专利名称：一种荧光免疫层析试纸及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属医学检验领域，特别是涉及一种荧光免疫层析检测试纸。
背景技术：
肿瘤是威胁人类健康的高发病率和高死亡率性疾病，大量研究和防治资 料证实，早期诊断和早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效办法。为此， 人们设想了多种措施和途径，对早期无症状肿瘤患者，肿瘤标记物常常作为 能早期诊断肿瘤的方法之一。因此，不断寻求新的肿瘤标记物及其检测方法 己经成为学术界研究的热点。
目前，临床上主要还是通过免疫分析技术对肿瘤标记物进行检测，如酶
联免疫法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、化学发光法(CLIA)等，但是传
统的免疫分析方法需要特殊的仪器设备，费用较贵。免疫层析试纸技术的发 展一定程度上弥补了这一不足，它操作简单，准确直观，为个人、家庭常规 快速诊断检测提供了可能。其以微孔膜作为发生免疫反应的固相载体，经渗 透和毛细虹吸作用使待测样品中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结 合，通过标记物示踪反应结果。当前常见的标记材料主要包括放射性同位素、 酶、胶体金以及发光标记材料，其中发光标记材料又包括荧光、化学发光、 生物发光材料等。但是上述材料都有其局限性放射性同位素易衰变，存在 放射污染；酶自身性质不稳定，易受生物样品的干扰；胶体金难以进行多重、 定量分析；化学发光为瞬时发光，检测仪器昂贵；荧光材料则存在淬灭现象，使得时间分辨检测无法进行。
因此，改进或寻找新的标记材料现已成为人们关注的焦点。常用的荧光 染料存在光漂白现象，导致荧光信号不稳定，通过对其表面进行包裹不仅克 服了它的淬灭现象，而且实现了荧光颗粒的表面功能化。Si02以稳定性高， 成键能力强，表面易功能化等优势自然成为首选。本专利制备了 Si02包裹的 荧光素颗粒-抗体复合物和荧光免疫层析试纸，并将其应用于荧光免疫层析技 术检测肿瘤标志物，比免疫金层析试纸的灵敏度提到了 10-100倍，进一步拓 展了它在生物医学领域中的应用。
此外，近年来一类新型标记物一纳米上转换发光材料(UCP)的出现 为免疫层析技术的发展提供了新的可能。UCP是由稀土金属元素掺杂于晶体 的晶格中构成的纳米级颗粒。由于独特的结构，UCP可由红外光激发而发射 波长远短于激发光的可见光，即上转发光。这种绝无仅有的性质使UCP作为
标记物与传统标记物相比具有无本底干扰、无淬灭、使用安全、适合多重分
析和定量分析等显著优势，确保了 UCP在检测过程中高度的敏感性、稳定性、 安全性和灵活性。中国食品卫生杂志2007， 19 (1) : 41-44公开了一种利 用上转磷光免疫层析检测肠出血性大肠杆菌0157的方法，但是采用的UCP 颗粒未进行包裹，易发生荧光猝灭现象，且该检测为定性检测，不能够用于 定量。UCP材料应用于尿纤维连接蛋白肿瘤标志物的检测未见报道。
发明内容
所要解决的技术问题
本发明所要解决的技术问题是提供一种荧光免疫层析检测试纸，以克服现有技术采用的UCP颗粒未进行包裹，易发生荧光猝灭现象，且利用UCP
颗粒的免疫检测为定性检测，不能够用于定量，且检测灵敏度低的缺陷。 技术方案
本发明的技术方案之一是提供一种荧光免疫层析试纸，由依次在带有粘合 剂的衬板上相互搭接的样品垫、结合垫、抗体承载膜、吸水纸组成，其中， 所述的结合垫上涂有荧光标记材料-抗体1复合物，所述的抗体承载膜为硝酸
