一种含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明公开了一种含4?氧代?2?硫代噻唑烷基衍生物及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。本发明所述的衍生物包括通式I化合物，其中n为整数1或2；R1为酯基或酰胺或酸基；R2为氢、异丙基或甲氧基中的一种。该类大部分化合物既对tau蛋白聚合具有抑制作用，又对微管蛋白起稳定作用，可有效用于治疗阿茨海默症。
【专利说明】
一种含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物 及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 阿尔茨海默氏病(Alzheimer ' s disease，AD)是慢性进行性中枢神经系统变性病 导致的痴呆，是痴呆最常见的病因和最常见的老年期痴呆。AD以渐进性记忆障碍、认知功能 障碍、人格改变以及语言障碍等神经精神症状为特征。常起病于老年或老年前期、多缓慢发 病，逐渐进展，以痴呆为主要表现。病因迄今未明，目前尚无治愈的特效药物或方法。然而患 者人数却在全球逐年增加，中国现有患者500万人，到2020年将达1000万人。到2050年，全球 阿尔茨海默氏症患者将大幅增加，为目前水平的4倍，这个数字将增至1.06亿，而亚洲将是 重灾区，占全部早老性痴呆症患者的近60%。随着人类寿命的延长，以及世界老龄化时代的 到来，这个公共健康的"定时炸弹"即将被引爆，因而引起人们的普遍关注。
[0003] 越来越多的研究表明，早在AD症状出现前10~20年，大脑中的病理改变已经发生。 针对A D的病理机制目前主要有3种假说：淀粉样蛋白沉积、神经元纤维缠结 (neurofibrillary tangles，NFTs)以及胆碱能神经元退行性病变。过去十几年里，抗AD药 物的研究大都集中在Α?3级联假说相关的策略上，但最近，以Αβ为靶点的部分药物在三期临 床试验中却以失败告终，因而"神经元纤维缠结"在AD病中的作用被人们广泛认可。
[0004] Tau蛋白是一种分布在中枢神经系统内的低分子量含磷糖蛋白，它能与神经轴突 内的微管结合，具有诱导与促进微管蛋白聚合成微管，防止微管解聚、维持微管功能的稳 定，对记忆和正常大脑功能起重要的作用。Tau蛋白过度磷酸化导致Tau蛋白发生构象变化， 易于聚集成双螺旋纤维(PHF)，进而沉淀形成神经元纤维缠结，在病理状态下，游离的Tau蛋 白不断过磷酸化，使其与微管蛋白的结合只有正常Tau蛋白的10%，并束缚了 Tau蛋白对微 管的稳定，造成神经纤维退化及功能丧失，形成NFTsJFTs本身对细胞无害，但Tau蛋白缺失 会使微管的动态行为受到极大的影响，微管由于失去Tau蛋白的稳定作用趋于解离，导致细 胞骨架的崩溃，影响轴突运输功能和神经信号的传递，甚至细胞死亡。Tau蛋白过度磷酸化 不仅使其本身促微管组装活性降低，同时还通过消耗正常Tau蛋白、微管相关蛋白MAPI和 MAP2,进一步破坏微管，影响神经递质的合成、运输、释放和摄取，造成神经细胞间的通讯障 碍，从而导致神经退行性。另外，许多研究已经证实，Tau的异常修饰导致Tau成为毒性分子 而聚积成PHF，从而发生神经元纤维变性。因此，近年来，tau蛋白作为阿尔茨海默氏病靶点 药物的研究受到越来越多的关注。
[0005] 以tau蛋白为靶点治疗阿尔茨海默氏病的研究目前尚处在初级阶段，绝大多数药 物小分子还处在理论设计阶段，只有一小部分进入二期临床试验，综合国内外的研究现状， tau蛋白抑制剂目前主要朝两个方向发展：（1)间接抑制剂的研究，此类药物的研究主要集 中在对tau蛋白磷酸化相关酶的研究。直接抑制剂的研究，此类药物的分子直接和tau蛋白 相互作用并抑制其聚集。例如甲基蓝(MTC)，这一吩噻嗪类化合物能够阻止tau-tau之间的 相互作用，它不仅能够部分地分解孤立的双螺旋纤维丝(PHFs)，还能影响tau蛋白的聚合过 程。目前这类药物的研究已进入二期临床阶段。
