一种仿生双链磷脂膜整体柱及其制备方法与应用_3

文档序号:9480370阅读:来源:国知局
hexanol)的混合物和引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)混勾,超 声脱气5分钟,灌入改性的石英毛细管柱内,反应温度为60°C,反应12h,接高压栗用甲醇冲 洗,即得仿生双链磷脂膜整体柱(P〇ly(MDSPC-c〇-EDMA))。以上反应的示意图如图2所示。 其中MDSPC与交联剂的质量比为45:55,致孔剂中异丙醇与环己醇的质量比为83. 3:16. 7, MDSPC与交联剂质量之和,与致孔剂的质量比为29. 43:70. 57,引发剂的质量为MDSPC与交 联剂质量之和的1%。
[0044] 所述改性的石英毛细管通过以下方法制备:用lmol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细 管15min,再将石英毛细管两端封口放在10(TC水浴锅反应2小时;然后用去离子水冲洗石 英毛细管,直至流出来的液体pH为7. 0 ;接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4小时; 干燥完毕后,把体积比为1:1的甲醇和3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(γ-MAPs)混 合液打进石英毛细管中,两端封口且放在60°C水浴锅内反应12小时;最后分别用甲醇和水 各冲洗30分钟,氮气干燥12小时,即得改性的石英毛细管。
[0045] 用扫描电子显微镜观察本实施例制备的仿生双链磷脂膜整体柱的微观形貌,结果 显示整体材料具有微米级的通孔和微米级的三维连续骨架。其能谱分析图显示整体材料在 柱内部分布均勾。
[0046] 实施例3
[0047] 本实施例仿生双链磷脂膜整体柱的制备:
[0048] 将实施例1合成的1-十二烷酰-2-(11-甲基丙烯酰胺-N-十一烷酰)-SN-甘 油-3-磷酸胆碱(MDSPC),与交联剂(乙二醇二甲基丙烯酸酯,EDMA)、致孔剂(异丙醇与环 己醇混合)和引发剂(偶氮二异丁腈,AIBN)混匀,超声脱气5分钟,灌入改性的石英毛细管 柱内,反应温度为60°C,反应12h,接高压栗用乙腈冲洗,即得仿生双链磷脂膜整体柱。其中 MDSPC与交联剂的质量比为45:55,致孔剂中异丙醇与环己醇的质量比为83. 3:16. 7,MDSPC 与交联剂质量之和,与致孔剂的质量比为34. 43:65. 57,引发剂的质量为MDSPC与交联剂质 量之和的1%。
[0049] 所述改性的石英毛细管通过以下方法制备:用lmol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细 管15min,再将石英毛细管两端封口放在10(TC水浴锅反应2小时;然后用去离子水冲洗石 英毛细管,直至流出来的液体pH为7. 0 ;接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4小时; 干燥完毕后,把体积比为1:1的甲醇和3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(γ-MAPs)混 合液打进石英毛细管中,两端封口且放在60°C水浴锅内反应12小时;最后分别用甲醇和水 各冲洗30分钟,氮气干燥12小时,即得改性的石英毛细管。
[0050] 用扫描电子显微镜观察本实施例制备的仿生双链磷脂膜整体柱的微观形貌,结果 如图3所示,从图3可以看出,整体材料具有微米级的通孔和微米级的三维连续骨架。其能 谱分析图如图4所示,由图4可以看出,整体材料在柱内部分布均匀。
[0051] 本实施例所得的仿生双链磷脂膜整体柱的保留行为测试:乙腈和水为流动相,甲 苯和硫脲为测试化合物,结果如图5所示。
[0052] 测试条件:
[0053] 样品: 甲苯,硫脈;
[0054] 流动相: 乙腈/水;
[0055] 流速: 600nL/min ;
[0056] 检测波长:214nm。
[0057] 本实施例所得的仿生双链磷脂膜整体柱在反相模式下对10种药物的分离测试:
[0058] 采用梯度的条件,测试10种随机挑选的药物在整体柱上的分离效果,结果如图6 所示。
[0059] 测试条件:
[0060] 样品:1-N-乙酰对氨基酚;2-磺胺;3-苯磺酰胺;4-非那西丁;5-氢化可的松; 6-辛可卡因;7-氯氮平;8-氯贝特;9-噻康唑;10-胺碘酮;
[0061] 流动相: 乙腈,50mM乙酸铵溶液,pH = 7. 4 ;
[0062] 流速: 600nL/min ;
[0063] 梯度: 0%乙腈到100%乙腈,26min ;
[0064] 检测波长:254nm。
[0065] 本实施例所得的仿生双链磷脂膜整体柱用于制备细胞膜亲和色谱柱:
[0066] 将培养的目标细胞(乳腺癌细胞MDA-MB-435和前列腺癌PC3细胞)或组织细胞, 在冰浴中,匀浆和超声30min,4°C,3000g离心去掉细胞核内器官,获得细胞匀浆上清液; 4°C,1000g离心10min,进一步去残留细胞内器官,吸取上清溶液;4°C,1000g离心20min,获 得细胞膜沉淀。加入5~10mL体积的预冷生理盐水或等渗溶液,重悬得细胞膜备用溶液。 [0067] 将细胞膜备用溶液吸入流动注射栗,恒速注入本实施例所得的仿生双链磷脂膜整 体柱,旋转震动10~60min,4°C条件下反应6~24h,既可制备得磷脂单体-细胞膜亲和色 谱柱,接入高效液相色谱仪,可进行药物筛选和蛋白质、多肽及小分子的分析。