纤维素膜或尼龙膜，抗体承载膜上分别为连接有抗体2和第二抗体的T线和 C线，其特征在于，所述的荧光标记材料的表面经硅化包裹和氨基化，并通 过交联反应与抗体结合；所述的T线和C线区域的荧光强度在检测中分别与 标准抗原浓度的标准曲线相对应，完成定量检测。
上述的荧光免疫层析试纸的优选方案之一为，所述的荧光标记材料为荧光 素颗粒或者稀土上转荧光材料。
上述的荧光免疫层析试纸的优选方案之二为，所述的荧光素颗粒为异硫氰 酸荧光素或四甲基异硫氰酸罗丹明或四乙基罗丹明。
上述的荧光免疫层析试纸的优选方案之三为，所述的稀土上转荧光颗粒为 铕惨杂或铒掺杂或铥掺杂的碱土金属硫化物。
上述各荧光免疫层析试纸的优选方案为，所述的抗体1和抗体2均为甲 胎蛋白或尿纤维连接蛋白的抗体。
本发明的技术方案之二是提供一种荧光免疫层析试纸的制备方法，依次包 括如下步骤1) 稀土上转荧光颗粒的表面硅化取5-50mg稀土上转荧光颗粒，加入 300-800mL 35-70%乙醇溶液，超声处理使反应体系混合均匀，在 15-5CTC水浴中搅拌至平衡，再向其中加入0.1-1mL正硅酸乙酯
(TEOS)，继续反应3-10小时，离心洗涤；
2) 稀土上转荧光颗粒的表面氨基化取上述表面硅化的稀土上转荧光颗 粒，加入30 100mL 1:3 3:1 (V/V)甲醇和丙三醇组成的混合溶液， 超声分散，然后向其中加入10-1000pLN- (2-氨基乙基)-3-氨基丙基 三甲氧基硅垸，15-50。C恒温下搅拌5 10小时，用乙醇离心洗涤， 干燥保存；
3) 稀土上转荧光颗粒表面连接抗体将表面连接氨基的稀土上转荧光颗 粒分散在磷酸缓冲液(PB)中，加入一定量戊二醛，反应2-5小时， 离心除去戊二醛，重新分散在磷酸缓冲液中，然后加入抗体1，反应 1-5小时，离心洗涤，最终保存在含0.1。/。BSA和0.1。/。Tween20的 磷酸缓冲液中；
4) 荧光免疫层析试纸的组装将稀土上转荧光颗粒-抗体1复合物涂覆在 结合垫上，将抗体2和第二抗体分别以线状连接于抗体承载膜上形成 T线和C线，并在带有粘合剂的衬板上相互搭接地粘合样品垫、结合 垫、抗体承载膜、吸水纸。
上述的荧光免疫层析试纸的制备方法的优选方案为，所述的抗体1和抗 体2均为甲胎蛋白或尿纤维连接蛋白的抗体。
本发明的技术方案之三是提供另一种荧光免疫层析试纸的制备方法，依 次包括如下步骤1) 荧光素颗粒的表面硅化在乙醇体系中，分别加入0.1-10mg异硫氰 酸荧光素或四甲基异硫氰酸罗丹明或四乙基罗丹明，和0.1-10pLN-
(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷，15-50。C恒温搅拌3 10 小时，再依次加入0.1-10mL水、0.1-10mL 15。/。wt氨水、0.1-10mL 正硅酸乙酯(TEOS)，继续反应3-10小时，洗涤获得表面硅化的荧光 素颗粒；
2) 荧光素的表面氨基化取上述表面硅化的荧光素颗粒，加入10 50mL 1:3 3:1 (V/V)甲醇和丙三醇组成的混合溶液，超声分散，然后加入 10-500|jLN- (2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷，15-50。C恒温 搅拌5 10小时，用乙醇洗涤，干燥，获得表面氨基化的荧光素颗粒；
3) 荧光素颗粒表面连接抗体将上述表面氨基化的荧光素颗粒分散在磷 酸缓冲液中，加入戊二醛反应2-5小时，离心除去戊二醛，将荧光素 颗粒重新分散在磷酸缓冲液中，加入抗体1，反应1-5小时，洗涤后 获得荧光素颗粒-抗体1复合物，保存在含0.1% BSA和0.1% Tween 20的磷酸缓冲液中；