[0006] 另外，基于对AD发病过程中与tau蛋白相关的病理机制，使用微管的稳定剂能够代 偿tau蛋白功能的缺失，调节微管的动态稳定性，使其恢复正常的介导轴突运输的功能，因 而保护神经细胞而达到治疗阿茨海默症的目的。通过用紫杉醇保护原代神经细胞免于Αβ诱 导的神经毒性，提高神经细胞存活率的研究中发现，在神经细胞培养液中加入毒性肽段之 后，用紫杉醇处理过的神经细胞存活率明显高于未处理的神经细胞，而且，调亡相关的蛋白 酶caspase3的活性明显降低，表明紫杉醇能够减慢神经元纤维缠结的病理进程，弥补tau蛋 白缺失造成微管稳定性的降低，进而保证神经元的完整性。在后续的研究中，又发现紫杉醇 以外的一些紫杉烷类化合物(Taxanes)和埃博霉素(epothilone)等多种蛋白缺失造成微管 稳定剂都明显提高了 Αβ存在时神经细胞存活率，同时帮助细胞保持细胞骨架网络的完整 性，使其避免由Αβ段引起的毒性级联反应的损伤，它们对AD的治疗作用已经在动物实验上 得到了证实。
【发明内容】
[0007] 根据上述AD病理机制，本发明的目的在于提供一种含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍 生物，所述的含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物为能作用tau蛋白和微管蛋白双靶点的小分 子，既对tau蛋白聚合具有抑制作用又对微管蛋白起稳定作用，用于治疗阿尔茨海默氏病。
[0008] 本发明的另一个目的在于提供具有上述含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物的制备 方法。
[0009] 本发明的另一目的在于提供上述含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物的应用。应用 于制备治疗阿茨海默症的药物。
[0010] 本发明的目的通过下述技术方案实现:一种含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物，所 述衍生物的结构式如下式I所示：
[0011]
[0012] 六tw疋m丄…；
[0013] 办为酯基或酰胺或酸基；
[0014] R2为氢、异丙基或甲氧基中的一种；
[0015] 上述的式I化合物的制备方法，包括如下步骤:2_羧酸苯并酸酐直接与苯胺衍生物 的反应，四氢呋喃硼烷还原反应，戴斯马丁氧化成醛反应，Knoevenagel缩合反应和脱酯反 应生成含4-氧代-2-硫代噻唑烷基的衍生物，所用溶剂为四氢呋喃或二氯甲烷，其中R^R^n 与权利要求1中相同。
[0016] 上述的式I化合物的具体制备方法，具体由步骤（1)和步骤(2)所述的方法制备获 得：
[0017] (1)2-(4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸或丙酸酯中间体1的制备:从商品化甘氨 酸乙酯，叔丁酯盐酸盐或3-氨基丙酸乙酯，叔丁酯盐酸盐出发，以三乙胺作为碱，与2，2'_ (硫代羰基(硫））二乙酸盐酸盐发生缩合反应，之后通过柱层析法提纯，即可得到白色固体 化合物1，该缩合反应选用异丙醇作为反应溶剂，在82°C下回流lh，步骤（1)的反应方程式如 式Π 所示；
[0018]
[0019] (2)化合物5,6的制备:首先从商品化2-羧酸苯并酸酐开始，在不加任何溶剂和催 化的剂的情况下直接在加热温度至200 °C下保持2小时，过柱纯化后，可以得到化合物2;之 后，用四氢呋喃硼烷还原化合物2,反应溶剂采用二氯甲烷或四氢呋喃，反应进行12小时，加 入稀醋酸，使其pH值3-4,经层析柱纯化得到醇类化合物3;随后将化合物3溶于二氯甲烷中， 加入戴斯马丁氧化剂进一步将羟基还原成醛，反应大致1个小时，用层析柱纯化得到醛类化 合物4;将化合物4溶于二氯甲烧中，加入中间体1进行Knoevenagel缩合反应，在常温下1小 时后，通过柱层析法提纯，得到化合物5;之后，在三氟乙酸酸性条件下，化合物5(5al，5a2， 5b2,5b2)进行脱脂反应，形成酸性化合物6,重结晶后呈黄色固体;化合物5,6即为式I化合 物，步骤(2)的反应方程式如式m所示；
