专利名称：视神经脊髓炎特异诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一个用于诊断视神经脊髓炎的水通道蛋白一4表位抗原多肽片段，即视神经 脊髓炎特异诊断试剂盒。
背景技术：
在已有技术中，视神经脊髓炎(neuromylitis optica, NM0)有称Devic病，其病因不明 。临床表现多为双侧急性神经炎或球后视神经炎，以及在发生视神经炎的同时或前后发生的 脊髓炎所以引起的截瘫，病人视力多急剧下降至光感或完全失明，眼底表现为视盘充血、水 肿(视神经炎型)或正常眼底(球后视神经炎型)。此外，尚未有瞳孔光反射迟钝和消失、 巨大的中心暗点或视野向心縮小等改变，偶可伴有眼外肌麻痹。本病死亡率约为50%，多因 呼吸肌麻痹或因继发肺及泌尿系统的感染死亡。
水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)是介导水跨膜转运的一个大的跨膜蛋白家族，分布于 高等脊椎动物上皮细胞或内皮细胞。结构上由28KD亚单位组成四聚体，每个亚单位构成孔径 约O. 38nm的水孔通道，在掺透压驱动下实现水双向跨膜转运。目前ll种亚型已经在哺乳动物 中被确定(AQP0—10)，各种亚型的体内分布具有组织特异性。其中水通道蛋白一4 ( Aquaporin — 4， AQP — 4)以极化形式集中分布于中枢神经系统脑毛细血管周边的星形胶质细 胞足突或室管膜细胞。血脑屏障(blood—brain barrier, BBB)为脑内另一调控水平衡的 复合体，由无窗孔的脑毛细血管内皮细胞及细胞间紧密连接、基底膜、星形胶质细胞等组成 。介于血液和中枢神经(central nervous system, CNS)之间，限制血液中某些离子、大分 子物质转移到脑实质，此屏障作为维持CNS内环境稳定、保障脑功能正常行使提供了重要的 保障。血脑屏障分化发育过程中脑毛细血管内皮细胞间紧连接的形成虽被认为是其成熟的标 志，但血脑屏障生理功能的实现有赖于个组成成分间的相互作用。近来对星型胶质细胞调控 血脑屏障物质交换和脑内水平衡方面的作用日益受到重视，并认为与水通道蛋白一4表达有 关。
由于脑胶质细胞及室管膜上皮细胞上有大量水通道蛋白一4表达，现认为水通道蛋白一4 在脑水肿的病理生理变化中发挥着重要的作用。研究发现水通道蛋白一4广泛存在于蛛网膜 下腔、血管周围的胶质细胞、室管膜细胞及参透压感受器官，其可调节脑脊液及细胞液体积 的功能。Kiening等研究发现。脑缺血72小时后水通道蛋白一4的表达与脑水肿成正比上升，而在水通道蛋白一 4基因敲除鼠膜型中脑水肿明显减轻，以上研究揭示水通道蛋白一 4在脑组 织水代谢调节中起关键作用，并提示水通道蛋白一4可能参与了脑水肿形体可能与视神经脊 髓炎密切相关。而且，这种抗体只存在于视神经脊髓炎患者血清中，而在典型的多发性硬化 症(MS)患者血清中则没有。因此这一发现对临床鉴别诊断，指导临床治疗具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是针对上述技术而提供一个人的水通道蛋白一4表位抗原多肽片段氨基酸 序列用于诊断试剂研制。
本发明的技术解决方案是视神经脊髓炎特异诊断试剂盒，其特征在于用于诊断视神经 脊髓炎的水通道蛋白一4表位抗原多肽片段，其氨基酸序列为"CTINWGGTEKPLPVD"。所述 水通道蛋白一4表位抗原多肽片段用于制备视神经脊髓炎以及定性和定量检测人血清中水通 道蛋白一4抗体试剂和试剂盒。
下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
具体实施例方式
1，采用生物信息学和结构生物学等国际最先进科学技术确定水通道蛋白一4抗原多肽片 段。水通道蛋白一4是一个四聚体跨膜蛋白，在每个单体蛋白表面有三个伸向细胞外的亲水 肽段，其他部分位于细胞膜内和插入膜中，它们不构成水通道蛋白-4的表位抗原，血清中的 抗水通道蛋白一4自身抗体的靶标主要为三个伸向细胞外的亲水肽段，因此这三个肽段中的 有个为我门的选择的表位抗原肽段，即"CTINWGGTEKPLPVD"。
2，利用生物工程技术和多肽合成仪合成水通道蛋白一4表位抗原多肽片段。因为水通道 蛋白一4表位抗原多肽片段由15个氨基酸组成，所以利用多肽合成仪合成是最为经济途径。
3，选择适宜的表为抗原多肽片段藕连载体。牛血清白蛋白(BSA)和钥孔血蓝蛋白( KLH)是最常用的表位抗原多肽片段载体，我们使用常规藕连技术进行通道蛋白一4的表位抗 原多肽片段与载体供价藕连，制备血清学反应抗原。
4、使用制备的水通道蛋白一4的表位抗原多肽片段与载体藕连抗原包被ELISA用96孔酶 标板，用患者被检血清与包被的抗原反应，在用辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体反应， 用ELISA方法检测患者血清中是否含有抗水通道蛋白一4抗体，从而达到诊断视神经脊髓炎目 的。
权利要求
1.一种视神经脊髓炎特异诊断试剂盒，其特征在于用于诊断视神经脊髓炎的水通道蛋白-4表位抗原多肽片段，其氨基酸序列为“CTINWGGTEKPLPVD”。
2.按照权利要求l所述的视神经脊髓炎特异诊断试剂盒，其特征在于 所述水通道蛋白一4表位抗原多肽片段用于制备视神经脊髓炎以及定性和定量检测人血清中 水通道蛋白一4抗体试剂和试剂盒。
全文摘要
本发明涉及一种视神经脊髓炎特异诊断试剂盒，一个用于诊断视神经脊髓炎的水通道蛋白-4表位抗原多肽片段，即“CTINWGGTEKPLPVD”。使用生物工程技术利多肽合成仪制备半抗原，再与载体耦连制备用于定性和定量检测人血清中抗水通道蛋白-4抗体以及制备用于诊断视神经脊髓炎的试剂和试剂盒。本发明也提供包括所述水通道蛋白-4表位抗原多肽片段的氨基酸序列，制备方法和用途。尤其强调用于商业化生产，制备定性定量检测人血清中抗水通道蛋白-4抗体利制备用于诊断视神经脊髓炎试剂和试剂盒。
文档编号G01N33/68GK101576558SQ200810301428
公开日2009年11月11日 申请日期2008年5月6日 优先权日2008年5月6日
发明者海 庞, 玉 庞, 高淑梅 申请人:通化蓝罡生物科技有限公司