4) 荧光免疫层析试纸的组装将荧光素颗粒-抗体1复合物涂覆在结合垫 上，将抗体2和第二抗体分别以线状连接于抗体承载膜上形成T线和 C线，并在带有粘合剂的衬板上相互搭接地粘合样品垫、结合垫、抗 体承载膜、吸水纸。
本发明的技术方案之四是提供一种利用上述的荧光免疫层析试纸定量检
测抗原的方法，依次包括如下步骤
i.将抗原标准品配制成2 10倍梯度的浓度系列标准品；ii. 将上述浓度系列标准品分别用上述的试纸进行免疫层析，利用荧光
定量光谱仪分别检测T线和C线区域的荧光强度，制作抗原浓度
的标准曲线；
iii.待测抗原用上述的试纸进行免疫层析，利用上述的标准曲线求得抗
原浓度。
上述的荧光免疫层析试纸定量检测抗原的方法的优选方案为，所述的抗 原为甲胎蛋白或尿纤维连接蛋白。
上述的荧光免疫层析试纸也可以用于抗原定性检测，方法如下
将试纸条的样品垫端插入待测样品液，10-30min后取出，在紫外或红外 光的激发下观察结果。如果检测带与质控带处都有荧光，说明待测样品中含 有目标物，为阳性结果，检测带上荧光越强目标物含量越高；如果只有质控
带有荧光，说明待测样品中没有目标物，为阴性结果；如果检测带与质控带
处都没有荧光，说明检测无效。
有益效果
本发明通过制备表面进行硅化包裹的荧光标记材料-抗体复合物进而制备 了荧光免疫层析试纸。对稀土上转换发光材料和荧光素颗粒表面进行硅化包 裹，克服了荧光素容易淬灭的缺陷。应用荧光免疫层析技术定量检测肿瘤标 志物，克服了金标试纸不能定量测定的缺点，而且该免疫层析试纸的灵敏度
达1-1.5ng/mL，较金标试纸提高了 10-100倍。
本研究通过荧光素颗粒或上转换发光材料标记与双抗夹心免疫层析技术 相结合，检测肿瘤标记物的含量，具有灵敏性高，准确性好，可实现定量分析等优势。并且，填补了对尿纤维连接蛋白(Fn)定量免疫检测的技术空白。 对于肿瘤的早期诊断、预后判断以及治疗过程的监控都具有深远的影响。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于
说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授
的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形 式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如分 子克隆操作手册，或按照制造厂商所建议的条件。所有无机化学试剂和有机
溶剂购自上海化学试剂厂，FITC和AEAPS购自上海浩然生物技术有限公 司，红外上转换荧光粉(UCP)购自上海科炎光电技术有限公司、上海华明 高纳稀土新材料有限公司和上海科润光电材料有限公司，小鼠抗AFP单克隆 抗体和小鼠抗FN单克隆抗体购自上海我武生物科技有限公司，羊抗鼠IgG 抗体为上海史瑞可生物科技有限公司产品。
实施例1:制备核壳型FITC-甲胎蛋白(AFP)抗体复合物
荧光素颗粒的表面硅化在乙醇体系中，分别加入0.1-10mg异硫氰酸荧 光素FITC和0.1-10nLN-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷，15-50°C 恒温搅拌3 10小时，再依次加入0.1-10mL水、0.1-10mL15。/。wt氨水、 0.1-10mL正硅酸乙酯(TEOS)，继续反应3-10小时，洗涤获得表面硅化的荧 光素颗粒。荧光素的表面氨基化取上述表面硅化的荧光素颗粒，加入10 50mL 1:3 3:1 (v/v)甲醇和丙三醇组成的混合溶液，超声分散，然后加入10-500|jL N- (2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷，15-50。c恒温搅拌5 10小时， 用乙醇洗涤，干燥，获得表面氨基化的荧光素颗粒。
