一种慢性肾病诊断试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种慢性肾病诊断试剂盒，包括FGF23单抗隆抗体、生物素标记试剂Sulfo-NHS-LC-Biontin、pH 7.0 0.1M的PBS缓冲溶液、casein盐溶液、链霉素亲和素和底物TMB，FGF23抗体与生物素标记试剂Sulfo-NHS-LC-Biontin标记条件为重量比为1:5～1:12，链霉素亲和素的稀释倍数是1:3000。本发明试剂盒FGF23的最低检测限值为10pg/ml，比常规单抗提高了10倍的灵敏度，对于慢性肾病的早期诊断具有重要意义。
【专利说明】-种慢性肾病诊断试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明属于疾病检测【技术领域】，具体设及一种慢性肾病诊断试剂盒。
【背景技术】
[0002] 成纤维细胞生长因子23(FGF23)是FGFs超家族中的一员，它通过抑制磯的重 吸收及增加磯的外分泌，在慢性肾病病人早期磯稳态的维持中发挥重要作用（J Am Soc N巧虹ol. 2007:18:1637-1647)。《美国肾脏杂志》及《新英格兰》相继报道，慢性肾病病人 FGF23浓度升高先于磯代谢异常；FGF23表达水平与慢性肾病的恶化及晚期透析治疗病人 的死亡率成独立相关。因此，FGF23成为了肾功能早期诊断的重要标志物。由于目前临床 使用的生物标物-肌氨酸酢存在着准确性低、特异性不高的缺陷，而且一旦查出肌氨酸酢 水平超标，多数病程已经达到中晚期。因此，开发新的慢性肾病诊断试剂一FGF23单克隆抗 体试剂盒具有重要的临床应用价值。
【发明内容】
[0003] 本发明目的在于提供一种慢性肾病诊断试剂盒，为慢性肾病早期诊断提供一种简 便易行的方法，为慢性肾病的检测和治疗提供了新方法与途径。
[0004] 本发明具体通过W下技术方案实现：
[0005] 一种慢性肾病诊断试剂盒，包括FGF23单抗隆抗体、生物素标记试剂 Sul化-NHS-LC-Biontin、缓冲溶液、casein盐溶液、链霉素亲和素和底物TMB。
[0006] 本发明试剂盒使用抑7.00. 1M PBS作为包被缓冲溶液，检测样品的包被体积为 lOOy 1，包被浓度为2yg/ml。
[0007] 本发明试剂盒FGF23抗体与生物素标记试剂Sulfo-NHS-LC-Bio ntin标记条件为 重量比为1:5?1:12,混合后的浓度为2 y g/ml。
[000引本发明试剂盒所述的casein盐溶液为FGF23、检测抗体和链霉素亲和素的稀释 液，链霉素亲和素的稀释倍数是1:3000。
[0009] 本发明试剂盒所述的链霉素亲和素与底物的作用时间为10分钟。
[0010] 本发明试剂盒FGF23的最低检测限值为lOpg/ml，检测线性范围是2400pg/ml? lOpg/mlo
[0011] 本发明的有益效果为为慢性肾病的早期检测提供了一种体外检测试剂盒，该试剂 盒对FGF23临床检测的灵敏度达到lOpg/ml，比常规单抗提高了 10倍的灵敏度，对于慢性肾 病的早期诊断具有重要意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1是本发明实施例吸光度值与样品浓度间的线性关系。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，W下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加W变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对W上实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0014] 实施例1FGF23检测试剂盒的制备
[001引利用FGF23-FC抗原免疫小鼠，获得杂交瘤细胞阳性FGF23抗体克隆，针对其中的 1276株克隆进行了筛选，检测了他们对FGF23蛋白的结合特异性，筛选得到编号278、6B12 和6化的=种抗体。
[0016] 利用前期筛选的S株FGF23单克隆抗体278,她12和6化进行FGF23 ELISA检测 试剂盒检测条件的优化。
[0017] l)2mg/ml她12和細1各lOOy 1按1:20、1:10、1:5室温进行30分钟生物 素化反应，反应结束用等体积1 % BSA结束反应。用包被抗体278,进行包被，3ng/ ml FGF23 =倍梯度稀释，生物素化抗体进行检测，考察生物素化效率，生物素试剂选择 畑S-PEG4-Biontin(Lot#ND 172078)，具体情况见表 1 ;
[001引表1生物素标记比率优化
[0019]
【权利要求】
1. 一种慢性肾病诊断试剂盒，其特征在于：FGF23单抗隆抗体、生物素标记试剂 Sulfo-NHS-LC-Biontin、缓冲溶液、casein盐溶液、链霉素亲和素和底物TMB。
2. 根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述的缓冲溶液为pH 7. 0、0. 1M 的 PBS。
3. 根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述的F GF23单抗隆抗体与生 物素标记试剂Sulfo-NHS-LC-Biontin标记条件为重量比为1:5?1:12,混合后的浓度为 2 y g/ml〇
4. 根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述的链霉素亲和素的稀释倍数 为1:3000,所使用的稀释液为casein盐溶液。
5. 根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述的链霉素亲和素与底物的作 用时间为10分钟。
6. 根据权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒最低检测限值为 10pg/ml，检测线性范围是 2400pg/ml ?10pg/ml。
【文档编号】G01N33/577GK104502596SQ201410811167
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月23日 优先权日:2014年12月23日
【发明者】李校堃, 梁广, 王晓杰, 李世军 申请人:温州医科大学