[0020]
[0021] 上述的含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物的应用，应用于制备治疗阿茨海默症的 药物。
[0022]本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0023] 本发明的含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物不仅tau蛋白自聚集具有较好的抑制 活性，而且对对微管蛋白聚合具有很强的稳定作用。因而，通过前者的作用，能阻止神经元 纤维缠结的形成，以防止微管蛋白解聚，再通过后者的作用，进一步调节微管的动态稳定 性，使其恢复正常的介导轴突运输的功能，因而保护神经细胞而达到治疗阿茨海默症的目 的。
【附图说明】
[0024] 图1为表1中化合物5系列对增加微管蛋白聚合率的结果图。
[0025] 图2为表1中化合物6系列对增加微管蛋白聚合率的结果图。
【具体实施方式】
[0026]下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0027] 实施例1
[0028] 合成2-(4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸乙酯lal
[0029] 将甘氨酸乙酯盐酸盐(500mg，3.6mm〇l，leq)加入到溶有2,2'_(硫代羰基(硫））二 乙酸(976mg，4.32mmol，1.2eq)的异丙醇(4mL)中，然后再往体系中滴入Et3N( lmL，7.2mmol， 2eq)。将反应体系加热至82°摄氏度，搅拌1KTLC监测反应结束后，浓缩干后，经硅胶柱分离 得到产物1 a 1 (638mg，2.9lmmo 1)，黄色晶状固体，恪点：55 °C，收率81 %。
[0030] 咕 NMR(400MHz，CDC13)S = 4.65(s，2H)，4.19(q，J = 7.8Hz，2H)，4.01(s，2H)，1.22 (t,J = 7.8Hz,3H)；ESI-MS m/z:220.2[M+H] + 〇
[0031] 实施例2
[0032] 合成2-(4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸叔丁酯la2
[0033] 甘氨酸叔丁酯盐酸盐（500mg , 3mmol, leq)和三硫代碳酸盐（813mg , 3 · 6mmol, 1.2eq)参照实施例1操作过程，分离得化合物la2(504mg)，黄色晶状固体，熔点：56°C，收率 68% 〇
[0034] 4 匪R(400MHz，CDCl3)S = 4.62(s，2H)，4.07(s，2H)，1.46(s，9H);ESI-MSm/z: 248.2[M+H] + 〇
[0035] 实施例3
[0036] 合成2-(4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸乙酯lbl
[0037] 3-氨基丙酸乙酯盐酸盐（50011^，3.27111111〇1，1叫）和2,2'-(硫代羰基（硫））二乙酸 (886mg，3.92mmol，1.2eq)，参照实施例1操作过程，分离得产物lbl (708mg)，黄色晶状固体， 熔点：53 °C，收率93 %。
[0038] 4 Mffi(400MHz，CDCl3)S4.30(t，J = 7.8Hz，2H)，4.18(q，J = 7.8Hz，2H)，4.00(s， 2H),2.68(t ,J = 7.8Hz,2H),1.27(t ,J = 7.7Hz,3H)；ESI-MS m/z:234. l[M+H] + 〇
