专利名称：：淀粉在制备色谱分离介质中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及淀粉作为色谱分离介质中的应用，特别用于分离极性小的并且流动相中含水少的多官能团的天然产物及其它化工医药、食品、化妆品等产品。
背景技术：
：在现代生化制备技术中，色谱分离占有核心地位，在天然产物领域可用于分离各种初级代谢产物如氨基酸、核苷酸、单糖类、有机酸、脂肪酸；次级代谢产物如生物碱、萜类、精油、糖苷、色素；各种生物大分子如蛋白质、多肽、酶、核酸、多糖。色谱方法根据分离机制的不同可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶过滤(分子筛)色谱和亲和色谱等。用于吸附色谱的吸附剂分为无机吸附剂如硅胶、氧化铝、氧化镁、碳酸钩、磷酸钙；有机吸附剂如纤维素、活性炭、聚酰胺等。硅胶作为应用最为广泛的一种极性吸附剂，主要成分是二氧化硅，其化学性质稳定、无毒，具有很强的吸附能力。此外常用的吸附剂还有l)氧化铝分为碱性氧化钼、中性氧化铝和酸性氧化铝，其吸附活性与含水量关系很大，在一定温度下除去水分可使氧化铝活化；2)活性炭分为粉末活性炭、颗粒活性炭和锦纶活性炭，其吸附能力在水溶液中最强，使用前一般在15(TC加热4-5小时，将吸附的大部分气体除去，锦纶活性炭则在10(TC以下进行。3)聚酰胺国外称尼龙，国内称锦纶，特别适合低分子量化合物的分离，如酴、羧酸、DNP-氨基酸、醌及芳香族化合物等。纤维素的吸附活性最小，因而多用于分离多官能团的天然产物。由于天然药物所含成分多种多样，五花八门，从其中寻找已知或者未知有效成分或有效部位时情况较为复杂，因而，需要寻求更多的分离方法及分离介质，为化合物的分离和精制工作提供更多的选择手段。淀粉是植物体中贮存的养分，存在于种子和块茎中，各类植物中的淀粉含量都较高，大米中含淀粉62%~86%,麦子中含淀粉57%~75%,玉蜀黍中含淀粉65%~72%，马铃薯中则含淀粉12%~14%。淀粉有直链淀粉和支链淀粉两类。直链淀粉含几百个葡萄糖单元，支链淀粉含几千个葡萄糖单元。在天然淀粉中直链的约占22%~26%，它是可溶性的，其余的则为支链淀粉。据发明人所知，淀粉用作色谱分离介质未见报道。
发明内容本发明的目的是提供一种性能稳定、使用安全、廉价易得，并且具有一定分离活性的物质一淀粉，为化合物的分离和精制工作带来更多的选择性。本发明所述淀粉选自小麦淀粉、红薯淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉等任意淀本发明所述淀粉特别适合用于分离分子量小于1000的弱极性化合物，洗脱剂选择非水溶剂。本发明所述淀粉用于介质时，淀粉经发酵后烘干，过100目筛使用。淀粉的结构决定了其可以作为分离介质，特别是能够用来分离弱极性的化合物，并且具有廉价易得，安全环保的优点，对于分离工作，不失为一种很好的选择。在分离过程中应当注意淀粉遇水易成糊状，故洗脱系统不应含水。图i为溴甲酚绿、苏丹ni号经淀粉分离时的柱色谱图2为苏丹III号洗脱液；图3为溴甲酚绿、苏丹III号经淀粉分离时的柱色谱图；图4为溴甲酚绿洗脱液；图5为芦丁与槲皮素的薄层色谱图；图6为哈巴苷与哈巴俄苷的薄层色谱具体实施例方式本发明采用将淀粉加入适量的水，混合均匀，经发酵后烘干，过100目筛。由于发酵后的淀粉具有多孔结构，能够有效的吸附一些化合物。实施例h对色素的分离溴甲酚绿0.0015g,苏丹III号0.0045g,100目小麦淀粉15g装于柱中。将溴甲酚绿、苏丹m号两种色素用少量甲醇溶解于试管中，湿法上样于淀粉柱，洗脱剂为甲醇。用锥形瓶分别收集两种色素溶液，分离效果如图1至图4所示，可以看出使用小麦淀粉，溴甲酚绿与苏丹in号可以有效的分离。实施例2:对芦丁、槲皮素的分离将15g红薯淀粉装于柱中，敲打均匀，将5mg芦丁与5mg槲皮素混合，用甲醇溶解，湿法上样。