品。
[0034] 本发明提供的灵芝的培养方法，先对灵芝菌丝体进行硒元素的耐受驯化，得到适 宜硒浓度耐受浓度的菌丝体，然后将该菌丝体保存作为原始菌种;将该菌丝体进行摇床培 养，得到种子液，然后见种子液进行发酵，发酵产物分离纯化得到灵芝菌丝体。
[0035] 由于灵芝孢子还需要萌发，对其进行硒浓度的驯化效果不佳;而灵芝菌丝体，对外 界的敏感性比较一致，因此，采用不同浓度硒的灵芝培养基对菌丝体进行逐步驯化，得到适 宜硒浓度耐受状态下的灵芝菌丝体，进而为种子液的发酵提供良好的基础。
[0036] 其中，灵芝菌丝体的驯化的硒浓度依次为2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、 40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L、80mg/L，但是当硒浓度为70mg/L时，培养后可见部分死亡； 当硒浓度为80mg/L时，培养后可见大部分死亡。因此，灵芝菌丝体的可耐受硒浓度为2- 60mg/L。根据培养的需要，驯化得到相应硒浓度耐受的灵芝菌丝体。如得到的灵芝菌丝体的 耐受硒浓度可以为5111〖凡、1〇11^凡、2〇11^凡、3〇11^凡、4〇11^凡、5〇11^凡、6〇11^凡等等。
[0037] 为了使菌丝体充分的耐受某浓度的硒浓度，并能筛选出相应耐受硒浓度的菌种， 优选地，在步骤(a)中，在每个不同浓度的含硒固体培养基上培养3-4天，培养的温度为20- 23°C。以每升液体培养基计，固体培养基是在液体培养基成分的基础上添加浓度为18-20g 的琼脂粉或琼脂条。
[0038] 将耐受浓度下的富硒灵芝菌丝体进行培养，以大量扩增，得到液体种子液，优选 地，在步骤(b)中，培养的温度为24-26 °C，培养转速为90-110r/min。以该温度和转速培养， 菌丝体生长状态佳。原始菌种的接种量一般按照常规的接种量进行，一般100mL培养液接种 一环菌种;步骤(b)培养的时间为3-5天。
[0039] 为了使灵芝培养基中的活性成分充分的被灵芝菌液吸收和转化，优选地，步骤(c) 中，所述发酵的时间为10-12天，发酵分为三个阶段：
[0040] 第一阶段为：发酵开始后的3-5天内，培养的温度为24-26Γ，转速为100-120Γ/ min；
[0041] 第二阶段为：发酵开始后的8-10天内，培养的温度为17-20°C，转速为80-100r/ min；
[0042] 第三阶段为：发酵开始后的10-12天内，培养的温度为28-30°C，转速为130-150r/ min〇
[0043] 其中，步骤(c)中，液体种子液的发酵液体积增加8-10倍。
[0044] 通过不同温度条件下的发酵组合，灵芝菌丝体生长速度适当，充分的吸收和转化 灵芝培养基中的活性成分，明显增加了发酵得到的灵芝菌丝体的营养价值。
[0045] 本发明利用现代技术通过液体发酵生产灵芝菌丝体，对发酵工艺进行探索，将灵 芝接种在药食同源的植物提取物基质上，在发酵生产灵芝菌丝体的同时，菌丝发酵产生的 酶能有效催化药食同源提取液的化学成分发生转化，产生有功效的成分，使发酵得到的菌 丝体的生物活性发生改变，具备新的活性。本发明采用液体发酵所需时间短、生产量大、生 物活性成分多，整个过程不添加其他化学成分，得到的灵芝菌丝体安全性好，功效强，质量 稳定，生产过程易于监控，工厂化产业化程度高。
[0046] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0047] (1)本发明提供了一种灵芝培养基，通过在基本培养基中添加硒元素，培养得到的 灵芝菌丝体生长状态佳，培养得到的灵芝菌丝体中含有硒元素，增加灵芝菌丝体的营养价 值。
[0048] (2)本发明提供的灵芝培养基中还可以添加药食同源植物水提液，并限定添加量， 不仅使培养得到的灵芝成品具有一定的药用价值，并且营养成分更为丰富，为灵芝菌丝体 的生长提供营养成分，促进灵芝菌丝体的生长，并丰富灵芝菌丝体的营养价值。
[0049] (3)本发明还限定了药食同源植物的种类，以使发酵结果更优。
[0050] (4)本发明还提供了灵芝的培养方法，先对灵芝菌丝体进行硒元素的耐受驯化，得 到适宜硒浓度耐受浓度的菌丝体，然后将该菌丝体保存作为原始菌种，实现了灵芝在硒含 量培养基上的生长;通过培养种子液和发酵，发酵产物分离纯化得到灵芝菌丝体，得到的灵 芝菌丝体性状以及营养价值均优于市售产品。
【具体实施方式】
[0051] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售购买获得的常规产品。
