Enst00000509938.1及制剂或诊断剂或药物或试剂盒和应用
【专利摘要】本发明涉及基因工程技术领域，是一种长链非编码RNA ENST00000509938.1及其试剂盒和应用。长链非编码RNA及其制剂或诊断剂或药物或试剂盒和应用，该长链非编码RNA基因序列具有SEQ ID NO:1所示的序列。与健康人的血液含量相比，长链非编码RNA ENST00000509938.1在急性心肌梗死患者血液中显著高表达。本发明的长链非编码ENST00000509938.1将进一步丰富急性心肌梗死发病机制的研究，也为急性心肌梗死的早期诊断及预后监测提供了新的血液分子标志物和治疗靶点。
【专利说明】
ENST00000509938.1及制剂或诊断剂或药物或试剂盒和应用
技术领域
[0001 ] 本发明涉及基因工程技术领域，是一种LncRNA ENST00000509938.1及制剂或诊断 剂或药物或试剂盒和应用即ENST00000509938.1及制剂或诊断剂或药物或试剂盒和应用。
【背景技术】
[0002] 急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI)作为冠状动脉性心脏病 (Coronary heart disease，CHD)中较为严重的类型，其发病急、病死率高，对人民健康形成 了严重的威胁。目前急性心肌梗死的诊断多依赖于临床表现、心电图的动态变化及血清生 物标志物。如何更早的对急性心肌梗死进行诊断及预防，一直是我们研究的重要课题。而随 着人类基因组计划完成和基因芯片技术的发展，许多单基因疾病的致病基因被发现，并应 用到疾病的诊断与治疗当中。而AMI作为一种受多种遗传与环境因素影响的疾病，遗传学在 AMI发病中的作用仍未明确。
[0003] 长链非编码RNA(long non-coding RNAs，lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的 RNA分子，一般不编码蛋白，由RNA聚合酶II转录并经可变剪切形成，转录水平低于蛋白质编 码基因，曾一度被认为是基因组转录的"噪音"。已证实，IncRNA在表观遗传学、转录调控、转 录后调控等多种层面调控基因表达，在多种生物学进程中发挥重要作用，包括脂肪代谢、动 脉粥样硬化形成、胚胎发育及肿瘤的发生等，
[0004] 长链非编码RNA(long noncoding RNA, IncRNA)是一类能在多种生物学过程中发 挥调控作用的大分子ncRNA。其分布广泛，长度一般多于200个碱基，由于缺少有效开放阅读 框(0RF)而无或很少有编码蛋白的能力。作为分子生物学中的一个全新领域，IncRNA是以 RNA的形式在表观遗传学、转录调控、转录后调控等多种层面上发挥调控基因表达的作用。 作为哺乳动物转录组的重要组成部分，IncRNA的功能目前还有待于深入研究。起初IncRNA 被认为是RNA聚合酶Π 转录的副产物，是基因组转录的"噪音"，不具有生物功能。但近年来 的研究结果显示，IncRNA在细胞正常生理活性中的重要作用以及参与到多种疾病的发生发 展。LncRNA可通过基因印记、染色质重构、剪切调控、mRNA降解和翻译调控等机制来实施其 功能。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种长链非编码RNA ENST00000509938.1及其制剂或诊断剂或药物 或试剂盒和应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决急性心肌梗死作为一种受多 种遗传与环境因素影响的疾病，但遗传学在急性心肌梗死发病中的作用仍未明确的问题， 本发明发现其表达或功能异常与人类心血管疾病的发生和发展密切相关，长链非编码RNA ENST00000509938.1有望成为心血管疾病诊断、预测预后的标志物，同时也为心血管病的治 疗提供了新的靶点。
[0006] 本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种在急性心肌梗死患者血液 中高表达的长链非编码RNA ENST00000509938.1，该长链非编码RNA ENST00000509938.1的 序列如SEQ ID NO :1所示。
[0007] 下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：
[0008] 上述长链非编码IncRNA ENST00000509938.1 为ENST00000509938:1 的全长 [0009]本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种体外检测血液中根据技术 方案之一所述的长链非编码RNA ENST00000509938.1的制剂或诊断剂或药物或试剂盒，该 制剂或诊断剂或药物或试剂盒包括特异性引物对、标准DNA模板、PCR反应液，其中，特异性 引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为SEQ ID No: 2，下游引物的核苷 酸序列为SEQ ID No:3。
