专利名称：同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法
技术领域：
本发明涉及一种可移动的、方便实用的利用颜色颗粒免疫层析法制备同时检溯IO种食品
微生物的试纸及筛查诊断方法，可以同时检测多种样本。尤其是具备定量取样、科学分样的 特点。
背景技术：
"民以食为天"，在我们这个人口众多的国家里，食品问题，特别是食品安全问题更加重 要。可能由于各种原因，比如食品生产条件的落后，生产过程中操作不规范等等而造成食品 不合格。这就给人民的生活健康带来了很大的隐患。不合格食品很重要的一个指标就是微生
物超标。2001年吉林市发生的学生豆奶中毒事件，就是因为生产企业揸自改变工艺参数，将
杀菌温度由82x:降低到6(rc,不仅不能起到灭菌的作用，反而促进细菌生长，直接造成微生
物指标超标，致使大批学生食物中毒。食物中毒中常见的微生物，包括沙门菌、单核细胞增 生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、 板岐肠杆菌、腊样芽胞杆菌、霍乱弧菌。
沙门菌又名副伤寒，是各种动物由沙门氏菌属细菌引起的疾病总称。临诊上多表现为肠 炎和败血症。肠炎多伴有头痛、食欲不振、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。败血症患者则
多起病急骤，畏寒发热，热型不规则或呈间歇热，持续1 3周。血中可査到病原菌，而大便
培养常为阴性。此型如医治不及，可发生死亡。
单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌病，感染后 主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单核李
氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4C的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康
的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
金黄色葡萄球菌是一种致病的葡萄球菌，主要引起局部破损皮肤的化脓性感染，也可引
起深部组织的化脓性感染。有局部皮肤化脓性感染，如疖、痈、伤口化脓、脓肿；全身感染， 如败血症、脓毒血症。进食被该菌污染的食物而可引起食物中毒。假膜性肠炎，因长期使用 广谱抗生素，肠道内菌群失调，耐药性金黄色葡萄球菌大量繁殖所引起。
志贺氏菌又称细菌性痢疾，是由痢疾杆菌引起的以腹泻为主要症状的肠道传染病。主要 临床表现为发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血样大便，伴有发热。中毒型急性发作时， 可出现高热并出现感染性休克症状，有时出现脑水肿和呼吸衰竭。该病呈常年散发，夏秋多 见，是我国的多发病之一。病后仅有短暂和不稳定的免疫力，人类对本病普遍易感，引起该 病爆发流行。
副溶血性弧菌革兰氏阴性杆菌，在温度37'C、 pH7.7左右、含盐3 4%的食物和培养基 中发育良好，在无盐条件下不能生长。本菌对酸敏感，不耐高温，561C时5分钟即可死亡。 对低温的抵抗力较强，在冰箱中可存活70多天。本病多因进食染菌腌渍物所致。副溶血性弧 菌多存在于海水中，故海产品的染菌率较高。除食用未煮熟的鱼、虾、蟹类可引起中毒之外， 肉、蛋、蔬菜等也可引起，这是因食物容器或砧板生熟食不分，与海产品交叉污染引起的， 也有由咸菜和食盐引起本菌食物中毒的。常集体发病。副溶血性弧菌食物中毒的潜伏期为2 40小时不等，大多为10小时左右。主要症状为呕吐、腹痛、腹泻，粪便呈洗肉水样或脓血 样，里急后重不明显，发热轻，重者可有脱水、意识不清、血压下降等。