[0052] 实施例1
[0053] 对灵芝菌丝体基本培养基进行筛选：
[0054] a:取200g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液;在滤液 中加葡萄糖20g，定容至1L;于121°C灭菌lOmin，灭菌完成后，冷却至室温，在超净台内分装 至500mL三角瓶中，每个三角瓶中盛有200mL培养液；
[0055] b:取250g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸15min，用纱布过滤，得到滤液;在滤液 中加葡萄糖25g、磷酸二氢钾2.5g、硫酸镁2g、KI 0.02g、硫酸锌0.005g、维生素 B1 0.002g、 维生素 B6 0.002g;调节pH至6.5，定容至1L;于121 °C灭菌lOmin，灭菌完成后，冷却至室温， 在超净台内分装至500mL三角瓶中，每个三角瓶中盛有200mL培养液；
[0056] c:取300g去皮马铃薯，切块后加水，煮沸30min，用纱布过滤，得到滤液;在滤液中 加葡萄糖30g、磷酸二氢钾3.0g、硫酸镁2.5g、KI 0.03g、硫酸锌0.008g、维生素 B1 0.005g、 维生素 B6 0.005g;调节pH至6.8，定容至11^;于121<€灭菌15111；[11，灭菌完成后，冷却至室温， 在超净台内分装至500mL三角瓶中，每个三角瓶中盛有200mL培养液；
[0057] d:取200g去皮马铃薯，切块后加水，煮沸30min，用纱布过滤，得到滤液;在滤液中 加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2.0g、MgS〇4 · 7H2〇 lg、维生素 B微量;调节pH至6.0,定容至1L;于 121°C灭菌15min，灭菌完成后，冷却至室温，在超净台内分装至500mL三角瓶中，每个三角瓶 中盛有200mL培养液；
[0058] 将a、b、c、d培养基分别接种同量的灵芝菌丝体，接种量为两环，每种培养基做三个 平行试验，均于28°C条件下，以转速为150r/min培养5天，然后分离干燥得到每个三角瓶的 灵芝菌丝体的干重，求均值，得到每种培养基的灵芝菌丝体的干重，误差均在5%以内。具体 结果如表1所示。
[0059] 表1不同培养基培养得到的灵芝菌丝体干重 「00601
[0061 ]从表1可以看出，b和c培养基更适合灵芝菌丝体的生长。
[0062] 实施例2
[0063]经预实验发现，未经驯化的灵芝菌丝体在液体含硒灵芝培养基上生长，容易死亡， 因此，选择固体含硒灵芝培养基对灵芝菌丝体进行驯化。
[0064]以实施例1中的b培养基作为基本培养基，分别配置硒含量为2mg/L、5mg/L、10mg/ L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L、80mg/L 的含硒固体灵芝培养基；
[0065] 经预实验发现，灵芝菌丝体在含硒灵芝培养基上生长，温度太高和太低则灵芝菌 丝体生长状态不佳，其中，较佳生长温度为20_23°C。
[0066] 将灵芝菌丝体按浓度由低到高依次接种至含硒固体灵芝培养基上逐步驯化，每个 浓度的含硒固体培养基上培养4天，培养的温度为20°C，然后保存每个硒浓度培养基上的灵 芝菌丝体。观察灵芝菌丝体在不同硒浓度固体培养基上的生长状态。结果发现，经过逐步培 养后，在硒浓度为2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L的固体培养基上生长的灵芝菌丝体 生长状态佳，40mg/L的固体培养基上生长的灵芝菌丝体生长状态良好，50mg/L和60mg/L的 固体培养基上生长的灵芝菌丝体生长状态较差，70mg/L的固体培养基上生长的灵芝菌丝体 部分死亡，80mg/L的固体培养基上生长的灵芝菌丝体大部分死亡。
[0067] 考虑到灵芝菌丝体的生长状态以及灵芝菌丝体中的硒含量，以灵芝培养基的硒含 量为20~30mg/L为佳。
[0068] 实施例3
[0069] 药食同源植物水提液对灵芝菌丝体的生长影响
[0070] 将耐硒20mg/L浓度的灵芝菌丝体进行液体培养，培养的温度为28°C，摇床的转速 为150r/min，发现，菌丝体的生长状态较差；又将培养温度改为25°C，摇床的转速为100r/ min，发现，菌丝体的生长状态较佳;而培养温度更低则不利于菌丝体的增殖，因此，最终选 择培养条件为:培养温度为24-26 °C，培养转速为90-11 Or/min。