[0039] 实施例4
[0040] 合成2-( 4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸叔丁酯lb2
[00411 3-氨基丙酸叔丁酯盐酸盐(50011^，2.76111111 01，1叫)和2,2'-(硫代羰基(硫））二乙酸 (749mg，3.15mmol，1.2eq)，参照实施例1操作过程，分离得产物lb2(467mg)，黄色晶状固体， 熔点：52 °C，收率62 %。
[0042] 4 NMR(400MHz，CDCl3)S4.25(t，J = 7.8Hz，2H)，3.98(s，2H)，2.61(t，J = 7.8Hz， 2H)，1·45(s，9H);ESI-MS m/z:262·1[M+H] +。
[0043] 实施例5
[0044] 合成2-(2,6-二异丙基苯基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-5-甲醛4a
[0045] 2_駿酸苯并酸軒（100mg，0.49mmol，leq)和2，6二异丙基苯胺(4.9mmol，10eq)充分 混合，搅拌，将反应温度加热至200°C左右，可以观察到反应液颜色明显变深。用TLC监测反 应至原料完全消失后，用柱层析的方法提纯后，再重结晶，得产物2a，白色固体，熔点：234 。(：，收率83%。
[0046] 4 NMR(400MHz，CDCl3)S8.71(d，J = 2.4Hz，lH)，8.60(dd，J = 7.8,2.4Hz，lH)，8.11 (d,J = 7.8Hz,lH) ,7.49(t,J = 7.8Hz,lH),7.32(d,J = 7.8Hz,lH) ,2.69(hept,J = 7.8Hz, 2H),1.19(d ,J = 7.8Hz,12H).
[0047] 将化合物2a(500mg，1.42mm〇l，leq)完全溶解在四氢呋喃（lOmL)中，然后在冰浴的 条件下逐滴加入四氢咲喃-硼烧(4.27mmol，lmol/L，3eq)，之后在常温下搅拌12h，反应液颜 色明显变深，用TLC监测反应至原料完全消失后，将反应液旋干，再将其溶于(3M，50mL)乙酸 溶液中，之后用乙酸乙酯（50mL X 2)萃取，收集萃取液，旋干后用柱层析的方法提纯，得到 化合物3a，白色固体，熔点：136°C，收率68 %。
[0048] 咕匪1?(4001取，0)(：13)37.99((1(1，了 = 7.8,2.4泡，1!〇,7.95((1(1，了 = 7.8,2.4!^， 1H) ,7.81(d ,J = 7.8Hz,lH),7.46(t ,J = 7.8Hz,lH) ,7.30(d ,J = 7.8Hz,2H) ,4.90(s,2H), 2.7(hept ,J = 7.8Hz,2H),1.17(d ,J = 7.8Hz,12H).
[0049] 将化合物3a(0.58mm〇l，leq)完全溶于二氯甲烷(5mL)中，然后缓慢加入戴斯马丁 氧化剂(500mg，1.17mmol，2eq)在常温的条件下搅拌。可以观察到反应液颜色加深，反应2h， 用TLC监测反应至原料完全消失后，将反应液旋干后，加入含有碳酸氢钠的水溶液（5M, 50mL)，然后用乙酸乙酯（50mL X 2)萃取。合并萃取液旋干后用柱层析的方法提纯，得到化 合物4a，白色固体，熔点：153°C，收率90%。
[0050] 咕匪1?(4001〇^，厶。6七〇116)310.31(8，1!1)，8.50((1(1，了 = 2.4泡，1!1)，8.47((1(1，了 = 7.8,2.4Hz,lH) ,8.22(d ,J = 7.8Hz,lH) ,7.51(t ,J = 7.8Hz,lH) ,7.38(d,J = 7.8Hz,2H), 2.87(hept ,J = 7.8Hz,2H),1.15(d ,J = 7.8Hz,12H).