[0010] 下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：
[0011] 上述该试剂盒为荧光定量PCR检测试剂盒。
[0012] 上述特异性引物对用于SYBR Green、Taqman探针、分子信标、双杂交探针、复合探 针的检测。
[0013] 上述PCR反应液为荧光定量PCR反应液。
[0014] 上述荧光定量PCR反应液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。
[0015] 上述还包括荧光染料。
[0016] 本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种检测根据技术方案之一所 述的长链非编码RNA ENST00000509938.1的方法，按下述步骤进行：第一步，提取血液总 RNA;第二步，制备cDNA;第三步，定量扩增IncRNA ENST00000509938.1。
[0017] 本发明的技术方案之四是通过以下措施来实现的：一种根据技术方案之一所述的 长链非编码RNA ENST00000509938.1在制备用于检测急性心肌梗死的试剂盒或用作检测急 性心肌梗死药物的新靶点的应用。
[0018] 本发明中的长链非编码RNA ENST00000509938.1在急性心肌梗死患者血液中显著 高表达，并在样本的荧光定量实验中进一步证实长链非编码RNA ENST00000509938.1在急 性心肌梗死患者血液中显著高于健康人，本发明的长链非编码ENST00000509938.1将进一 步丰富急性心肌梗死发病机制的研究，也为急性心肌梗死的早期诊断及预后监测提供了新 的血液分子标志物和治疗祀点。
【附图说明】
[0019] 附图1为本发明中长链非编码RNA表达谱芯片检测ENST00000509938.1在健康对照 组与急性心肌梗死组中的检测信号值。
[0020] 附图2为本发明中针对长链非编码RNA ENST00000509938.1的序列设计的一对特 异性引物PCR扩增后行琼脂糖凝胶电泳测试引物的效果。
[0021] 附图3为本发明中qRT-PCR检测ENST00000509938.1在健康对照组与急性心肌梗死 组中的相对表达量
【具体实施方式】
[0022]本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体 的实施方式。
[0023]在本发明中，为了便于描述，各部件的相对位置关系的描述均是根据说明书附图1 的布图方式来进行描述的，如:上、下、左、右等的位置关系是依据说明书附图的布图方向来 确定的。
[0024]本发明利用长链非编码表达谱芯片技术，通过差异分析，筛选到一条在急性心肌 梗死患者血液中显著高表达的IncRNA ENST00000509938.1，其转录区域位于4号染色体，起 始位置为113,567,878-113，569,855,全长1978bp。与健康人的血液含量相比，IncRNA ENST00000509938.1在急性心肌梗死患者血液中显著高表达，并在样本的荧光定量实验中 进一步证实IncRNA ENST00000509938.1在急性心肌梗死患者血液中显著高于健康人。因 此，长链非编码IncRNA ENST00000509938.1将进一步丰富急性心肌梗死发病机制的研究， 也为急性心肌梗死的早期诊断及预后监测提供了新的血液分子标志物和治疗靶点。
[0025]本发明提供的急性心肌梗死患者和健康人的血液标本各3个，共6例。通过ABI公司 的Trizol试剂(货号15596-026)所需步骤提取总RNA后，采用北京博奥生物工程有限公司的 芯片产品(Agilent human IncRNA+mRNA Array V4.0)进行检测，筛选出一条在急性心肌梗 死患者血液中显著高表达的IncRNA ENST00000509938.1，其核酸序列如SEQ ID No. 1所示。 后期经过对样本进行荧光定量PCR验证，发现6个样本中急性心肌梗死患者血液中1 ncRNA ENST00000509938.1的表达显著高于健康人血液中IncRNA ENST00000509938.1的表达。 IncRNA ENST00000509938.1作为急性心肌梗死的新靶点，为急性心肌梗死的临床治疗和药 物开发提供理论基础。
[0026] 实施例1，一种在急性心肌梗死患者血液中高表达的长链非编码RNA ENST00000509938.1，该长链非编码RNA ENST00000509938.1的序列如SEQ ID N0:1 所示。