[0071]取实施例2中得到的保存作为原始菌种的耐硒浓度为20mg/L和30mg/L的灵芝菌丝 体备用，同时制备耐硒浓度为25mg/L的灵芝菌丝体备用。
[0072]配置含有药食同源植物水体液的液体灵芝培养基：
[0073]培养基1:取250g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸15min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖25g、磷酸二氢钾3.0g、硫酸镁2.5g、KI 0.02g、硫酸锌0.005g、维生素 B1 0.002g、维生素 B6 0.005g，亚硒酸钠37.98mg，丁香水提液10mL，调节pH至6.6，定容至1L; [0074]培养基2:取280g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸15-30min，用纱布过滤，得到滤 液;在滤液中加葡萄糖28g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.48、1(10.038、硫酸锌0.008 8、维生素 B1 0 · 005g、维生素 B6 0 · 002g，硒代半胱氨酸63 · 849mg，甘草水提液20mL，调节pH至6 · 6，定 容至1L;
[0075]培养基3:取300g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸30min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖30g、磷酸二氢钾3.0g、硫酸镁2.5g、KI 0.02g、硫酸锌0.005g、维生素 B1 0.002g、维生素 B6 0.002g，硒代半胱氨酸42.566mg，罗汉果水提液30mL，调节pH至6.7，定容 至1L;
[0076]培养基4:取260g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸15min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖25g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2g、KI0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.003g、维生素 B6 0.003g，硒代半胱氨酸53.2lmg，金银花水提液60mL，调节pH至6.6，定容 至1L;
[0077]培养基5:取270g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.7g、硫酸镁2g、KI0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.004g、维生素 B6 0.003g，亚硒酸钠30.385mg，茯苳水提液40mL，调节pH至6.8，定容至1L; [0078]培养基6:取270g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸30min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0 · 003g、维生素 B6 0 · 003g，硒代蛋氨酸49 · 687mg，菊花水提液50mL，调节pH至6 · 6，定容至 1L；
[0079]培养基7 :取260g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.003g、维生素 B6 0.003g，亚硒酸钠30.385mg，荷叶水提液60mL，调节pH至6.6，定容至1L; [0080]培养基8:取270g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸18min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.003g、维生素 B6 0.003g，硒代蛋氨酸74.53mg，薄荷水提液30mL，调节pH至6.6，定容至1L; [0081 ]培养基9:取260g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.003g、维生素 B6 