[0051 ] 实施例6
[0052] 合成1，3-二氧-2-( 3，4，5-三甲氧基苯基)异吲哚-5-甲醛4b
[0053] 从商品化2-羧酸苯并酸酐(0.49mmol)和3,4,5-三甲氧基苯胺(4.821111]1〇1)从发，参 照实施例5操作过程，分离得化合物4b，黄色固体，熔点：184°C，总收率44%。
[0054] 化合物2b: 4 NMR(400MHz，DMS0) δ8 · 48 (d，J = 2 · 4Hz，1H)，8 · 36 (dd，J = 7 · 6Hz， lH)，8.13(d，J=7.6Hz，lH)，6.88(s，2H)，3.82(s，6H)，3.78(s，3H).
[0055] 化合物3b: 4 NMR(400MHz，DMS0) δ7 · 91 (d，J = 2 · 4Hz，1H)，7 · 87(dd，J = 7 · 6Hz， lH)，7.82(d，J=7.7Hz，lH)，6.80(s，2H)，4.71(s，2H)，3.77(s，6H)，3.72(s，3H).
[0056] 化合物4b,H NMR(400MHz，DMS0)Sl0.23(s，lH)，8.40(d，J = 2.3Hz，lH)，8.39(dd， J = 7.6Hz，lH)，8.16(d，J = 7.6Hz，lH)，6.83(s，2H)，3.77(s，6H)，3.73(s，3H).
[0057] 实施例7
[0058] 合成(E)-2-(5-((l，3-二氧代-2-(2,6-异丙基)异吲哚-5-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代四氢噻吩-3-基）乙酸乙酯5al
[0059] 将化合物4a(33mg，0. lmmol，leq)与lal(21mg，0. lmmol，leq)用二氯甲烧（lmL)充 分溶解后，缓慢滴加哌啶（20yL)，保持在常温条件下，可以观察到反应液明显变红，反应 30min。用TLC监测反应至原料完全消失后，将反应液旋干后，加入含有冰乙酸的水溶液(5M， 10mL)，然后用乙酸乙酯（10mL X 2)萃取。合并萃取液旋干后用柱层析的方法提纯，得到化 合物5a 1，黄色固体，熔点：210 °C，收率46 %。
[0060] ΧΗ NMR(400MHz,CDCl3)58.08(d,J = 2.4Hz,lH),8.02(dd,J = 7.8,2.4Hz,lH),7.91 (d ,J = 7.8Hz,lH) ,7.86(s,lH), 7.48( t,J = 7.8Hz,lH) ,7.32( s,lH) ,7.30(d,J = 7.8Hz, 1H) ,4.89( s,2H) ,4.27(q, J = 7.8Hz , 2H), 2.69(hept ,J = 7.8Hz , 2H), 1.31 (t, J = 7.1Hz , 3H),1.17(d,J = 7.8Hz,12H)；ESI-MS m/z:537.2[M+H] + 〇 [0061 ] 实施例8
[0062] 合成(E)-2-(5-( (1,3-二氧代-2-(2,6-异丙基)异吲哚-5-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代四氢噻吩-3-基）乙酸叔丁酯5a2
[0063] 从化合物4a(0 · lmmol)与la2(0 · lmmol)出发，参照实施例7操作过程，分离得化合 物5a2，黄色固体，熔点：125°C，收率65 % ;
[0064] ΧΗ NMR(400MHz,CDCl3)58.08(d,J = 2.4Hz,lH),8.06(dd,J = 7.8,2.4Hz,lH),7.91 (d,J = 7.8Hz,lH) ,7.85(s,lH) ,7.48(t,J = 7.8Hz,lH) ,7.32(d,J = 7.8Hz,2H) ,4.79(s, 2H),2.69(hept,J = 7.8Hz,2H),1.49(s,9H),1.17(d,J = 7.8Hz,12H)；ESI-MS m/z:565.2[M +H] +。
[0065] 实施例9
[0066] 合成（E)-3-(5-((2-(2,6-二异丙基苯基）-1,3-二氧代异二氢吲哚-5-基）亚甲 基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸乙酯5a3