[0027] 实施例2,作为实施例1的优化，长链非编码IncRNA ENST00000509938. 1为 ENST00000509938:1 的全长
[0028]实施例3，一种体外检测血液中根据实施例1或实施例2所述的长链非编码RNA ENST00000509938.1的制剂或诊断剂或药物或试剂盒，该制剂或诊断剂或药物或试剂盒包 括特异性引物对、标准DNA模板、PCR反应液，其中，特异性引物对包括上游引物和下游引物， 上游引物的核苷酸序列为SEQ ID No:2,下游引物的核苷酸序列为SEQ ID No:3。
[0029] 实施例4,作为实施例3的优化，该试剂盒为荧光定量PCR检测试剂盒。
[0030] 实施例5,作为实施例3或实施例4的优化，特异性引物对用于SYBR Green、Taqman 探针、分子信标、双杂交探针、复合探针的检测。
[0031] 实施例6,作为实施例3、实施例4和实施例5的优化，PCR反应液为荧光定量PCR反应 液。
[0032]实施例7,作为实施例6的优化，荧光定量PCR反应液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。
[0033] 实施例8,作为实施例3、实施例4、实施例5、实施例6和实施例7的优化，该试剂盒还 包括荧光染料。
[0034] 该体外检测急性心肌梗死的染料类荧光定量PCR试剂盒的使用方法，荧光定量PCR 体系：
[0035] 上游引物、下游引物各0.25111(1011]\0;0财模板。0财0.5111;?〇￥615￥81?6代611 PCR Master(2 X )5ul，加 Nuclease-Free Water4ul，总容量 10ul。焚光定量PCR程序：第一步 95°(：10分钟；第2步，95°(：153,60°(：1分钟；第三步，95°(：153,60°(：1分钟，95°(：153，共40个循 环。
[0036]实施例9，一种检测根据实施例1和实施例2所述的长链非编码R ΝΑ ENST00000509938.1的方法，按下述步骤进行:第一步，提取血液总RNA;第二步，制备cDNA; 第三步，定量扩增IncRNA ENST00000509938 · 1。
[0037]所述方法具体包括如下步骤：
[0038] 一、提取血液总RNA:按照ABI公司的Tr i zo 1试剂（货号15596-026)所需试剂及步骤 提取总RNA，再用7300real time PCR system核酸定量仪定量(Applied Biosystems AB)定 量所提取的的纯度和浓度。
[0039] 二、制备样品cDNA:采用北京天根生化科技公司FastQuant cDNA第一链合成试剂 盒试剂盒(货号KR106)对提取的总RNA反转录合成cDNA。
[0040] 1、将模板RNA在冰上解冻；5XgDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10XFast RT Buffer、RNase-Free ddH20在室温（15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶 液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
[0041] 2、打开二级结构，反应体系及条件如表1所示；
[0042]将上述组分的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42 °C，孵育3min。然后置于冰上放置。
[0043] 3、反转录反应，反应体系及条件如表2所示；
[0044]将反转录反应中的Mi X，加到gDNA去除步骤的反应液中，充分混匀。42 °C，孵育 Ιδη?ηΑδ?，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后续实验，或低温保存。
[0045] 三、扩增IncRNA ENST00000509938.1:采用ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix荧光定量试剂盒（货号4367659)，以反转录的cDNA为模板进行荧光定量PCR扩 增。
[0046] 荧光定量PCR体系如表3所示；
[0047] 荧光定量PCR程序:第一步95 °C 10分钟；第2步，95 °C 15S，60 °C 1分钟；第三步，95 °C 155,60°(：1分钟，95°(：155，共40个循环。
[0048] 实施例1 〇，一种根据实施例1和实施例2所述的长链非编码R N A ENST00000509938.1在制备用于检测急性心肌梗死的试剂盒或用作检测急性心肌梗死药物 的新靶点的应用。
