一种盐酸普拉克索的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种盐酸普拉克索的药物组合物及其医药用途，本发明提供的盐酸普拉克索的药物组合物中含有盐酸普拉克索和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，盐酸普拉克索、化合物(Ⅰ)单独作用时，对急性咽炎具有治疗作用；盐酸普拉克索和化合物(Ⅰ)联合作用时，对急性咽炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗急性咽炎的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种盐酸普拉克索的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸普拉克索的新用途，具体涉及盐酸普拉克索 的药物组合物及其在急性咽炎中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸普拉克索被用来治疗特发性帕金森病的体征和症状，单独或与左旋多巴联 用。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种盐酸普拉克索的药物组合物，该药物组合物中含有盐 酸普拉克索和一种天然产物，盐酸普拉克索和该天然产物可以协同治疗急性咽炎。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物a)，
[0006]
[0007] -种盐酸普拉克索的药物组合物，包括盐酸普拉克索、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将洪连粉碎，用70~80%乙醇 热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取， 分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物用 大孔树脂除杂，先用15 %乙醇洗脱6个柱体积，再用70 %乙醇洗脱10个柱体积，收集70 %洗 脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 纯的化合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗急性咽炎的药物中的应用。
[0015] 上述盐酸普拉克索的药物组合物在制备治疗急性咽炎的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的盐酸普拉克索的药物组合物中含有盐酸普拉克索和一种结构新颖 的天然产物，盐酸普拉克索和该天然产物单独作用时，对急性咽炎具有治疗作用;二者联合 作用时，对急性咽炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗急性咽炎的药物。本发明与现 有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021]分离方法：（a)将洪连（2kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取（20L X 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水饱和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱10 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱 体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积)和2:1 (5个柱 体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为72%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0022] 结构确证:HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 251.1936,结合核磁特征可得分子式为 C16H26O2，不饱和度为4。核磁共振氢谱数据δΗ(ppm，pyridine_d5，500MHz):H_2a(2 ·41，m)，H-2b(2.56，m)，H-3(2.17，m)，H-3(2.35，ddd，J=13.2,4.8,2.2Hz)，H-5(1.97，d，J=10.4Hz)， H-6(3.58，t，J=10.4Hz)，H-7(1.49，m)，H-8(1.15，dddd，J=13.2，12.8，12.4,3.0Hz)，H-9 (1.04，ddd，J=13.2，12.6,3.3Hz)，H-9(1.81，ddd，J=12.6,3.6,3.0Hz)，H-ll(2.18，m)，H-12(0.89，d，J = 6.8Hz)，H-13(0.91，d，J = 6.8Hz)，H-14(0.77，s)，H-15(4.77，s)，H-15 (4.89,8)，6-0〇13(3.15,8) ;核磁共振碳谱数据3。(？?111，？74(^116-(15，1251抱） ：219.5((：，1-C)，33.2(CH2,2-C)，35.7(CH2,3-C)，145.1(C，4-C)，51.4(CH，5-C)，75.1(CH，6-C)，46.7(CH， 7-C)，18.9(CH2,8-C)，36.8(CH2,9-C)，42.9(C，10-C)，25.1(CH，11-C)，15.8(CH 3，12-C)， 21.4(CH3，13-C)，11.8(CH3，14-C)，108.3(CH2，15-C)，52.9(CH3,6-0CH3)。该化合物的氢谱中 显示了两个双峰甲基5 11〇.89((1，1 = 6.8他）和0.91((1，1 = 6.8他）以及一个单峰甲基511〇.77。 同时还可以观察到一个末端双键质子信号δΗ4.77和4.89,以及一个含氧次甲基质子信号δ Η3.58 (t，J = IO . 4Hz)。在该化合物的碳谱中，结合化合物的HSQC谱，可以观察到16个碳信 号，包括四个甲基(一个甲氧基），五个亚甲基(一个烯属亚甲基），四个次甲基(一个含氧碳） 以及三个季碳(一个羰基碳和一个连氧季碳）。通过以上的信息可以推测出该化合物可能为 一个倍半砲类化合物。通过查阅文献，发现该新化合物和已知化合物6a-methoxyeudesm_4 (15)-en-li3-〇l具有相似的结构。比较两者的核磁数据可以发现，该化合物仅仅在C-I位附 近的信号和已知化合物6a-methoxyeudesm-4(15)-en-10-〇l存在着很大的区别。结合核磁 以及高分辨信号可以推测出，该化合物可能为6a-methoxyeudesm-4(15)-en-10-〇l的C-I位 羟基氧化的产物。进一步的HMBC谱解析，H-2/C-l，H-5/C-l以及H-14/C-1的相关性说明该化 合物在C-I位是一个羰基。NOESY谱中，H-5与H-7以及H-6与H-14的相关信号可以推断出该化 合物具有和已知化合物6a-methoxyeudesm-4(15)-en-10-〇l相同的相对构型。综合氢谱、碳 谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立 体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0023] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024]