[0067] 从化合物4a(0. lmmo 1)与1 b 1 (0. lmmo 1)出发，参照实施例7操作过程，分离得化合 物5a3，黄色固体，熔点：118 °C，收率48 %。
[0068] ΧΗ NMR(400MHz,CDCl3)58.07(d,J = 2.4Hz,lH),8.05(dd,J = 7.8,2.4Hz,lH),7.90 (d ,J = 7.8Hz,lH) ,7.82(s,lH),7.48(t ,J = 7.8Hz,lH) ,7.32(d ,J = 7.8Hz , 2H) ,4.46(t ,J = 7.8Hz,2H),4.17(a,J = 7.8Hz,2H),2.79(t,J = 7.8Hz,2H),2.68(hept,J = 7.8Hz,2H) ,1.28 (t,J = 7.8Hz,3H),1.17(d,J = 7.8Hz,12H)；ESI-MS m/z:551.2[M+H] + 〇
[0069] 实施例10
[0070] 合成（E)-3-(5-((2-(2,6-二异丙基苯基）-1,3-二氧代异二氢吲哚-5-基）亚甲 基)-4_氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸叔丁基酯5a4
[0071 ] 从化合物4a(0. lmmol)与lb2(0. lmmol)出发，参照实施例7操作过程，分离得化合 物5a4，黄色固体，熔点：141°C，收率68 %。
[0072] ΧΗ NMR(400MHz,CDCl3)58.07(d,J = 7.9Hz,lH),8.05(dd,J = 7.9,2.4Hz,lH),7.91 (d ,J = 7.9Hz,lH) ,7.82(s,lH),7.47(t ,J = 7.9Hz,lH) ,7.32(d ,J = 7.9Hz , 2H) ,4.42(t ,J = 7.9Hz,2H) ,2.70(hept ,J = 7.9Hz,2H) ,2.73(t,J = 7.9Hz,2H) ,1.45(s,9H) ,1.16(d ,J = 7.9Hz,12H)；ESI-MS m/z:579.2[M+H]+〇
[0073] 实施例11
[0074] 合成(E)-2-(5-((l，3-二氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基）异二氢吲哚-5-基）亚甲 基)-4-氧代2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸叔丁基酯5b2
[0075] 从化合物4b(0 · lmmol)与la2(0 · lmmol)出发，参照实施例7操作过程，分离得化合 物5b2，黄色固体，熔点：155°C，收率39 %。
[0076] ΧΗ NMR(400MHz,CDCl3)58.06(d,J = 2.4Hz,lH),8.04(dd,J = 7.8,2.4Hz,lH),7.90 (d ,J = 7.8Hz,lH) ,7.85(s,lH),6.65(s,2H) ,4.79(s , 2H), 3.90(s , 3H), 3.89(s, 6H), 1.48 (s,9H)；ESI-MS m/z:571.1[M+H]+〇
[0077] 实施例12
[0078] 合成(E)-3-(5-((l，3-二氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基）异吲哚-5-基)亚甲基)_ 4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸叔丁基酯5b4
[0079] 从化合物4b(0 · lmmol)与lb2(0 · lmmol)出发，参照实施例7操作过程，分离得化合 物5b4，黄色固体，熔点：165°C，收率38 %。
[0080] ΧΗ NMR(400MHz,CDCl3)58.05(d,J = 2.4Hz,lH),8.03(dd,J = 7.8,2.4Hz,lH),7.88 (d ,J = 7.8Hz,lH),7.81(s,lH) ,6.65(s, 2H) ,4.42(t ,J = 7.8Hz , 2H), 3.90(s , 3H), 3.88(s, 6H),2.70(t,J = 7.8Hz,2H),1.45(s,9H)；ESI-MS m/z:585.1 [M+H] + 〇