肠出血性大肠杆菌大多数大肠杆菌对人体无害，但大肠杆菌0157:H7却是一种危险的病 原。 一般寄生在牛、羊等动物的肠道内以及土壤和污水中，它会释放毒素，感染者出现脱水 腹泻或出血腹泻，高烧，并引起并发症，如尿血、脑功能障碍等，严重的可致人死亡。感染 首先可通过消费已被污染的牛奶和肉制品、甚至蔬菜和水果传播，在爆发期间可由人与人之间的接触而传播。2001年在江苏、安敬等地暴发的肠出血性大肠杆菌0157食物中毒，造成 177人死亡，中毒人数超过2万人。
空肠弯曲菌最早于1909年自流产的牛、羊体内分离出，称为胎儿弧菌，1947年从人体 首次分离同该菌。空肠弯曲菌肠炎是由空肠弯曲菌引起的急性肠道传染病。可引起发热、腹 痛、血性便等症状。
坂岐肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，是肠杆菌科、肠杆菌属的一个种，由其引发的婴儿、新 生儿脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎散发和爆发的病例在世界范围内多有报道，致死的 病例可高达40 80%。从调査病例的分析中，婴儿暖箱、孕妇产道和婴儿配方奶粉为可疑的 感染源。2002年美国FDA从惠氏公司生产的婴儿配方奶粉中检出坂岐肠杆菌；2003年美国美 赞臣公司自动召回一批检出极微量坂岐肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉后，配方奶粉中坂 岐肠杆菌污染问题成为世界瞩目的焦点。目前，对该菌知之不多，但多份国外研究报告表明， 污染坂岐肠杆菌的婴儿配方奶粉为主要感染源。
腊样芽胞杆菌芽孢杆菌的一种。蜡样芽孢杆菌分布广泛，特别是在谷物制品中。主要通 过泥土、灰尘、昆虫、不干净的食具和食品从业人员传播。蜡样芽孢杆菌产生致吐肠毒素和 致腹泻肠毒素，前者耐热。主要作用于胃肠道，引起胃肠功能紊乱。食用被蜡样芽胞杆菌污 染的食品后， 一般在8 16小时内出现中毒症状。呕吐型症状以恶心、呕吐为主，并有头晕、 四肢无力等；腹泻型以腹痛、腹泻为主。
霍乱弧菌是人类霍乱的病原体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界 上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。属于国际检疫传染 病。
目前，国内食品卫生微生物检验的方法主要采用传统的分离培养、镜检观察、生化鉴定 等实验组成， 一般的检测周期在5 7天，要求检测步骤较多而且精度低，存在着检验周期偏 长、工作量大等不足。正是因为现有检測方法的落后，因此开发出使用方便，检测灵敏，价 格低廉的检测产品是当务之急。
颜色微粒免疫层析分析为食品微生物的残留检溯提供了一个新的检溯途径。免疫微粒技 术是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作为载体，包被上具有特异性亲和力的各 种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其致敏为免疫微粒，用于免疫学及其他生物学检測与分离 的一项技术。作为载体的微粒通常是以某种高分子有机单体为原料，经过乳液聚合、悬浮聚 合及辐照聚合等高分子聚合方法制备而成。由于制备材料及工艺不同，微粒的种类繁多，现 已制成惰性微粒如聚苯乙烯胶乳微粒、活性微粒如羧化聚苯乙烯微粒、磁性微粒及标记微粒 (用同位素、荧光素或酶标记)等西大类微粒，数量多达几十种。将制备好的微粒与抗原(或抗 体)经物理吸附、化学偶联及生物素亲合亲桥联法等致敏方法形成免疫微粒。广泛应用于各种 可溶性大分子物质的检测、分离与纯化、细胞标记与识别等。近年来，微粒技术在核酸分子 杂交、DNA与RM的分离及PCR等研究领域亦显示出广阔的应用前景。
乳胶徵粒作为免疫微粒的一种，采用合成高分子乳胶微球，即羧化的聚苯乙烯乳胶作为 载体，将抗体或抗原通过物理吸附固载于微球表面而形成免疫胶乳诊断试剂，通过胶乳凝集 实验可检獮对应的抗原或抗体。制备成乳胶诊断试剂，用于诊断多种疾病，具有简便、快速、 灵敏、价廉及操作容易等优点。
