一类以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针、其制法及应用的制作方法
【专利摘要】一类以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针、其制法及应用。所述荧光探针具有通式Ⅰ的结构，如附图1。本发明的荧光探针有效地改进现有的肿瘤标记荧光探针的不足，能够更加灵敏准确地反应出COX-2表达量异常变化的靶细胞，适用于有效的、专一的标记癌症活细胞的近红外荧光探针。并且合成简便，产品易得，在非肿瘤细胞内具有很低的荧光背景，在肿瘤细胞内具有较强的荧光信号，且对肿瘤细胞具有很强的专一性标记。同时，这类化合物具有良好的细胞膜通透性，并具有较低的生物毒性、光毒性、光漂白性，并且能够定位于肿瘤细胞内的某种特殊细胞器。
【专利说明】—类以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针、其制法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一类以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针、其制备方法，以及利用该类荧光探针在制备生物标记试剂盒、尤其是肿瘤细胞标记试剂盒中的应用。
【背景技术】
[0002]据世界卫生组织(WHO)统计，20世纪80年代全世界每年新患癌症的病人约700万，每年死于癌症者约500万人，癌症正以一股势不可挡的趋势向人类进攻，因此建立一种简便、快速、有效、灵敏的癌症标记技术是一项重要的工作。现有的标记成像的方法主要有:X线检测技术、超声波检测技术、CT检测技术、核磁共振(MRI)检测技术、红外热像图检测技术、近红外线扫描检测技术、PET-CT检测技术等。但上述方法在实际成像应用中存在以下缺陷:缺乏成像专一性，具有大的放射性损伤，无法独立标记诊断肿瘤，无法对肿瘤进行深度成像等等。
[0003]荧光探针由于具有非侵入性、易操作、能够实现可视化检测等特点，受到普遍的重视。近年来，应用荧光探针对生物标志物进行识别和检测的荧光显微成像及检测技术已逐渐被应用到生物识别、医学诊断、疾病治疗过程中。然而，这些荧光染料激发、发射波长都较短，在进行活细胞共聚焦成像时，对活细胞造成很大的损伤，同时，此类荧光染料容易发生光漂白，并易受到自发荧光的干扰，因此开发一种激发、发射波长长，光稳定性好，对细胞具有低毒性的近红外探针具有重要意义。尼罗蓝类荧光染料具有优良的光化学物理性质，例如高的摩尔消光系数、良好的光稳定性、高的荧光量子产率等优点。对细胞的内环境不敏感，而且可以解决探针对细胞高毒性和光漂白严重等弊端。
[0004]随着成像技术的发展，荧光显微镜在生命科学的研究中已经成为最重要的成像工具。与紫外-可见区相比，近`红外荧光成像具有显著优势，包括暗场成像、避免荧光漂白和光致毒及降低组织自发荧光干扰等，因此近红外荧光成像技术为生物成像提供了一个崭新的平台。目前，对肿瘤标记成像、其活体内分布成像以及肿瘤深度成像的专一性近红外荧光探针还相对较少，开发专一性好的标记肿瘤的近红外荧光探针是实现近红外肿瘤成像的关键。但现有的靶向到生物标志物的荧光染料仍存在着特异性、专一性、灵敏度及生物适应性等问题。
[0005]环氧合酶-2 (C0X-2)属于一种同工的应激酶，一般情况下不表达。只有在机体处于炎症期间以及癌症的时候才表达，并且过度表达，随着炎症和癌症的发生与发展，C0X-2的表达量也逐渐增加。并且已有文献报道，某些特定的C0X-2羧酸类抑制剂可以通过氢键很好地与C0X-2的膜结合区内的氨基酸(Argl20，Tyr355和Glu522)结合。基于此，以C0X-2为生物标志物，将C0X-2的羧酸类抑制剂——吲哚美辛引入至可检测的诊断剂中，使其作为分子的识别基团，靶向引导结合至C0X-2的膜结合区域，从而实现靶细胞的检测是本研究领域极具吸引力的研究方向。CN101528222(
【公开日】2009-09-09)所公开用于诊断性和治疗性靶向C0X-2的方法和组合物(包括吲哚美辛通过连接单元与尼罗蓝分子连接而成的诊断剂27uu)即体现了此研究思路。然而，这类诊断剂在应用中仍然存在的问题是:当作为检测对象的组织、器官或个体中无高C0X-2表达的靶标细胞时，荧光仍然存在，这会影响C0X-2表达量增加初期的准确诊断，实际应用中，极可能导致肿瘤或炎症发生初期的诊断失准。因此，需要开发更为灵敏的诊断试剂。
【发明内容】
[0006]针对现有技术的应用缺陷，本发明拟提供一类新的包括尼罗蓝和吲哚美辛结构单元的近红外突光探针，所述的突光探针应当能够更加灵敏地反应出C0X-2表达量的变化，所述荧光探针具有如下结构通式1:
[0007]
【权利要求】
1.一类以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，所述荧光探针具有如下结构通式1:
2.权利要求1所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，其特征在于所述的η为3~7的整数。
3.权利要求1所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，其特征在于所述的η是4~6的整数。
4.权利要求1中任一权利要求所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，其特征在于所述的R4和R5各自独立地选自-OCH3或卤素。
5.权利要求4所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，其特征在于所述的R4为-OCH3, R5选自F或Cl。·
6.权利要求1所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，其特征在于所述的R1和R2各自独立地选自Cm烷基或Cy烷基磺酸基。
7.权利要求1所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针，选自化合物II和II’:
8.权利要求1所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤: I) 1-溴萘与H2N-R3-NH2按摩尔比1:1-1:5反应，制备化合物II1:
9.权利要求1所述的以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针在制备生物样品标记试剂中的应用。
10.权利要求9所述的应用，其特征在于所述的生物样品是肿瘤细胞。
【文档编号】C09K11/06GK103820104SQ201410072966
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年2月28日 优先权日:2014年2月28日
【发明者】樊江莉, 王本花, 彭孝军, 仉华 申请人:大连理工大学