[0025] 实施例2:药理作用
[0026]本实施例采用氨水连续3d对大鼠咽部喷雾法建立急性咽炎动物模型，测定大鼠中 性粒细胞数量、血清中白细胞介素-liHlL-Ιβ)、白细胞介素-6(IL_6)和肿瘤坏死因子-a (TNF-a)的表达，观察药物对急性咽炎的治疗作用。
[0027] 1、材料与方法
[0028] 1.1动物
[0029] Wistar大鼠，体重(250±20)g，雌雄各半，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提 供。
[0030] 1.2试剂与样品
[0031 ]盐酸普拉克索购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。醋酸地塞米松片(上海信谊药厂有限公司）。白细胞介素_1β( IL-Ιβ)、白细胞介素-6(IL_ 6)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)酶联免疫试剂盒(均购于上海酶联生物科技有限公司）。
[0032] 1.3仪器
[0033] 7080型全自动生化分析仪（日本日立），BX53型双目生物显微镜（日本Olympus)，中 佳KDC-1042型低速离心机（中国中科）。
[0034] 1.4大鼠分组及模型制备
[0035] 60只大鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组，模型对照组、阳性对照组 (地塞米松，5mg · kg^1)和盐酸普拉克索组(80mg · kg"1)、化合物（I)组(80mg · kg^1)、盐酸普 拉克索与化合物（I)组合物组【40mg · kg^1盐酸普拉克索+40mg · kg^1化合物（I)】。除空白组 外，其余5组于第1~3天上、下午各用15%氨水喷大鼠咽部1次，每次用喷雾器喷3下，相当于 6yL 15%氨水留在大鼠咽部。空白组咽部喷蒸馏水。分别对动物造模后出现的一般症状、体 征以及咽部病理形态学等方面进行考察，以评价动物造模是否成功。造模成功后，进行药物 治疗。给药方式为阳性对照组ig 5mg · kg+1的地塞米松，每天1次，连续5d;空白组及模型组 每天ig蒸馏水IOmL · kg+1。药物组灌胃上述剂量的药物，每日1次，连续给药5d。
[0036] 1.5大鼠中性粒细胞计数
[0037]各组大鼠于末次给药后24h，从大鼠腹主动脉取血处死动物，血液样本分别保存在 真空取血管及一次性EP管中，分别用于中性粒细胞计数及炎性因子检测。
[0038] 1.6大鼠血清制备及测定
[0039] 取大鼠腹主动脉血2mL，注入EP管待凝固后，4°C3000r · min-1离心10min，分离血 清。至-70°C冰箱保存。测定前使样本于室温复融(避免反复冻融），再次于4°C3000r · rniiT1 离心5min，取血清，用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中IL-li3，IL-6和TNF-α水平，操作依 据试剂盒说明进行。
[0040] 1.7统计学方法
[00411本实验采用SPSS18.0统计软件分析数据，P<0.05为差异具有统计学意义。
[0042] 2、实验结果
[0043] 2.1对急性咽炎模型大鼠中性粒细胞数的影响
[0044]与空白对照组比，模型对照组大鼠中性粒细胞数量明显减少(P<0.01)，说明造模 成功；与模型对照组相比，阳性对照组大鼠中性粒细胞明显增加(P<〇. Ol);与模型对照组 比，盐酸普拉克索组、化合物（I)组大鼠中性粒细胞数量明显增加(P<〇.01);与模型对照组 相比，盐酸普拉克索与化合物(I)组合物组大鼠中性粒细胞明显增加(P<〇. Ol)。见表1。
[0045] 2.2对急性咽炎模型大鼠血清中IL-Ιβ，IL-6，TNF-a含量的影响
[0046] 与空白对照组比，模型对照组大鼠血清中IL-Ιβ，IL-6，TNF-a含量均明显增加(P< 〇.Ol)，说明造模成功；与模型对照组相比，阳性对照组大鼠血清中IL-Ιβ，IL-6，TNF-a含量 均明显降低(P<〇.01);与模型对照组比，盐酸普拉克索组、化合物（I)组大鼠血清中IL-Ιβ， IL-6，TNF_a含量均有所降低(P<〇. 05);与模型对照组相比，盐酸普拉克索与化合物（I)组 合物组大鼠血清中IL-1 β，IL-6，TNF-a含量均明显降低(Ρ<〇.〇1)。结果见表1。
[0047]表1对急性咽炎模型大鼠中性粒细胞数量及血清中IL-I β，IL-6，TNF-a含量的影响
[0049] 急性咽炎是一种临床常见病、多发病，在现代医学大多数采用抗生素类和抗病毒 药物治疗急性咽炎，但效果欠佳，病情易反复。由于氨水刺激造成模型组大鼠免疫系统损害 而使得模型组中性粒细胞减少，而地塞米松使中性粒细胞升高，但却降低其游走、吞噬、消 化等功能，因而减弱对炎症区的浸润与吞噬作用。在炎症反应中，淋巴细胞，嗜酸粒细胞比 例增加，而地塞米松可以降低全血中淋巴细胞及其他细胞比值，使炎症减轻。
[0050] 盐酸普拉克索、化合物（I)单独作用时，对急性咽炎具有治疗作用；盐酸普拉克索 和化合物（I)联合作用时，对急性咽炎治疗效果进一步提高，可开发成治疗急性咽炎的药 物。
[0051] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种盐酸普拉克索的药物组合物，其特征在于:包括盐酸普拉克索、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸普拉克索的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸普拉克索的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、□服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将洪 连粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱 10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗急性咽炎的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸普拉克索的药物组合物在制备治疗急性咽炎的药物 中的应用。
【文档编号】A61P11/00GK105859535SQ201610335078
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】秦勇, 徐成, 赵维, 陈远东, 陆赛花, 周自桂, 王 琦, 陈建芳
【申请人】江苏神龙药业有限公司