现已有利用胶体金免疫层析方法检测大肠杆菌的试纸条，中国专利CN1755364A免疫胶 体金检测出血性大肠杆菌0157。胶体金免疫层析技术是20世纪90年代以来在单克隆抗体技 术、免疫层析技术及胶体金显色技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术，是根据免疫 反应原理，利用大孔径微孔滤膜为载体，以胶体金作为固相标记物来定性、半定量或定量检 測样本中待測物质的一种快速免疫分析技术。该专利技术检測种类过于单一，大规模推广使 用意义不大。
本发明根据颜色颗粒免疫层析技术，致力于检测方法的改进，除可采用胶体金法，亦可采用乳胶法检測大肠杆菌等10种食品微生物，检測方法改进，使检測更方便，结果更准确，
具有快速、灵敏、操作简便、成本低、无需专业人员操作等特点，真正达到复杂原理与简易
操作的有机统一。
发明内容
本发明针对上述存在的一些问题，提供了利用颜色颗粒免疫层析法制备同时检測10种食
品微生物的试纸及筛査诊断方法，为一项高度集成、可以方便、快速、可移动的，针对一个
样品可检測出io种微生物，便于筛査，及时做出诊断。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的
同时检測10种食品微生物的装置及筛査诊断方法，是由检測i^配备样品杯完成对10
种食品微生物的一次性同时检测，利用免疫法筛选出针对同一菌种不同抗原决定簇的两株配 对单克隆抗体，即食品微生物抗体I和抗体II,采用制成的配对单抗，利用颜色颗粒免疫层 析法制得试纸。
10种食品微生物分别为沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、
副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、坂岐肠杆菌、腊样芽胞杆菌、霍乱弧菌。 通过免疫筛选出针对同一菌种不同抗原决定簇的两株配对的单克隆抗体，食品微生物抗
体i和抗体n,抗体i和抗体n具体为沙门菌单抗i、沙门菌单抗n，单核细胞增生李斯特 菌单抗i、单核细胞增生李斯特菌单抗n，金黄色葡萄球菌单抗i、金黄色葡萄球菌单抗u， 志贺氏菌单抗i、志贺氏菌单抗n，副溶血性弧菌单抗i、副溶血性弧菌单抗ii，肠出血性 大肠杆菌单抗i、肠出血性大肠杆菌单抗n，空肠弯曲菌单抗i、空肠弯曲菌单抗ii，板岐 肠杆菌单抗i、皈岐肠杆菌单抗n，腊样芽胞杆菌单抗i、腊样芽胞杆菌单抗ii，霍乱弧菌 单抗i、霍乱弧菌单抗n。
颜色颗粒可以是一种金属胶体颗粒，可包括胶体金颗粒、银颗粒、铁颗粒、磁性颗粒等； 一种标记颗粒，可包括染料颗粒、乳胶颗粒、荧光颗粒等；其中，胶体金颗粒的颗粒直径大 小为纳米级，乳胶颗粒直径大小0.01 10iim;金属溶胶颗粒的吸附机理是利用它在碱性条 件下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团，靠静电吸引而结合；乳胶颗粒是利用化 学结合的方式与蛋白质分子结合，形成免疫诊断试剂。
使用胶体金颗粒偶联9种食品微生物抗体，分别为沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、金 黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、皈岐肠杆菌、腊样芽胞杆菌、霍乱 弧菌；使用乳j^颗粒偶联10种食品微生物抗体，分别为沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、金 黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、坂岐肠杆菌、 腊样芽胞杆菌、霍乱弧菌。