[0081 ] 实施例13
[0082] 合成(E)-2-(5-( (2-(2,6-二异丙基苯基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-5-基）甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸6al
[0083] 从化合物5a2(0.044mmol)出发，用二氯甲烷(0.5mL)溶解后，在常温下加入三氟乙 酸(0.5mL)保持常温下2h。可以观察到有少量沉淀生成。用TLC监测反应至原料完全消失后， 然后在反应液中滴入无水乙醚（10mL)可以观察有大量黄色固体出现，过滤得到化合物6al， 黄色固体，熔点：123°C，收率81 %。
[0084] ΧΗ NMR(400MHz,(CD3)2C0)58.24(d ,J = 2.4Hz,lH) ,8.21 (dd ,J = 7.8,2.4Hz , 1H), 8.18(d,J = 7.8Hz,lH) ,8.07(s,lH) ,7.51(t,J = 7.8Hz,lH) ,7.38(d,J = 7.8Hz,2H) ,4.93 (s,2H),2.82(hept,J = 7.8Hz,2H),1.15(d,J = 7.8Hz,12H)；ESI-MS m/z:509.1 [M+H] + 〇
[0085] 实施例14
[0086] 合成（E)-3-(5-((2-(2,6-二异丙基苯基）-1,3-二氧代异二氢吲哚-5-基）亚甲 基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸6a2
[0087] 从化合物5a4(0.044mmol)出发，参照实施例13操作过程，过滤后得到化合物6a2， 黄色固体，熔点：142°C，收率89 %。
[0088] 4 NMR(400MHz，（CD3)2C0)S8.20(m，3H)，7.99(s，lH)，7.51(t，J = 7.8Hz，lH)，7.38 (d,J = 7.8Hz,2H) ,4.43(t,J = 7.8Hz,2H),2.86(m,4H),1.15(d,J = 7.8Hz,12H)；ESI-MS m/ z:523.1[M+H]+〇
[0089] 实施例15
[0090] 合成(E)-2-(5-((l，3-二氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基）异二氢吲哚-5-基）亚甲 基)-4-氧代2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸6b 1
[0091] 从化合物5b2(0.044mmol)出发，参照实施例13操作过程，过滤后得到化合物6bl， 黄色固体，熔点：160°C，收率92 %。
[0092] iHNMRHOOMHzJCDshraMSJS-S.lSUdHhe.SSbJiOd.gsCsJHhS.SMs， 6H),3.79(s,3H)；ESI-MS m/z:515.1[M+H]+〇
[0093] 实施例16
[0094] 合成(E)-3-(5-((l，3-二氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基）异吲哚-5-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丙酸6b2
[0095] 从化合物5b4(0.044mmol)出发，参照实施例13操作过程，过滤后得到化合物6b2， 黄色固体，熔点：192°C，收率87 %。
[0096] ΧΗ NMR(400MHz,DMS0)512.55(s,1H) ,8.18(d,J = 2.4Hz,lH) ,8.09(m,3H) ,6.83 (s,2H),4.26(t,J = 7.5Hz,2H) ,3.77(s,6H) ,3.73(s,3H) ,2.67(t,J = 7.5Hz,2H) ；ESI-MS m/z:529.1[M+H]+〇
[0097]体外微管蛋白聚合抑制活性测试方法：