[0068] 实施例4
[0069] 本实施例仿生双链磷脂膜整体柱的制备:
[0070] 将实施例1合成的1-十二烷酰-2-(11-甲基丙烯酰胺-N-十一烷酰)-SN-甘 油-3-磷酸胆碱(MDSPC),与交联剂(乙二醇二甲基丙烯酸酯,EDMA)、致孔剂(异丙醇与环 己醇混合)和引发剂(偶氮二异丁腈,AIBN)混匀,超声脱气5分钟,灌入改性的石英毛细管 柱内,反应温度为60°C,反应12h,接高压栗用甲醇冲洗,即得仿生双链磷脂膜整体柱。其中 MDSPC与交联剂的质量比为45:55,致孔剂中异丙醇与环己醇的质量比为83. 3:16. 7,MDSPC 与交联剂质量之和,与致孔剂的质量比为39. 43:60. 57,引发剂的质量为MDSPC与交联剂质 量之和的1%。
[0071] 所述改性的石英毛细管通过以下方法制备:用lmol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细 管15min,再将石英毛细管两端封口放在10(TC水浴锅反应2小时;然后用去离子水冲洗石 英毛细管,直至流出来的液体pH为7. 0 ;接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4小时; 干燥完毕后,把体积比为1:1的甲醇和3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(γ-MAPs)混 合液打进石英毛细管中,两端封口且放在60°C水浴锅内反应12小时;最后分别用甲醇和水 各冲洗30分钟,氮气干燥12小时,即得改性的石英毛细管。
[0072] 用扫描电子显微镜观察本实施例制备的仿生双链磷脂膜整体柱的微观形貌,结果 显示整体材料具有微米级的通孔和微米级的三维连续骨架。其能谱分析图显示整体材料在 柱内部分布均勾。
[0073] 实施例5
[0074] 本实施例仿生双链磷脂膜整体柱的制备:
[0075] 将实施例1合成的1-十二烷酰-2-(11-甲基丙烯酰胺-N-十一烷酰)-SN-甘 油-3-磷酸胆碱(MDSPC),与交联剂(乙二醇二甲基丙烯酸酯,EDMA)、致孔剂(异丙醇与环 己醇混合)和引发剂(偶氮二异丁腈,AIBN)混匀,超声脱气5分钟,灌入改性的石英毛细管 柱内,反应温度为60°C,反应12h,接高压栗用甲醇冲洗,即得仿生双链磷脂膜整体柱。其中 MDSPC与交联剂的质量比为40:60,致孔剂中异丙醇与环己醇的质量比为83. 3:16. 7,MDSPC 与交联剂质量之和,与致孔剂的质量比为29. 43:70. 57,引发剂的质量为MDSPC与交联剂质 量之和的1%。
[0076] 所述改性的石英毛细管通过以下方法制备:用lmol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细 管15min,再将石英毛细管两端封口放在10(TC水浴锅反应2小时;然后用去离子水冲洗石 英毛细管,直至流出来的液体pH为7. 0 ;接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4小时; 干燥完毕后,把体积比为1:1的甲醇和3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(γ-MAPs)混 合液打进石英毛细管中,两端封口且放在60°C水浴锅内反应12小时;最后分别用甲醇和水 各冲洗30分钟,氮气干燥12小时,即得改性的石英毛细管。
[0077] 用扫描电子显微镜观察本实施例制备的仿生双链磷脂膜整体柱的微观形貌,结果 显示整体材料具有微米级的通孔和微米级的三维连续骨架。其能谱分析图显示整体材料在 柱内部分布均勾。
[0078] 实施例6
[0079] 本实施例仿生双链磷脂膜整体柱的制备:
[0080] 将实施例1合成的1-十二烷酰-2-(11-甲基丙烯酰胺-N-十一烷酰)-SN-甘 油-3-磷酸胆碱(MDSPC),与交联剂(乙二醇二甲基丙烯酸酯,EDMA)、致孔剂(异丙醇与环 己醇混合)和引发剂(偶氮二异丁腈,AIBN)混匀,超声脱气5分钟,灌入改性的石英毛细管 柱内,反应温度为60°C,反应12h,接高压栗用甲醇冲洗,即得仿生双链磷脂膜整体柱。其中 MDSPC与交联剂的质量比为45:55,致孔剂中异丙醇与环己醇的质量比为88. 3:11. 7,MDSPC 与交联剂质量之和,与致孔剂的质量比为34. 43:65. 57,引发剂的质量为MDSPC与交联剂质 量之和的1%。
[0081] 所述改性的石英毛细管通过以下方法制备:用lmol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细 管15min,再将石英毛细管两端封口放在10(TC水浴锅反应2小时;然后用去离子
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