0.003g，硒酸钠47.86mg，山药水提液30mL，调节pH至6.7，定容至1L; [0082]培养基10:取280g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸25min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖30g、磷酸二氢钾3.0g、硫酸镁2.5g、KI 0.03g、硫酸锌0.008g、维生素 B1 0.005g、维生素 B6 0.005g，亚硒酸钠37.39mg，橘皮水提液40mL，调节pH至6.8，定容至1L; [0083]对照组1:取260g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.003g、维生素 B6 0.003g，亚硒酸钠30.385mg;
[0084]对照组2:取260g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 Ο · 003g、维生素 B6 Ο · 003g，亚硒酸钠37 · 98mg;
[0085] 对照组3:取260g去皮马铃薯，切小块后加水，煮沸20min，用纱布过滤，得到滤液； 在滤液中加葡萄糖27g、磷酸二氢钾2.8g、硫酸镁2.3g、KI 0.03g、硫酸锌0.006g、维生素 B1 0.003g、维生素 B6 0.003g，亚硒酸钠45.58mg;
[0086] 将培养基1-10和对照组1-3培养基于121°C灭菌15min，灭菌完成后，冷却至室温后 即可使用。
[0087] 将不同耐硒浓度的灵芝菌丝体分别按照硒浓度相应接种至培养基1-10和对照组 培养基中，每200ml培养基中接种量均为两环，并保持每个培养基中的接种量一致。然后进 行摇床培养，培养的温度为25°C，培养转速为100r/min，培养的时间为5天，得到液体种子 液。
[0088] 得到的液体种子液中菌丝球细小，中实，其中，培养基1-10培养得到的种子液中的 菌丝分枝密度明显比对照组培养基高，均无杂菌污染，菌丝球的湿重占发酵液的比重如表2 所示。
[0089]表2菌丝球的湿重占发酵液的比重
[0090]
[0091] 从表2可以看出，采用添加有药食同源植物水提液的培养基培养得到的灵芝性能 更为优良，并且产量也得到明显提升。
[0092] 实施例4
[0093]将实施例3中的培养基3得到的液体种子液中的菌丝球均分为8份，每份接入与实 施例3相同的培养基中进行发酵培养，发酵的时间均为10天，发酵的条件分为以下四组： [0094]组1:发酵条件为：以温度25°C，转速为100r/min培养；
[0095]组2:发酵条件为：以温度18°C，转速为80r/min培养；
[0096]组3:发酵条件为：以温度28°C，转速为130r/min培养；
[0097]组4:发酵分为三个阶段：
[0098]第一阶段为:发酵开始后的3天内，培养的温度为25°C，转速为lOOr/min;
[0099] 第二阶段为:发酵开始后的4-8天，培养的温度为18°C，转速为80r/min;
[0100] 第三阶段为:发酵开始后的9-10天，培养的温度为28°C，转速为130r/min。
[0101] 将发酵培养得到的发酵产物分离纯化，得到灵芝菌丝体，干燥得到成品。分别称量 发酵产物湿重以及成品的重量，得到的结果如表3所示。
[0102] 表3发酵结果
[0103]
[0104]从表3可以看出，采用本发明提供的三个不同阶段进行发酵，明显提升了灵芝的成 品量，并且得到的灵芝菌丝体更密实，含水量适当。
[0105] 同样地，将实施例3中其他培养基得到的种子液采用同样的方法培养，得到一致的 效果。说明，采用本发明提供的三个不同阶段进行发酵，发酵的产量和品质均有明显提升。
[0106] 另外，将采用三个阶段发酵得到的灵芝菌丝体成品测定胞内灵芝多糖、三萜类化 合物的含量以及硒含量，实施例3中的相应培养基的标号对应相同的编号，同时以实施例1 中的b培养基得到的灵芝菌丝体作为对照组4。具体结果如表4所示。
[0107] 表4成分含量
[0108]
[0110] 从表4可以看出，本发明提供的灵芝的培养方法得到的灵芝成品中胞内多糖和三 萜类化合物明显高于对照组，并且硒转化率较高。
[0111] 此外，还对干燥得到的成品进行比较，采用本发明提供的含有药食同源植物水提 物发酵得到的灵芝成品香味更浓郁，并掺杂其他药食同源植物的味道，香味怡人，纹路细 腻，色泽适宜。
[0112] 并经食用验证，采用本发明提供的培养基发酵得到的灵芝成品效果优于市售灵芝 产品，说明本发明发酵得到的灵芝成品营养价值更为丰富。
[0113] 另外，本发明还采用以下发酵方式：
