m)，稳定剂聚乙烯吡咯烷酮用量为 反应介质的1.6 % (m/m)，引发剂偶氮二异丁腈用量为单体用量的2.2 % (m/m)，反应温度 60°C，搅拌速度为200r/min，反应时间为24h ;
[0057] 2.通过单步种子溶胀法制备交联度为40%的单分散高交联甲基丙烯酸缩水甘油 酯-二乙烯基苯共聚微球。种子微球0. 6g，单体甲基丙烯酸缩水甘油酯的用量为总有机相 用量的15% (m/m)，交联剂二乙烯基苯用量为总有机相用量的20% (m/m)，乳化剂十二烷基 硫酸钠用量为总有机相用量的2. 7% (m/m)，稳定剂聚乙烯醇用量为总量的I. 5% (m/m)， 引发剂过氧化苯甲酰用量为单体用量的0.7% (m/m)，致孔剂甲苯用量为总有机相用量的 47% (m/m)，溶胀比为55倍，乳化温度为20°C，反应温度70°C，搅拌速度200r/min，反应时 间24h，将聚合物微球用甲苯抽提除去致孔剂，然后用水，乙醇洗涤；
[0058] 3.以十八胺为功能基团修饰高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微 球；
[0059] 4.用匀浆法将十八胺修饰后的高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯填料 装柱；
[0060] 5.用实施例1 (5)方法对色谱柱色谱性能进行测定，结果与1 (5)相一致。
[0061] 实施例5 :色谱性能测试
[0062] 通过利用三联苯和苯并菲、苯酚和咖啡因、单取代苯类等对该固定相进行色谱性 能分析，该固定相显示出空间选择性、氢键作用、π-π作用和疏水性等多种作用机理；同 时将该固定相应用于十三种亚硝胺的分离分析，显示出优越的色谱分离特性。
[0063] 仪器：Ultimate 3000高效液相色谱仪，VWD-3400紫外检测器，波长233nm ;
[0064] 分离柱：自制填料填装的4. 6 X 200mm不锈钢色谱柱；
[0065] 淋洗液：乙腈 / 水（40 :60, v/v);
[0066] 流速：lmL/min;
[0067] 试样：十三种亚硝胺（二乙醇亚硝胺，N-亚硝基二甲胺，亚硝基-二乙基胺，二 丙基亚硝胺，亚硝基二异丙胺，N-亚硝基二丁胺，N-亚硝基二异丁胺，N-亚硝基-N, N-二 (3, 5, 5-三甲基己基）胺，N-亚硝基吗啉，N-亚硝基哌啶，N-硝基联苄基胺，N-甲基-N-亚 硝基苯胺，N-亚硝基-N-乙基苯胺）。
[0068] 图1是高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球的扫描电镜图，通过 观察扫描电镜图，制备的高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球粒径范围在 6-8 μ m之间，单分散性好，无需进行分级和筛分。
[0069] 图2.是十八胺修饰的高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球的制 备步骤图。
[0070] 图3是十八胺修饰后的高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球的红 外色谱图；1187CHT1为C-N伸缩振动红外吸收峰。
[0071] 图4是十三种亚硝胺的分离色谱图；使用简单的乙腈水流动相，无需使用缓冲盐， 就可取得十三种亚硝胺在自制的反相/弱阴离子交换色谱固定相上的基线分离。
[0072] 图5是同等色谱条件下，十三种亚硝胺在商品化C18色谱柱上的分离色谱图。通 过对比发现，本发明专利制备的反相/弱阴离子交换混合模式固定相显示对极性分子更好 的分离选择性。
[0073] 如下表所示：是十八胺修饰后的交联度为55%的高交联甲基丙烯酸缩水甘油 酯-二乙烯基苯共聚微球的元素分析数据；结果显示微球中氮含量为0. 52%，十八胺的键 合量为 37.2ymol/g。
[0074]
【主权项】
1. 一种以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质的反相/弱阴离子交 换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：采用分散聚合法制备单分散的线性聚苯乙 烯种子微球；采用单步种子溶胀法，制备高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚 微球；以十八胺为反应原料，制备一种以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球 为基质的反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相；用匀浆法装柱，并对其色谱性能进行 表征；用于分离十三种亚硝胺。
2. 根据权利要求1所述的以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质的 反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：在单分散的线性聚苯乙 烯种子微球制备过程中，反应介质为乙醇水溶液，体积浓度为75~100%，单体苯乙烯的质 量浓度为总量的5~30%，稳定剂聚乙烯吡咯烷酮的质量为反应介质质量的0. 5~4%，弓丨 发剂偶氮二异丁腈质量为单体质量的1~5%，反应温度为40~85°C，搅拌速度为100~ 400r/min，反应时间为12~24h。
3. 根据权利要求1所述的以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质 的反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：在单步种子溶胀法合 成聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球的过程中，单体甲基丙烯酸缩水甘油酯 质量浓度为总有机相的5~30%，交联剂二乙烯基苯的质量为总有机相质量的10~75%， 乳化剂十二烷基硫酸钠质量为总有机相质量的2~4%，稳定剂聚乙烯醇质量为总质量的 0. 5~5%，引发剂过氧化苯甲酰质量为单体质量的0. 4~1. 5%，致孔剂甲苯质量为总有 机相质量的20~70%，溶胀比为10~70倍，乳化温度为20~35°C，反应温度为60~ 85°C，搅拌速度为100~300r/min，反应时间为12~48h，制备的高交联甲基丙烯酸缩水甘 油酯-二乙烯基苯共聚微球粒径在6-8ym之间。
4. 根据权利要求3所述的以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质的 反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：所述的微球的粒度可以 通过致孔剂、交联剂、分散稳定剂溶度、溶胀温度、反应温度、引发剂浓度以及溶胀比的选择 来控制。
5. 根据权利要求1所述的以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质的 反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：在修饰高交联甲基丙烯 酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球的过程中，以过量十八胺为反应原料，异丙醇为溶剂， 加热搅拌反应。
6. 根据权利要求1所述的以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质的 反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：制备的反相/弱阴离子交 换色谱混合模式固定相通过色谱性能评价，显示多种色谱分离作用机理，所述的机理包括 JT-JT作用、氢键作用、弱阴离子极性交换作用、疏水作用和空间选择性，能够长期稳定地使 用。
7. 根据权利要求1所述的以高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯微球为基质的 反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法，其特征是：制备的反相/弱阴离子交 换色谱混合模式固定相具有多种色谱分离模式，十三种亚硝胺可以实现基线分离。
【专利摘要】本发明涉及一种以有机聚合物为基质的反相弱阴离子交换混合模式色谱固定相的制备方法。本发明针对硅胶作为固定相基质耐受pH值范围窄，以及高交联苯乙烯-二乙烯苯微球不容易衍生化反应的限制，制备了耐受pH值范围宽，含有大量的环氧基而易于衍生化的单分散性好的高交联甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球基质；本发明通过在高交联聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯共聚微球引入十八烷基胺，制备了反相/弱阴离子交换混合模式色谱固定相；通过色谱表征表明该固定相具有空间选择性、氢键作用、π-π作用和疏水性等多种分离作用机理；可用于十三种亚硝胺完全分离，显示出良好的分离效果。
【IPC分类】B01J20-30, B01J20-26, B01J41-12, B01J41-20, B01D15-32, B01D15-36
【公开号】CN104785225
【申请号】CN201510177602
【发明人】刘军伟, 李薇霞, 朱岩
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月15日