检测试纸可以由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、颜色颗粒固定垫、样品吸液层、MAX线 组成；底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条试验线和一条多克隆抗体控制线， 底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层；硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克 隆抗体储藏垫相互交叠连接，在单克隆抗体储藏垫上压有样品吸液层。
三层材料叠加组成样品吸液层，第一层为一定规格无纺布层、第二层为玻璃纤维层、第 三层为一定规格无紡布层，上述物质均需经过表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后备用；
颜色颗粒固定垫，固定颜色颗粒，得到直观的显色结果，可由食品微生物抗体H标记； 羊抗鼠多克隆抗体包被控制线；试验线可由食品微生物抗体I包被。
根据调节颜色颗粒固定垫和试验线包被物的成分，可以用胶体金法制成沙门菌检测试纸、 单核细胞增生李斯特菌检瀕试纸、金黄色葡萄球菌检渕试纸、志贺氏菌检測，、副溶血性 弧菌检測试纸、空肠弯曲菌检測试纸、坂岐肠杆菌检測试纸、腊样芽胞杆菌检測试纸、霍乱弧菌检测试纸；用乳胶法制成沙门菌检测试纸、单核细胞增生李斯特菌检测试纸、金黄色葡 萄球菌检测试纸、志贺氏菌检测试纸、副溶血性弧菌检测试纸、肠出血性大肠杆菌检测试纸、 空肠弯曲菌检测试纸、板岐肠杆菌检测试纸、腊样芽胞杆菌检测试纸、霍乱弧菌检测试纸。
试纸可以通过配套样品杯完成对10种食品微生物的一次同时检测
样品杯主要由杯盖、滤网、杯体、活动定量取样塞、板卡五部分组成
杯体包含有盛样室、检测池、滑动室三个结构；盛样室下方存在有一个可供活动定量取 样塞定量取样的滑动室，连通滑动室与盛样室的结构称为进样口，连通滑动室与检测池的结 构为出样口；活动定量取样塞放置于滑动室内，活塞的前方结构通过密封装置与滑动室内壁 形成了一个密封的容积固定的空腔；当活塞在初始位置时此空腔通过滑动室壁上的进样口与 盛样室相通，不与检测池相通；当推压活塞到终止位置时此空腔通过滑动室壁上的出样口与 检测池相通，不与盛样室相通；盛样室与杯盖的连接方式为螺纹连接，杯口为圆形，滤网嵌 于杯口； 2 10条单元检测试纸通过板卡内部设置的凹槽并排固定于板卡内，板卡插入检测 池接口处，通过一个卡套与样品杯密封固定。
取样前进行样品处理。如待检样品为人体排泄物，如大便、呕吐物等，直接置入采样杯， 进行检测；对于食品微生物的检测一般经过肉汤、蛋白胨培养基在37"C条件下培养24小时， 把培养基直接倒入采样杯中待检即可。
旋拧活动定量取样塞，盛样室中的样品流入空腔并将空腔盛满，检测试纸的样品吸液层 端即与待测样本接触，由于毛细管作用样品将沿着试纸条向吸水板移动，当移动至单克隆抗 体储藏垫时，样品中相应抗原与结合体发生特异结合，当移动至试验线时，样品中相应抗原 又与试验线中的单克隆抗体相结合，因此其带色颗粒滞留于试验线上，试验线处显示红色为 阳性；相反如果待测样本中某种微生物数量未达到检出量，结合体就不会与试验线上的单克 隆抗体发生特异结合，没有带色颗粒的滞留，即仅有一条红色控制线为阴性，这就是双抗夹 心法原理。根据此原理，两条线为阳性， 一条线为阴性得出判断。
方案中，当移动至羊抗鼠多克隆抗体控制线时，标记的结合体会与已设定好的羊抗鼠多 克隆抗体结合滞留，使控制线显示红色。因此控制线无色带产生则代表操作有误，检测时样 品液面超过MAX线或试纸已经过期。
本装置的有益效果是除了具备盛放样品的功能，还具备定量取样功能和防止样品交叉污 染的功能。体积小、移动便捷、操作方便、干净、不需要辅助定量容器。
图l为检测试纸的外观图。 图2为检测试纸的分解图。 图3为检测试纸的阴性结果图。 图4为检测试纸的阳性结果图。 图5为样品杯的外观图。
图中l.吸水板、2.硝酸纤维素膜、3.多克隆抗体控制线、4.试验线、5.颜色颗粒固定垫、 6.样品吸液层、7.底板、8.MAX线、9.杯盖、IO.滤网、ll.杯体、12.活动定量取样塞、13.板 卡、14.盛样室、15.滑动室、16.检测池、17.凹槽、18、卡套
具体实施例