[0114] 第一种发酵方式：
[0115] 发酵的时间为12天，发酵分为三个阶段：
[0116] 第一阶段为:发酵开始后的5天内，培养的温度为24°C，转速为lOOr/min;
[0117] 第二阶段为:发酵开始后的6-10天，培养的温度为17°C，转速为80r/min;
[0118] 第三阶段为:发酵开始后的11-12天，培养的温度为28°C，转速为130r/min。
[0119] 第二种发酵方式：
[0120] 发酵的时间为11天，发酵分为三个阶段：
[0121]第一阶段为:发酵开始后的4天内，培养的温度为26°C，转速为120r/min;
[0122] 第二阶段为:发酵开始后的5-9天，培养的温度为20°C，转速为lOOr/min;
[0123] 第三阶段为:发酵开始后的10-11天，培养的温度为30°C，转速为150r/min。
[0124] 发酵效果与实施例4中的三个阶段的发酵结果一致。
[0125] 尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的 精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中 包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
【主权项】
1. 一种灵芝培养基，其特征在于，含有硒元素，所述硒元素在所述灵芝培养基中的质量 浓度为5~60mg/L。2. 根据权利要求1所述的灵芝培养基，其特征在于，所述硒元素在所述灵芝培养基中的 浓度为20~30mg/L。3. 根据权利要求1所述的灵芝培养基，其特征在于，所述硒元素以含硒物质的方式添 加，所述含硒化合物包括亚硒酸钠、硒酸钠、硒矿粉、氨基酸硒中的任一种或多种。4. 根据权利要求1所述的灵芝培养基，其特征在于，所述灵芝培养基还含有药食同源植 物水提液，所述药食同源植物水提液在所述灵芝培养基中的体积百分比为1%~6%。5. 根据权利要求4所述的灵芝培养基，其特征在于，所述药食同源植物包括丁香、八角 茴香、山药、甘草、白芷、白果、龙眼肉、决明子、百合、肉豆蔻、肉桂、沙棘、罗汉果、郁李仁、金 银花、青果、鱼腥草、姜、枳犋子、枸杞子、栀子、砂仁、胖大海、茯苓、香橼、香薷、菊花、荷叶、 紫苏籽、葛根、橘皮、薄荷、藿香、黄精中的任一种或多种。6. 根据权利要求4所述的灵芝培养基，其特征在于，所述灵芝培养基的基本培养基为 PDA培养基； 按每升PDA培养基计，所述PDA培养基的主要成分优选为： 250-300g去皮马铃薯加水煮沸后的滤液，葡萄糖25-30g，磷酸二氢钾2.5-3.0g，硫酸镁 2-2 · 5g，碘化钾0 · 02-0 · 03g，硫酸锌0 · 005-0 · 008g，维生素 B1 0 · 002-0 · 005g，维生素 B6 0·002-0·005g，pH为6·5-6·8。7. -种灵芝的培养方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 、将灵芝菌丝体在不同浓度的权利要求1中所述的含硒培养基上逐步驯化，得到耐 受浓度下的富硒灵芝菌丝体，保存作为原始菌种； (b) 、将所述原始菌种接种至相应硒浓度的权利要求3-5任一项所述的灵芝培养基上进 行培养，得到液体种子液； (c) 、将所述液体种子液采用与步骤(b)同样的培养基进行发酵得到发酵产物； (d )、将所述发酵产物进行分离纯化，得到灵芝菌丝体，干燥得到成品。8. 根据权利要求7所述的灵芝的培养方法，其特征在于，在步骤(a)中，在每个不同浓度 的含硒固体培养基上培养3-4天，培养的温度为20-23 °C。9. 根据权利要求7所述的灵芝的培养方法，其特征在于，在步骤(b)中，培养的温度为 24-26 °C，培养转速为90-11 Or/min。10. 根据权利要求7所述的灵芝的培养方法，其特征在于，在步骤(c)中，所述发酵的时 间为10-12天，发酵分为三个阶段： 第一阶段为:发酵开始后的3-5天内，培养的温度为24-26 °C，转速为100_120r/min; 第二阶段为:发酵开始后的8-10天内，培养的温度为17-20 °C，转速为80-100r/min; 第三阶段为:发酵开始后的10-12天内，培养的温度为28-30 °C，转速为130-150r/min。
【文档编号】C12N1/14GK105838620SQ201610181868
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月28日
【发明人】黄海军, 马平
【申请人】北京七巧时代科技有限公司