利用已经过表面氨基化的核壳型FITC与AFP抗体进行连接
1、 取2mg氨基化的核壳型FITC加入到2mL0.03 mol/L的PB (pH=7.2)中， 充分混匀。
2、 向上述体系中加入500pL25。/。的戊二醛，室温下反应3小时。
3、 离心洗去多余的戊二醛，重新分散在5mL 0.03 mol/L PB中。
4、 再向其中加入100ijL小鼠抗AFP单克隆抗体，4"c反应3小时。
5、 4。c离心洗涤数次，保存于0.03 mol/L PB (含0.1。/。BSA， 0.1%Tween20)中。
实施例2:制备双抗体夹心AFP抗原检测试纸
1、 样品垫的制备选用纤维素膜作为样品垫材料，剪成1.5x30.0cm规格 的条带，将其放入样品垫封闭液(0.03mol/LPB (pH=7.2)，含有 5mg/mLBSA， 0.1%Triton X-100)中浸泡30min， 37。c烘干备用。
2、 结合垫的制备选用玻璃纤维素膜作为结合垫材料，将其剪成
1.0x30.0cm规格的条带，将实施例1中制备的核壳型FITC-AFP抗体复合物 离心，在沉降物中加入0.03mol/LPB (pH=7.2)，含1%蔗糖，1%BSA)， 充分混匀，加于该条带上，37。c烘干。
3、 NC的制备将NC膜剪切成2.5x30.0cm规格的条带，用点样仪在NC膜上不同位置分别喷点AFP单抗和羊抗鼠IgG抗体,作为检测带和质控 带，37'C烘干。
4、 免疫层析试纸条的组装将吸水纸、NC膜、结合垫、样品垫依次贴在 带有粘合剂的底板上，并切成4cm宽的试纸条。
实施例3:分别以四甲基异硫氰酸罗丹明TRITC和四乙基罗丹明RB200替代实 施例1-2中的异硫氰酸荧光素FITC制备双抗体夹心AFP抗原检测试纸。
实施例4:定量免疫检测AFP抗原
1 、 利用实施例1-3制成的荧光免疫层析试纸条定量检测20份临床血清 AFP抗原样品
i. 将1mg/mL的AFP抗原标准品配制成10倍梯度的浓度系列标准
叫 ，
ii. 将上述浓度系列标准品分别用试纸进行免疫层析，利用荧光定量光 谱仪分别检测T线和C线区域的荧光强度，制作抗原浓度的标准曲 线；
iii. 将试纸条的样品垫端插入待测样品液，15min后取出，在紫外灯下 观察结果，获得样品的定性检测结果在20份样品血清中，临床
符合率为95%;
iv. 用荧光检测仪检测20份样品血清的T线和C线区域的荧光强度， 利用上述的标准曲线求得抗原浓度，定量检测结果在20份样品 血清中，临床符合率为100%。2、利用AFP抗原标准品配制成10倍梯度的浓度系列，在免疫层析检测后用荧 光检测仪分析本试纸监测系统的灵敏度，结果达1ng/mL。
实施例5:制备UCP-尿纤维连接蛋白(FN)抗体复合物
稀土上转荧光颗粒(铕掺杂的碱土金属硫化物或上海华明高纳稀土新材料 有限公司的上转化荧光粉)的表面硅化取5-50mg稀土上转荧光颗粒，加入 300-800mL 35-70%乙醇溶液，超声处理使反应体系混合均匀，在15-50。c 水浴中搅拌至平衡，再向其中加入0.1-1mL正硅酸乙酯(TEOS)，继续反应 3-10小时，离心洗涤；
稀土上转荧光颗粒的表面氨基化取上述表面硅化的稀土上转荧光颗粒， 加入30 100mL 1:3 3:1 (V/V)甲醇和丙三醇组成的混合溶液，超声分散， 然后向其中加入IO-IOOOijLN- (2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷， 15-5CrC恒温下搅拌5 10小时，用乙醇离心洗涤，干燥保存；
利用己经过表面氨基化的UCP与FN抗体进行连接
