1，5-二-（2，4-二羟基-苯基）-3-（3，4-二羟基-苯基）-戊烷-1，5-二酮的合成方法及其应用
【专利摘要】本发明公开了1，5?二?(2，4?二羟基?苯基)?3?(3，4?二羟基?苯基)?戊烷?1，5?二酮的合成方法及其应用，属于食品、化妆品和医药领域。本发明通过3，4?二羟基苯甲醛和2，4?二羟基苯乙酮在硼酸和维生素C的催化下于PEG400为溶剂反应6小时，绿色合成一种高效的酪氨酸酶抑制剂，再经过硅胶柱层析和凝胶柱层析分离，得到该高效酪氨酸酶抑制剂的纯品。经质谱和核磁解析，确定该物质为1，5?二?(2，4?二羟基?苯基)?3?(3，4?二羟基?苯基)?戊烷?1，5?二酮[1,5?bis?(2,4?dihydroxy?phenyl)?3?(3,4?dihydroxy?phenyl)?pentane?1,5?dione]。本发明提供的化合物能够有效用于果蔬的酶促褐变的抑制、美白化妆品以及制备用于预防和治疗黑色素过多导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的药物制剂。
【专利说明】
1 ,5-二-(2,4-二哲基-苯基)-3-(3,4-二哲基-苯基)-戊烧-1 , 5-二酬的合成方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明设及1,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5-二酬 的合成方法及其应用，属于食品、化妆品和医药领域。
【背景技术】
[0002] 褐变和病原体感染导致的腐败是引起果蔬采后损失的两个重要因素。在果蔬加工 和胆藏过程中，由酪氨酸酶化C 1.14.18.1)引起的酶促褐变不仅影响产品的色泽、外观，而 且会破坏必需产品的氨基酸、降低其营养和消化吸收，并最终严重影响产品的营养价值和 市场价值。许多果蔬由于受到真菌疾病、机械损伤W及老化等因素影响而导致保质期很短。 通常情况下，天然菌群常常存在于果蔬产品中，也可能会存在于人类食用过程中，它们一般 对人类没什么毒性;但是，在生产、收割、运输、W及进一步加工处理过程中，都可能导致果 蔬产品受到微生物污染。机械损伤和破坏更会加重褐变和微生物的污染。使用酪氨酸酶抑 制剂和杀菌剂可W巧制果疏义后褐变和病害。
[0003] 查尔酬类是黄酬类化合物的一类，具有酪氨酸酶抑制活性，还有抗菌、抗癌、抗炎 和抗氧化等活性。天然的查尔酬广泛存在于水果、蔬菜、香料、茶、大豆食品和一些中草药 中。目前查尔酬合成的主要方法是芳香醒和苯乙酬在碱性条件下通过Clasein-Schmidt缩 合反应。在过去几十年中，来自世界各地的研究人员开发了不少合成查尔酬的方法。然而， 运些方法有很多缺陷，如苛刻的反应条件、有毒试剂和金属催化剂、强酸强碱、油状产物、过 长反应时间、低产率、低选择性W及繁琐的后处理程序。另外，在大部分情况下，合成径基查 尔酬衍生物需要保护和去保护径基，不仅增加反应步数和时间，同时也增加使用有毒或有 害试剂的机会。目前虽然也有一些绿色合成方法，如使用氨氧化巧做催化剂，用乙二醇作为 反应溶剂等，但运些绿色合成方法同样存在着低产率、油状产物和繁琐后处理等问题。
[0004] 绿色合成方法学因其环境友好、减污减排等特性，在科学研究和工业应用领域具 有深远的研究意义和重要的应用价值。随着环保、经济和社会要求的日益提高，W采用无毒 无害原料、固体酸/碱催化剂和绿色溶剂为代表的绿色合成化学已成为国内外研究的焦点。 本发明通过使用溫和的方法，选用无毒溶剂作为反应溶剂，并选用无毒催化剂，合成具有较 高酪氨酸酶抑制活性的一种径基查尔酬类衍生物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具酪氨酸酶抑制活性的化合物，通过3,4-二径基苯甲 醒和2,4-二径基苯乙酬在棚酸和维生素(：的催化制备得到，命名为1，5-613-(2,4- dihydroxy-pheny 1 )-3-( 3,4-dihydroxy-pheny 1) -pent 曰 ne-1,5-dione，其中文名为 1，5- 二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-I，5-二酬，其结构如下：
[0006]
[0007]本发明的另外一个目的是提供所述I，5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基- 苯基)-戊烧-1,5-二酬的绿色合成方法，通过W下步骤实现：
[000引 （1)3,4-二径基苯甲醒和2,4-二径基苯乙酬在棚酸和维生素 C的催化下，W阳G400 或乙二醇或乙醇或甲醇等为溶剂，于100~130°C反应3~6小时；
[0009] (2)反应液用乙酸乙醋、二氯甲烧、乙酸或S氯甲烧等萃取3-5次，有机相浓缩得干 燥样品；
[0010] (3)干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是W体积比30:1混合的二氯甲烧：甲醇；
[0011] (4)步骤（3)收集的洗脱液样品浓缩得干燥样品，再经Sephadex LH-20凝胶柱层 析:分离得到1,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5-二酬。
[0012] 本发明的一种实施方式，主要包括W下步骤：
[OOU] (1)3,4-二径基苯甲醒和2,4-二径基苯乙酬在棚酸和维生素 C的催化下，W阳G400 为溶剂130°C反应6小时;3,4-二径基苯甲醒与2,4-径基苯乙酬的摩尔比为1:1;
[0014] (2)反应液用乙酸乙醋萃取3次，有机相减压浓缩至干燥，得干燥样品；
[0015] (3)干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是W体积比30:1混合的二氯甲烧：甲醇；