[0049] 用于检测急性心肌梗死的方法，所述方法包括以下步骤：
[0050] 第一步，提取血液总RNA;
[0051 ] 第二步，制备样品cDNA;
[0052] 第三步，扩增IncRNA ENST00000509938.1，并根据相对定量结果进行判断。
[0053] 实施例11:急性心肌梗死患者与健康人血液的IncRNA芯片表达分析
[0054] 一、材料和方法
[0055] 1.材料
[0056] 血液样本来自于急性心肌梗死患者与健康人血液样本各3个。
[0057] 2.方法
[0058] (1)急性心肌梗死患者与健康人血液样本总RNA的提取:按照博奥生物技术有限公 司提供的"用于基因芯片分析的血液样品的准备步骤"提取急性心肌梗死患者与健康人血 液样本总RNA。具体实验材料包括:淋巴细胞分离液(天津TBD生物技术发展中心）；灭菌生理 盐水(普通0.9%生理盐水灭菌即可）；1'1^2〇1试剂（1]1￥；[1：1'08611公司）。
[0059] (2)晶芯?IncRNA+mRNA表达谱芯片检测以待检测样品的总RNA为起始，进行体外扩 增和荧光标记，标记过程采用晶芯^生物芯片通用标记试剂盒。主要包括如下步骤：
[0060] 1)反转录合成第一链CDNA:以Total RNA起始，含有T7启动子序列的T701igo(dT) Primer和T7-随机引物，既可以结合带poly (A)的mRNA，也可以结合除rRNA以外其它不带 poly(A)的RNA，使用第一链Enzyme Mix合成第一链cDNA。
[0061 ] 2)合成第二链DNA:用第二链Enzyme Mix将DNA-RNA杂合体中的RNA链转化为第二 链cDNA，合成双链DNA。
[0062] 3)体外转录合成cRNA:以第二链cDNA为模板，利用T7Enzyme Mix合成cRNA。
[0063] 4) cRNA纯化:使用RNA纯化柱纯化cRNA，除去反应中的盐、酶等试剂，并对cRNA进行 定量、质控。
[0064] 5)反转录：以cRNA为模板，Random Primer为引物，CbcScriptn酶进行反转录。纯 化回收反转录得到的cDNA并定量。
[0065] 6)标记：以反转录的cDNA产物为模板，Random Primer为引物，用Klenow Fragment 酶合成cDNA互补链并掺入带有荧光基团的dNTP(Cy3-dCTP、Cy5-dCTP)，纯化并定量标记产 物。带有荧光基团DNA即可用于芯片杂交。
[0066] 7)芯片杂交及清洗:取lyLcDNA溶于杂交液，45°C杂交过夜。取出芯片在博奥Slide Washer8芯片洗干仪进行清洗，清洗程序如下:洗液1:0.2% SDS，2 X SSC，42°C 120S清洗2遍。 洗液II:0 · 2%SDS，2 X SSC，42°C80S清洗3遍。
[0067]清洗程序完成后，离心甩干，待扫描。
[0068] 8)芯片扫描，数据分析，差异基因筛选:使用Agilent芯片扫描仪(G2565CA)对清洗 后的芯片进行扫描，得到杂交图片。使用Agilent Feature Extraction!；vlO.7)软件对杂交 图片进行分析并提取数据。然后使用Agilent GeneSpring软件对数据进行归一化和差异分 析，并用GeneSpring GX软件进行差异基因筛选。
[0069]二、结果
[0070] 长链非编码表达谱芯片检测ENST00000509938.1在健康对照组与急性心肌梗死组 中的检测信号值如附图1所示。芯片筛查发现多条表达上调和表达下调的IncRNAs。其中 IncRNA ENST00000509938.1显示出在急性心肌梗死患者中表达显著上调，Fc值为2.818倍， 其中，由图上可知，P小于0.05,具有统计学意义。鉴于其可能在急性心肌梗死患者中存在特 异性表达，本发明通过以下实施例采用芯片检测的样本进行指标的重复验证。
[0071] 实施例12:qRT-PCR重复验证IncRNA ENST00000509938.1在急性心肌梗死患者和 健康人中的差异表达 [0072] 一、实验材料
[0073] 选取芯片测试的样本，对IncRNA ENST00000509938.1的表达差异进行qRT-PCR验 证。
[0074]二、实验方法和结果 [0075] 1.引物特异性鉴定
[0076] (1)特异性引物的设计：从Ensemble数据库提取IncRNA ENST00000509938.1相关 的转录本序列，并用根据转录本的序列通过NCBI的引物设计工具(Primer BLAST)设计引 物；
[0077] 设计后的引物序列如下：
[0078] 上游引物：SEQ ID No:2
[0079] 下游引物：SEQ ID No:3
[0080] (2)将急性心肌梗死患者与健康人血液按照ABI公司的Trizol试剂（货号15596-026)所需试剂及步骤提取总RNA，再用7300 real time PCR system核酸定量仪定量 (Applied Biosystems AB)定量所提取的的纯度和浓度。