先以乙酸乙酯为洗脱剂，配合薄层检视，至无槲皮素斑点时，换甲醇为洗脱剂，收集洗脱液，配合薄层检视，至无芦丁斑点时停止洗脱。展开剂正丁醇-乙酸-水=4:1:5(上)显色剂砩蒸气熏蒸如图5所示，l为芦丁对照品；2为槲皮素对照品；3为芦丁MeOH洗脱液；4为槲皮素EtOAc洗脱液。实施例3:对哈巴苷、哈巴俄苷的分离将15g土豆淀粉装于柱中，敲打均匀，将5mg哈巴苷与5mg哈巴俄苷混合，用甲醇溶解，湿法上样。先以乙酸乙酯为洗脱剂，配合薄层检视，至无哈巴俄苷斑点时，换甲醇为洗脱剂，收集洗脱液，配合薄层检视，至无哈巴苷斑点时停止洗脱。展开剂乙酸乙酯-乙醇-水=4:1:0.5显色剂2%香草醛硫酸溶液如图5所示，l为哈巴苷对照品；2为哈巴俄苷对照品；3为哈巴苷MeOH洗脱液；4为哈巴俄苷EtOAc洗脱液。实施例4:高效液相色谱法测定淀粉最大吸附量称量5g小麦淀粉于锥形瓶中，精密称取芦丁对照品0.9771g,使芦丁与淀粉质量之比为1:5，加入60ml甲醇溶解芦丁，将芦丁的甲醇溶液倒入装有淀粉的锥形瓶中，静置一天。(1)待测溶液的配制用移液管吸取2ml静置一天的芦丁溶液，用甲醇定容于50ml容量瓶中，即为待测溶液。(2)对照溶液的配制精密称取芦丁8.43mg，用甲醇定容于50ml容量瓶中，制成浓度为0.17mg/ml的对照溶液。(3)结果处理由积分谱图计算5g淀粉吸附芦丁的质量为0.1074g;0.1074/5xl00%=2.1%即50g淀粉最大吸附lg,丁。可见，淀粉用于分离化合物时，吸附剂的最大用量可为化合物上样量的50倍。实施例5:淀粉吸水量的测定按照膨胀力来定义的吸水能力测定方法，单位为ml/g,釆用离心分离法。取4个干燥的离心管，编号为1，2，3，4，分别称取10g小麦淀粉于离心管中，各加水80ml。其中1、2号管放置30min后离心；3、4号管放置60min后离心。离心后除去多余水分。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>经计算，吸水30min后的平均吸收倍率为2.75ml/g;吸水60min后的平均吸收倍率为2.45ml/g。说明淀粉可以吸收较其自身质量2-3倍的水分，但若用于分离化合物时，淀粉遇水时分离能力会大大降低。实施例6:淀粉中水分的测定取两个干燥至恒重的称量瓶，分别编号为1、2。精密称取淀粉2.6280g、2.1947g，分别平铺于瓶1、2中。平铺的厚度不超过5mm，打开瓶盖在100-105°C干燥5h。将瓶盖盖好移至干燥器中，冷却30min，精密称定重量。再在上述温度干燥lh，冷却，称重。至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含有的水分的百分数。经计算，两次测得的含水量的平均值为6.71%。可见淀粉作为分离介质使用时含有一定的水分，其含水量在7%左右。权利要求1、淀粉在制备色谱分离介质中的应用。2、根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述淀粉选自小麦淀粉、红薯淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉。3、根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于淀粉经发酵后使用。4、根据权利要求3所述的用途，其特征在于淀粉经发酵后烘干，过100目筛。全文摘要本发明公开了淀粉在制备色谱分离介质中的应用。淀粉经发酵制粒后可作为一种吸附载体，用于色谱
技术领域：
，可用于分离极性小的并且流动相中含水少的多官能团的天然产物。淀粉具有廉价易得、安全环保、性能稳定的优点，作为一种吸附剂，淀粉能够为化合物的分离和精制工作带来更多的选择性。文档编号B01J20/281GK101279247SQ200810017239公开日2008年10月8日申请日期2008年1月7日优先权日2008年1月7日发明者孙文基,琳肖申请人:西北大学