图2为试纸的分解图，由图可见检测试纸由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、 颜色颗粒固定垫(5)、样品吸液层(6)、 MAX线(8)组成；底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上有一条试验线(4)和一条多克隆抗体控制线(3)，底板一端端 头为吸水板，另一端端头为样品吸液层；硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体储藏 垫相互交叠连接，在单克隆抗体储藏垫上压有样品吸液层。
试纸可以通过样品杯完成对10种食品微生物的一次同时检测
由图5所示，样品杯主要由杯盖(9)、滤网(10)、杯体(11)、活动定量取样塞(12)、 板卡(13)五部分组成
杯体包含有盛样室(14)、检测池(16)、滑动室(15)三个结构；盛样室下方存在有一 个可供活动定量取样塞定量取样的滑动室，连通滑动室与盛样室的结构称为进样口，连通滑 动室与检测池的结构为出样口；活动定量取样塞放置于滑动室内，活塞的前方结构通过密封 装置与滑动室内壁形成了一个密封的容积固定的空腔；当活塞在初始位置时此空腔通过滑动 室壁上的进样口与盛样室相通，不与检测池相通；当推压活塞到终止位置时此空腔通过滑动 室壁上的出样口与检测池相通，不与盛样室相通；盛样室与杯盖的连接方式为螺纹连接，杯 口为圆形，滤网嵌于杯口； 2 10条单元检测试纸通过板卡内部设置的凹槽(17)并排固定 于板卡内，板卡插入检测池接口处，通过一个卡套(18)与样品杯密封固定。
胶体金检测试纸制法(以沙门菌为例)
1. 沙门菌病原体培养
2. 沙门菌单克隆抗体的制备
用病原体抗原免疫小鼠，提取腹水纯化筛选，在筛选出的杂交瘤细胞株中，获得两株高 纯度、配对的沙门菌单克隆抗体细胞株I和II, 一株用于试验线包被， 一株可用于胶体金标 记。
3. 胶体金的制备及与沙门菌单克隆抗体的结合
(1) 取双蒸水加适量的氯金酸磁力搅拌加温到90 95。C,加入适量柠檬酸三纳继续加热 搅拌至沸腾3 10分钟，冷却后避光保存备用。
(2) 把沙门菌单克隆抗体标记的胶体金液，吸附纤维材料上，干燥后备用。
4. 膜的制备确认喷膜的检测线，控制线，机器制膜，利用电脑控制传动速度，保证每单位 膜上包被的抗体量相等。
5. 试纸条组合按公知技术组合。
同法制得单核细胞增生李斯特菌胶体金检测试纸、金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸、志 贺氏菌胶体金检测试纸、副溶血性弧菌胶体金检测试纸、空肠弯曲菌胶体金检测试纸、畈岐 肠杆菌胶体金检测试纸、腊样芽胞杆菌胶体金检测试纸、霍乱弧菌检测试纸。
乳胶法检测试纸制法(以肠出血性大肠杆菌为例)-
1. 肠出血性大肠杆菌病原体培养
2. 肠出血性大肠杆菌单克隆抗体的制备用病原体抗原免疫小鼠，提取腹水纯化筛选，在筛
选出的杂交瘤细胞株中，获得两株高纯度、配对的肠出血性大肠杆菌单克隆抗体细胞株I和 II， 一株用于试验线包被， 一株可用乳胶微粒标记。
3. 乳胶微粒的制备
1)取10%乳胶溶液100ul，加入硼砂缓冲液900ul，高速离心5 15min;2) 弃上清，加入硼砂缓冲液洗涤，再次高速离心5 15min;
3) 弃上清，加入硼砂缓冲液悬浮沉淀，加入抗体，体积定容至lml;
4) 向"3"所得溶液中加入10ulEDC (15mg/ml)，孵育4h，高速离心10min;
5) 弃上清，用封闭液(5% BSA)悬浮沉淀，封闭过夜；次日，划线。
4. 与沙门菌单克隆抗体I结合
5. 膜的制备机器制膜，利用电脑控制传动速度，保证每单位膜上包被的抗体量相等。
检测线肠出血性大肠杆菌单克隆抗体II 控制线羊抗鼠多克隆抗体
6. 试纸条按公知技术组合。
同法制得沙门菌乳胶检测试纸、单核细胞增生李斯特菌乳胶检测试纸、金黄色葡萄球菌 乳胶检测试纸、志贺氏菌乳胶检测试纸、副溶'血性弧菌乳胶检测试纸、空肠弯曲菌乳胶检测 试纸、畈岐肠杆菌乳胶检测试纸、腊样芽胞杆菌乳胶检测试纸、霍乱弧菌检测试纸。