1、 取5mg氨基化的UCP加入到3mL0.03 mol/L的PB (pH=7.2)中，充分 混匀。
2、 向上述体系中加入250iJL25。/。的戊二醛，室温下反应3小时。
3、 离心洗去多余的戊二醛，重新分散在5mL 0.03 mol/L PB中。
4、 再向其中加入15CHjL小鼠抗fn单克隆抗体，4"c反应3小时。
5、 4。c离心洗涤数次，保存于0.03 mol/L PB (含0.1。/。BSA， 0.1%Tween20)中。实施例6:制备双抗体夹心FN抗原检测试纸
1、 样品垫的制备选用纤维素膜作为样品垫材料，剪成1.5x30.0cm规格 的条带，将其放入样品垫封闭液(0.03mol/LPB (pH=7.2)，含有 5mg/mLBSA， 0.1。/。Triton X-100)中浸泡30min， 37。C烘干备用。
2、 结合垫的制备选用玻璃纤维素膜作为结合垫材料，将其剪成
1.0x30.0cm规格的条带，将实施例3中制备的110 - FN抗体复合物离心， 在沉降物中加入0.03mol/LPB (pH=7.2)，含1%蔗糖，1%BSA)，充分混 匀，加于该条带上，37。C烘干。
3、 NC的制备将NC膜剪切成2.5x30.0cm规格的条带，用点样仪在NC 膜上不同位置分别喷点FN单抗和羊抗鼠IgG抗体，作为检测带和质控带， 37。C烘干。
4、 免疫层析试纸条的组装将吸水纸、NC膜、结合垫、样品垫依次贴在带 有粘合剂的底板上，并切成4cm宽的试纸条。
实施例7:分别以铒掺杂或铥惨杂的碱土金属硫化物替代实施例5-6中的铕掺 杂的碱土金属硫化物制备双抗体夹心FN抗原检测试纸。
实施例8:检测尿纤维连接蛋白(FN)抗体复合物
1、 利用实施例5-7制成的UCP荧光免疫层析试纸条定量检测16份临床血 清FN抗原样品
i.将200ng/mL的FN抗原标准品配制成2倍梯度的浓度系列标准 口
叩5ii. 将上述浓度系列标准品分别用试纸进行免疫层析，利用荧光定量光 谱仪分别检测T线和C线区域的荧光强度，制作抗原浓度的标准曲 线；
iii. 将试纸条的样品垫端插入待测样品液，15min后取出，在紫外灯下 观察结果，获得样品的定性检测结果在16份样品血清中，临床 符合率为94%;
iv. 用荧光检测仪检测16份样品血清的T线和C线区域的荧光强度， 利用上述的标准曲线求得抗原浓度，定量检测结果在16份样品 血清中，临床符合率为100%。
2、利用FN抗原标准品配制成2倍梯度的浓度系列，在免疫层析检测后用荧光 检测仪分析本试纸监测系统的灵敏度，结果达1.5ng/mL。
权利要求
1.一种荧光免疫层析试纸，由依次在带有粘合剂的衬板上相互搭接的样品垫、结合垫、抗体承载膜、吸水纸组成，其中，所述的结合垫上涂有荧光标记材料-抗体1复合物，所述的抗体承载膜为硝酸纤维素膜或尼龙膜，抗体承载膜上分别为连接有抗体2和第二抗体的T线和C线，其特征在于，所述的荧光标记材料的表面经硅化包裹和氨基化，并通过交联反应与抗体结合；所述的T线和C线区域的荧光强度在检测中分别与标准抗原浓度的标准曲线相对应，完成定量检测。
2. 根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述的荧光标记 材料为荧光素颗粒或者稀土上转荧光材料。
3. 根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述的荧光素颗 粒为异硫氰酸荧光素或四甲基异硫氰酸罗丹明或四乙基罗丹明。
4. 根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述的稀土上转 荧光颗粒为铕掺杂或铒掺杂或铥掺杂的碱土金属硫化物。