[0016] (4)步骤(3)收集的洗脱液样品经浓缩干燥得干燥样品，经S邱hadex LH-20凝胶柱 层析，洗脱剂是W体积比7:3混合的甲醇-水，收集洗脱液，相同流分合并得到产物。
[0017] 本发明的一种实施方式，步骤(3)所述硅胶柱是颗粒度为200-300目的硅胶。
[001引本发明所提供的1,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5- 二酬可应用于制备抗果蔬酶促褐变抑制剂、化妆品美白剂、预防和治疗黑色素异常导致的 人体色素沉着性疾病、黑色素瘤W及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病症的药物中，可W作 为活性成分，不加或加入食品添加剂辅料、化妆品辅料或药剂上接受的辅料，按照相应剂型 的制备方法制成制剂。
[0019] 所述的剂型包括固体粉末、水溶液、醇溶液、乳液、面膜、己布剂、注射液、滴注液、 粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶 囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩剂、微丸 等。
[0020] 本发明的有益之处在于：提供一种具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，它具有比阳 性对照物曲酸、2,4-二径基苯乙酬和3,4-二径基苯甲醒更强的活性，制成相应制剂易于质 量控制，可应用在抗果蔬酶促褐变抑制剂、化妆品美白剂、预防和治疗黑色素异常导致的人 体色素沉着性疾病、黑色素瘤W及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病症的药物中。
【附图说明】
[0021 ] 图1为化合物1，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3- (3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬 的Ih NMR谱
[0022 ] 图2为化合物1，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3- (3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬 的"C NMR谱
[0023 ] 图3为化合物1，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3- (3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬 的服QC谱
[0024] 图4为化合物1，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3- (3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬 的HMBC谱
[00巧]图5为化合物1，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3- (3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬 的ESI-MS谱
【具体实施方式】
[00%] 实施例11,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5-二酬的制 备
[0027] 称取0.04mol 3,4-二径基苯甲醒、0.04mol 2,4-二径基苯乙酬、2.1邑棚酸、0.5邑抗 坏血酸于50血圆底烧瓶中，加入25血的阳G400揽拌溶解，置于130°C油浴中揽拌回流化，TLC 跟踪反应进程。反应液用乙酸乙醋萃取=次，有机相减压浓缩至干燥;干燥后的样品上硅胶 柱(颗粒度:200~300目），采用二氯甲烧：甲醇= 30:l(v/v)洗脱，收集洗脱液，薄层板检测， 相同流分合并，浓缩干燥，得干燥样品；通过液质联用技术，确定分子量为392的流分为含 有目标物的流分；W上流分干燥样品甲醇溶解后再用凝胶柱层析(Sephadex LH-20)进行分 离，甲醇-水(v/v，7:3)洗脱;收集洗脱液，薄层板检测，相同流分合并，即得1，5-二-(2，4-二 径基-苯基)-3- (3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬。
[0028] 反应通式为： 「00291
[0030] 1,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5-二酬的核磁共振 光谱数据如下：
[0031] ^ NMR(Acetone-d6,400MHz)5：12.736(2H,s,0H-2,2'),7.896(2H,dJ = 9.2Hz,H- 6，6，），7.837(1H，S，H-6")，6.680(2H, S ,overlapped, H-2"，5")，6.428(2H，dd，J = 8.8， 2.4Hz，H-5,5'），6.289(2H，d，J = 2.4Hz，H-3,3'），3.901(lH，m，H-9)，3.374(4H，dd，J = 9.8， 5.4Hz，H-8，8 '）；13c NMR(Acetone-ds，lOOMHz)5: 204.497(C = 0，C-7，7 '），166.461 (C，C-2， 2'),165.640(C,C-4,4'),145.849(C,C-r),144.554(C,C-3"),136.545(C,C-r),133.867 (CH,C-6,6'），119.766(CH,C-护），116.105(CH，C-5"),115.785(CH，C-3"),114.358(C,C-I， r)，108.848(CH，C-5,5'），103.701(CH，C-3,3'），45.034(CH2，C-8,8'），38.267(CH，C-9)。