选择合适品种固定于卡板内，把食品微生物试剂组装在一起，可以做到针对一个样品可
检测出10种微生物，便于筛查，及时作出诊断。
取样前进行样品处理。如待检样品为人体排泄物，如大便、呕吐物等，直接置入采样杯，
进行检测；对于食品微生物的检测一般经过肉汤、蛋白胨培养基在37'C条件下培养24小时， 把培养基直接倒入釆样杯中待检即可。
使用时，旋拧活动定量取样塞，盛样室中的样品流入空腔并将空腔盛满，检测试纸的样 品吸液层端即与待测样本接触，5分钟时观察结果。若检测微生物数量高于检出量，观察窗 处出现两条红线为阳性；低于检出量，出现一条红线为阴性；控制线无色带产生代表操作有 误，检测时样品液面超过MAX线或试纸已经过期。从而得出判断。由此，本检测装置可一 步完成对沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肠 出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、畈岐肠杆菌、腊样芽胞杆菌、霍乱弧菌的检测。
权利要求
1. 同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法，是由检测试纸配备样品杯完成对10种食品微生物的一次性同时检测，其特征在于利用免疫法筛选出针对同一菌种不同抗原决定簇的两株配对单克隆抗体，即食品微生物抗体I和抗体II，采用制成的配对单抗，利用颜色颗粒免疫层析法制得试纸。
2. 根据权力要求1所述的同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法，其特征在于10 种食品微生物分别为沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶 血性弧菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、板岐肠杆菌、腊样芽胞杆菌、霍乱弧菌。
3. 根据权力要求1所述的同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法，其特征在于抗体i和抗体n具体为沙门菌单抗i、沙门菌单抗n，单核细胞增生李斯特菌单抗i、单核 细胞增生李斯特菌单抗n，金黄色葡萄球菌单抗i、金黄色葡萄球菌单抗n，志贺氏菌单 抗i、志贺氏菌单抗n,副溶血性弧菌单抗i、副溶血性弧菌单抗ii,肠出血性大肠杆菌 单抗i、肠出血性大肠杆菌单抗n，空肠弯曲菌单抗i、空肠弯曲菌单抗ii，畈岐肠杆菌 单抗i、畈岐肠杆菌单抗ii,腊样芽胞杆菌单抗i、腊样芽胞杆菌单抗ii，霍乱弧菌单抗 i、霍乱弧菌单抗n。
4. 根据权力要求i所述的同时检测io种食品微生物的装置及筛査诊断方法，其特征在于颜 色颗粒可以是一种金属胶体颗粒，可包括胶体金颗粒、银颗粒、铁颗粒、磁性颗粒等；一种标记颗粒，可包括染料颗粒、乳胶颗粒、荧光颗粒等；其中，胶体金颗粒的颗粒直径大 小为纳米级，乳胶颗粒直径大小0.01 10ura;金属溶胶颗粒的吸附机理是利用它在碱性 条件下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团，靠静电吸引而结合；乳胶颗粒是利 用化学结合的方式与蛋白质分子结合，形成免疫诊断试剂。
5. 根据权力要求1所述的同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法，其特征在于使 用胶体金颗粒偶联9种食品微生物抗体，分别为沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色 葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、畈岐肠杆菌、腊样芽胞杆菌、霍乱弧 菌；使用乳胶颗粒偶联10种食品微生物抗体，分别为沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、 金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、皈岐肠杆 菌、腊样芽胞杆菌、霍乱弧菌。