[0081] 采用北京天根生化科技公司FastQuant cDNA第一链合成试剂盒试剂盒（货号 KR106)对提取的总RNA反转录合成cDNA。
[0082] 第一步将模板RNA在冰上解冻；5XgDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10XFast RT Buffer、RNase-Free ddH20在室温（15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶 液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
[0083]第二步打开二级结构，反应体系及条件如表4所示，
[0084]将上述组分的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42 °C，孵育3min。然后置于冰上放置。
[0085]第三步反转录反应，反应体系及条件如表5所示：
[0086] 将反转录反应中的Mi X，加到gDNA去除步骤的反应液中，充分混匀。42 °C，孵育 Ιδη?ηΑδ?，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后续实验，或低温保存。
[0087] 3)扩增IncRNA ENST00000509938.1:采用ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix荧光定量试剂盒（货号4367659)，以反转录的cDNA为模板进行荧光定量PCR扩 增。
[0088] 荧光定量PCR体系如表6所示；
[0089] 荧光定量PCR程序:第一步95 °C 10分钟；第2步，95 °C 15S，60 °C 1分钟；第三步，95 °C 155,60°(：1分钟，95°(：155，共40个循环。
[0090] 电泳检测，选用0120000Marker(北京康为世纪生物科技有限公司，货号CW0632)结 果如图2所示:扩增片段大小与预期相同，扩增产物只有一个条带。该引物对符合上述标准。 上游的特异性引物，其序列见序列表SEQ ID No.2,下游的特异性引物，其序列见序列表SEQ ID No.2。
[0091] 2.标准DNA模板的制备
[0092] 根据IncRNA ENST00000509938.1碱基序列（其核酸序列如序列表SEQ ID No.l所 示），委托上海生工合成。
[0093]取样2ul合成产物，连接到Puc-TTA克隆载体(北京康为世纪生物科技有限公司，货 号CW0801)，随后转化到DH5a感受态细胞中。通过序列为SEQIDNo.2和SEQIDNo.3的特异 性引物筛选阳性克隆，提取质粒DNA，质粒DNA用7300 real time PCR system核酸定量仪定 量，并做10倍系列稀释作为标准曲线(标准DNA模板浓度范围在102-10 6拷贝/ul)。
[0094] 3.敏感性实验将标准
[0095] 将标准DNA模板质粒按比例稀释为102、103、10 4、105、106拷贝/111，进行荧光定量?0? 检测灵敏度。最低检出浓度为1〇 2拷贝/ul。
[0096] 4.合成cRNA模板
[0097] 取上述急性心肌梗死和健康人的总RNA各3个，采用北京天根生化科技公司 FastQuant cDNA第一链合成试剂盒试剂盒(货号KR 106)对提取的总RNA反转录合成cDNA。
[0098] 第一步将模板RNA在冰上解冻；5XgDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10XFast RT Buffer、RNase-Free ddH20在室温（15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶 液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
[0099] 第二步打开二级结构，反应体系及条件如表7所示：
[0100] 将上述组分的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42 °C，孵育3min。然后置于冰上放置。
[0101 ]第三步反转录反应，反应体系及条件如表8所示：
[0102]将反转录反应中的MiX，加到gDNA去除步骤的反应液中，充分混匀。42 °C，孵育 Ιδη?ηΑδ?，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后续实验，或低温保存。
[0103] 5.荧光定量PCR检测IncRNA ENST00000509938.1