[0032] ESI-MS:m/z 423.0[M-H]-(C2抽i9〇8)。结合二维谱HSQC，HMBC解析表明该化合物为 I，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3-(3，4-二径基-苯基)-戊烧-I，5-二酬。
[0033] 高效液相色谱-质谱联用检测条件：
[0034] (1)仪器:Waters UPLC-质谱仪。
[0035] (2)色谱柱:Acquity 邸H C18(50X2.1mm，1.7wii)。
[0036] (3)流动相:A相:含0.2%甲酸的去离子水;B相：乙腊。线性洗脱梯度:0min，10%B; 0.1111111，10%8;18111111，70%6;20111111，100%8;20.1111111，10%8。流速：0.311117111111。
[0037] (4)进样量：1化。
[0038] (5)质谱条件：负离子模式;喷涂电压：2.8V;离子源溫度：120°C;脱溶剂溫度:350 r。
[0039] 实施例2酪氨酸酶抑制活性评价方法
[0040] 将1,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5-二酬用DMSO溶 解分别配成50、10、5、2.5、0.化g/mL。取五种浓度的溶液各30化L，用70化L pH6.8的憐酸盐 缓冲溶液配成ImL,加进0.1 mg/血的酪氨酸1血，然后加入由抑值6.8的憐酸盐缓冲溶液配成 的ImL酪氨酸酶(400U/mL)，在37°C下解育20min，于492nm处测定吸光值。
[0041 ]酶活性抑制率=[(A2-A1)-(B2-B1)]/(A2-A1)X100%
[0042] Al为Omin时候未加抑制剂的吸收值;A2为20min后未加抑制剂的吸收值；
[0043] Bl为Omin时候加抑制剂的吸收值;B2为20min后加了抑制剂的吸收值。
[0044] 实施例3化合物酪氨酸酶抑制活性评价
[0045] 1，5-二-(2，4-二径基-苯基)-3-( 3，4-二径基-苯基)-戊烧-1，5-二酬抑制酪氨酸 酶的ICso为0.167mM，3,4-二径基苯甲醒的眼〇〉0.3mM，2,4-二径基苯乙酬的眼〇〉0.2mM。化 合物1,5-二-(2,4-二径基-苯基)-3-(3,4-二径基-苯基)-戊烧-1,5-二酬的酪氨酸酶抑制 活性远远大于反应原料2，4-二径基苯乙酬和3，4-二径基苯甲醒。
[0046] 虽然本发明已W较佳实施例公开如上，但其并非用W限定本发明，任何熟悉此技 术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范 围应该W权利要求书所界定的为准。
【主权项】
1. 一种具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，其特征在于，所述化合物为1，5-二-(2,4-二 羟基 -苯基)_3_( 3，4_二羟基-苯基)-戊烧_1，5_二酬，其结构式为：2. -种制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，主要包括以下步骤： (1) 3,4_二羟基苯甲醛和2,4_二羟基苯乙酮在硼酸和维生素 C的催化下，以PEG400、乙 二醇、乙醇或甲醇为溶剂，于100~130°C反应3~6小时； (2) 反应液用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷等萃取3-5次，有机相浓缩得干燥样 品； (3) 干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是以体积比30:1混合的二氯甲烷：甲醇； (4) 步骤(3)收集的洗脱液样品浓缩得到干燥样品，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析分 离得到所述化合物。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤： (1) 3,4_二羟基苯甲醛和2,4_二羟基苯乙酮在硼酸和维生素 C的催化下，以PEG400为溶 剂130 °C反应6小时;3，4-二羟基苯甲醛与2，4-二羟基苯乙酮的摩尔比为1:1; (2) 反应液用乙酸乙酯萃取3次，有机相减压浓缩至干燥，得干燥样品； (3) 干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是以体积比30:1混合的二氯甲烷：甲醇； (4) 步骤(3)收集的洗脱液样品经浓缩干燥得干燥样品，经Sephadex LH-20凝胶柱层 析，洗脱剂是以体积比7:1混合的甲醇-水，收集洗脱液，薄层板检测，相同流分合并得到产 物。4. 根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述硅胶柱是颗粒度为200~ 300目的硅胶。5. 权利要求1所述化合物的应用方法。6. 权利要求1所述化合物在果蔬的抗酶促褐变、制备化妆品，及制备用于预防和治疗黑 色素过多导致的需要抑制酪氨酸酶活性的病症的药物中的应用方法。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，不加抗酶促褐变辅料、化妆品配方、药物制 剂辅料。8. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，加入抗酶促褐变辅料、化妆品配方、药物制 剂辅料中的一种或多种。9. 含有权利要求1所述化合物的化妆品。10.含有权利要求1所述化合物的用于预防和治疗黑色素过多导致的需要抑制酪氨酸 酶活性的病症的药物。
【文档编号】C07C45/74GK105924342SQ201610330840
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】郑宗平, 陈洁, 张龙
【申请人】江南大学