6. 根据权力要求1所述的同时检测10种食品微生物的装置及筛査诊断方法，其特征在于检 测试纸可以由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2);颜色颗粒固定垫(5)、样品吸 液层(6)、 MAX线(8)组成；底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2),硝酸纤维素膜(2) 上有一条试验线(4)和一条多克隆抗体控制线(3)，底板一端端头为吸水板，另一端端 头为样品吸液层；硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体储藏垫相互交叠连接，在 单克隆抗体储藏垫上压有样品吸液层。
7. 根据权力要求1或6所述的同时检测10种食品微生物的装置及筛査诊断方法，其特征在 于通过以下方法实现.-三层材料叠加组成样品吸液层，第一层为一定规格无纺布层、第二层为玻璃纤维层、 第三层为一定规格无纺布层，上述物质均需经过表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后备用；颜色颗粒固定垫，固定颜色颗粒，得到直观的显色结果，可由食品微生物抗体U标记； 羊抗鼠多克隆抗体包被控制线；试验线可由食品微生物抗体I包被。根据调节颜色颗粒固定垫和试验线包被物的成分，可以用胶体金法制成沙门菌检测试 纸、单核细胞增生李斯特菌检测试纸、金黄色葡萄球菌检测试纸、志贺氏菌检测试纸、副 溶血性弧菌检测试纸、空肠弯曲菌检测试纸、板岐肠杆菌检测试纸、腊样芽胞杆菌检测试 纸、霍乱弧菌检测试纸；用乳胶法制成沙门菌检测试纸、单核细胞增生李斯特菌检测试纸、 金黄色葡萄球菌检测试纸、志贺氏菌检测试纸、副溶血性弧菌检测试纸、肠出血性大肠杆菌检测试纸、空肠弯曲菌检测试纸、皈岐肠杆菌检测试纸、腊样芽胞杆菌检测试纸、霍乱 弧菌检测试纸。
8.根据权力要求1所述的同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法，其特征在于样 品杯主要由杯盖(9)、滤网(10)、杯体(11)、活动定量取样塞(12)、板卡(13)五部 分组成杯体包含有盛样室(14)、检测池(16)、滑动室(15)三个结构；盛样室下方存在有一 个可供活动定量取样塞定量取样的滑动室，连通滑动室与盛样室的结构称为进样口，连通滑 动室与检测池的结构为出样口；活动定量取样塞放置于滑动室内，活塞的前方结构通过密封 装置与滑动室内壁形成了一个密封的容积固定的空腔；当活塞在初始位置时此空腔通过滑动 室壁上的进样口与盛样室相通，不与检测池相通；当推压活塞到终止位置时此空腔通过滑动 室壁上的出样口与检测池相通，不与盛样室相通；盛样室与杯盖的连接方式为螺纹连接，杯 口为圆形，滤网嵌于杯口； 2 10条单元检测试纸通过板卡内部设置的凹槽(17)并排固定 于板卡内，板卡插入检测池接口处，通过一个卡套(18)与样品杯密封固定。
全文摘要
本发明涉及一种同时检测10种食品微生物的装置及筛查诊断方法，是由检测试纸配备样品杯完成对10种食品微生物的一次性同时检测，其特征在于利用免疫法筛选出针对同一菌种不同抗原决定簇的两株配对单克隆抗体，即食品微生物抗体I和抗体II，采用制成的配对单抗，利用颜色颗粒免疫层析法制得试纸。将10种食品微生物试纸按一定排列置于样品杯中，同时加入一液样时，显示有双红线者就为此样品中含有某种微生物。本发明的目的是把常见的食品微生物试剂组装在一起，做到针对一个样品可检测出10种微生物，便于筛查，及时作出诊断。
文档编号G01N33/577GK101470115SQ200710301460
公开日2009年7月1日 申请日期2007年12月28日 优先权日2007年12月28日
发明者万积成 申请人:万积成