[0098]微管蛋白聚合是通过比浊测定法在384孔板检测的。在4°C和缓冲液(80mM PIPES， pH 7.0，lmM EGTA，lmM MgCl2)中，微管蛋白（4mg/mL)与各种化合物（ΙμΜ)预培养30min，之 后，加入1 mM GTP，检测样品快速升温到3 7 °C。然后采用恒温控制分光光度计（Sp e c tramax Paradigm，Molecular Devices，San Francisco，CA,USA)，每分钟定期测量在340nm处的吸 光度变化。测试中，紫杉醇和诺考达唑作为稳定剂和破坏剂对照使用。
[0099]体外Tau蛋白聚合抑制活性的硫磺素-S(ThS)测试方法：
[0100] 在37 °C下，在384孔板中，Tau蛋白（5μΜ)与肝素（2.5μΜ)，乙酸铵（50mM)和各种化合 物(5μΜ) -齐培养24小时。之后，加入硫磺素-S到最终浓度为20μΜ。采用荧光分光光度计测 定（Spectramax Paradigm，Molecular Devices，San Francisco，CA,USA)焚光值。发射波长 在440nm激发波长在520nm。
[0101] 依照上述方法测试所得部分化合物的活性结果列表如下：
[0102] 表1: Tau蛋白自聚集抑制率和微管蛋白聚合增加率
[0103]
[0104]从表1及图1-2可见，除其中部分化合物6bl ,6b2稍差一些之外，极大分化合物都比 紫杉醇有更强的稳定微管蛋白聚合的能力。特别是化合物5a4对微管蛋白聚合具有较好的 稳定作用，同时对tau自聚集具有一定程度的抑制活性，有望成为多靶点抗阿茨海默症药物 的先导化合物。
[0105]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物，其特征在于:所述衍生物的结构式如下式I 所示： 其中：η为整数1或2;Ri为酯基或酰胺或酸基； R2为氢、异丙基或甲氧基中的一种。2. 权利要求1所述的含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物的制备方法，其特征在于:包括 如下步骤:2_羧酸苯并酸酐直接与苯胺衍生物的反应，四氢呋喃硼烷还原反应，戴斯马丁氧 化成醛反应，Knoevenagel缩合反应和脱酯反应生成含4-氧代-2-硫代噻唑烷基的衍生物， 所用溶剂为四氢呋喃或二氯甲烷，其中R^R 2, η与权利要求1中相同。3. 权利要求1所述的含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物的制备方法，其特征在于:具体 由步骤(1)和步骤(2)所述的方法制备获得： (1) 2- (4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基）乙酸或丙酸酯中间体1的制备:从商品化甘氨酸乙 酯，叔丁酯盐酸盐或3-氨基丙酸乙酯，叔丁酯盐酸盐出发，以三乙胺作为碱，与2,2'_(硫代 羰基(硫））二乙酸盐酸盐发生缩合反应，之后通过柱层析法提纯，即可得到白色固体化合物 1，该缩合反应选用异丙醇作为反应溶剂，在82 °C下回流Ih; (2) 化合物5,6的制备:首先从商品化2-羧酸苯并酸酐开始，在不加任何溶剂和催化的 剂的情况下直接在加热温度至200°C下保持2小时，过柱纯化后，可以得到化合物2;之后，用 四氢呋喃硼烷还原化合物2,反应溶剂采用二氯甲烷或四氢呋喃，反应进行12小时，加入稀 醋酸，使其PH值3-4，经层析柱纯化得到醇类化合物3;随后将化合物3溶于二氯甲烷中，加入 戴斯马丁氧化剂进一步将羟基还原成醛，反应大致1个小时，用层析柱纯化得到醛类化合物 4;将化合物4溶于二氯甲烧中，加入中间体1进行Knoevenagel缩合反应，在常温下1小时后， 通过柱层析法提纯，得到化合物5;之后，在三氟乙酸酸性条件下，化合物5进行脱脂反应，形 成酸性化合物6，重结晶后呈黄色固体;化合物5，6即为含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物。4. 权利要求1所述的含4-氧代-2-硫代噻唑烷基衍生物的应用，其特征在于:应用于制 备治疗阿茨海默症的药物。
【文档编号】A61P25/28GK106008494SQ201610380171
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】陈惠雄, 帕斯卡·道, 黄广华, 叶飞飞
【申请人】广东工业大学