[0104] 米用ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix焚光定量试剂盒（货号 4367659)，以反转录的cDNA为模板进行荧光定量PCR扩增。
[0105] 荧光定量PCR体系如表9所示：
[0106] 荧光定量PCR程序:第一步95°C10分钟；第2步，95°C15S，60°C1分钟；第三步，95°C 155,60°(：1分钟，95°(：155，共40个循环。
[0107] qRT-PCR检测ENST00000509938.1在健康对照组与急性心肌梗死组中的相对表达 量如附图3所示，根据qRT-PCR的相对定量公式：2^AAc;t，分别计算出IncRNA ENST00000509938.1在急性心肌梗死患者(AMI)和健康人(N)中的表达水平，结果所示急性 心肌梗死患者(AMI)与健康人的IncRNA ENST00000509938.1表达水平比较，其值分别 为2.1622、0.7299、1.0747，其平均值为 1.6184。以上结果说明，IncRNA ENST00000509938.1 在急性心肌梗死患者血液中普遍高表达，这与前面所述的IncRNA芯片结果 ENST00000509938.1上调2.818倍相一致，其中，由图中可知，P小于0.05，具有统计学意义。 因此，IncRNA ENST00000509938.1可以作为急性心肌梗死诊断的新的血液生物标志物，用 于急性心肌梗死的筛查。
[0108] 以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据 实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
[0109] 表1
[0110]
[0123]表8 「01241
【主权项】
1. 一种在急性心肌梗死患者血液中高表达的长链非编码RNA ENST00000509938.1，其 特征在于该长链非编码RNA ENST00000509938.1的序列如SEQ ID N0:1所示。2. 根据权利要求1所述的在急性心肌梗死患者血液中高表达的长链非编码 RNAENST00000509938.1，其特征在于该长链非编码IncRNA ENST00000509938.1 为 ENST00000509938:1 的全长。3. -种体外检测血液中根据权利要求1或2所述的长链非编码RNAENST00000509938.1 的制剂或诊断剂或药物或试剂盒，其特征在于该制剂或诊断剂或药物或试剂盒包括特异性 引物对、标准DNA模板、PCR反应液，其中，特异性引物对包括上游引物和下游引物，上游引物 的核苷酸序列为SEQIDNo :2，下游引物的核苷酸序列为SEQIDNo:3。4. 根据权利要求3所述的体外检测血液中长链非编码RNA ENST00000509938.1的制剂 或诊断剂或药物或试剂盒，其特征在于该试剂盒为荧光定量PCR检测试剂盒。5. 根据权利要求3或4所述的体外检测血液中长链非编码RNA ENST00000509938.1的制 剂或诊断剂或药物或试剂盒，其特征在于特异性引物对用于SYBR Green、Taqman探针、分子 信标、双杂交探针、复合探针的检测。6. 根据权利要求3或4或5所述的体外检测血液中长链非编码RNA ENST00000509938.1 的制剂或诊断剂或药物或试剂盒，其特征在于PCR反应液为荧光定量PCR反应液。7. 根据权利要求6所述的体外检测血液中长链非编码RNA ENST00000509938.1的制剂 或诊断剂或药物或试剂盒，其特征在于荧光定量PCR反应液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。8. 根据权利要求3或4或5或6或7所述的体外检测血液中长链非编码 RNAENST00000509938.1的制剂或诊断剂或药物或试剂盒，其特征在于还包括荧光染料。9. 一种检测根据权利要求1或2所述的长链非编码RNA ENST00000509938.1的方法，其 特征在于按下述步骤进行：第一步，提取血液总RNA;第二步，制备cDNA;第三步，定量扩增 IncRNA ENST00000509938.1。10. -种根据权利要求1或2所述的长链非编码RNA ENST00000509938.1在制备用于检 测急性心肌梗死的试剂盒或用作检测急性心肌梗死药物的新靶点的应用。
【文档编号】C12N15/11GK106086017SQ201610306211
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】李晓梅, 杨毅宁, 翟慧, 马依彤, 刘芬, 陈邦党, 谢翔, 向阳, 廖武
【申请人】新疆医科大学第附属医院, 新疆医科大学第一附属医院