5. 根据权利要求1-4之一所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述的抗 体1和抗体2均为甲胎蛋白或尿纤维连接蛋白的抗体。
6. —种荧光免疫层析试纸的制备方法，依次包括如下步骤1)稀土上转荧光颗粒的表面硅化取5-50mg稀土上转荧光颗粒，加入 300-800mL 35-70%乙醇溶液，超声处理使反应体系混合均匀，在 15-5CTC水浴中搅拌至平衡，再向其中加入0.1-1mL正硅酸乙酯，继 续反应3-10小时，离心洗漆；2) 稀土上转荧光颗粒的表面氨基化取上述表面硅化的稀土上转荧光颗粒，加入30 100mL 1:3 3:1 (V/V)甲醇和丙三醇组成的混合溶液， 超声分散，然后向其中加入10-1000[JLN- (2-氨基乙基)-3-氨基丙基 三甲氧基硅垸，15-5CTC恒温下搅拌5 10小时，用乙醇离心洗涤， 干燥保存；3) 稀土上转荧光颗粒表面连接抗体将表面连接氨基的稀土上转荧光颗 粒分散在磷酸缓冲液中，加入一定量戊二醛，反应2-5小时，离心除 去戊二醛，重新分散在磷酸缓冲液中，然后加入抗体1，反应1-5小 时，离心洗涤，最终保存在含0.1% BSA和0.1% Tween 20的磷酸缓 冲液中；4) 荧光免疫层析试纸的组装将稀土上转荧光颗粒-抗体1复合物涂覆在结合垫上，将抗体2和第二抗体分别以线状连接于抗体承载膜上形成 T线和C线，并在带有粘合剂的衬板上相互搭接地粘合样品垫、结合 垫、抗体承载膜、吸水纸。
7. 根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述 的抗体1和抗体2均为甲胎蛋白或尿纤维连接蛋白的抗体。
8. —种荧光免疫层析试纸的制备方法，依次包括如下步骤1)荧光素颗粒的表面硅化在乙醇体系中，分别加入0.1-10mg异硫氰 酸荧光素或四甲基异硫氰酸罗丹明或四乙基罗丹明，和0.1-10|jLN-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅垸，15-5(TC恒温搅拌3 10 小时，再依次加入0.1-10mL水、0.1國10mL15。/。wt氨水、0.1-10mL正硅酸乙酯(TEOS)，继续反应3-10小时，洗涤获得表面硅化的荧光 素颗粒；2) 荧光素的表面氨基化取上述表面硅化的荧光素颗粒，加入10 50mL 1:3 3:1 (V/V)甲醇和丙三醇组成的混合溶液，超声分散，然后加入 10-500MLN- (2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷，15-5(TC恒温 搅拌5 10小时，用乙醇洗涤，干燥，获得表面氨基化的荧光素颗粒；3) 荧光素颗粒表面连接抗体将上述表面氨基化的荧光素颗粒分散在磷 酸缓冲液中，加入戊二醛反应2-5小时，离心除去戊二醛，将荧光素 颗粒重新分散在磷酸缓冲液中，加入抗体1，反应1-5小时，洗涤后 获得荧光素颗粒-抗体1复合物，保存在含0.1% BSA和0.1% Tween 20的磷酸缓冲液中；4) 荧光免疫层析试纸的组装将荧光素颗粒-抗体1复合物涂覆在结合垫 上，将抗体2和第二抗体分别以线状连接于抗体承载膜上形成T线和 C线，并在带有粘合剂的衬板上相互搭接地粘合样品垫、结合垫、抗 体承载膜、吸水纸。
9. 一种利用权利要求1所述的荧光免疫层析试纸定量检测抗原的方法，依次 包括如下步骤i. 将抗原标准品配制成2 10倍梯度的浓度系列标准品；ii. 将上述浓度系列标准品分别用权利要求1所述的试纸进行免疫层 析，利用荧光定量光谱仪分别检测T线和C线区域的荧光强度， 制作抗原浓度的标准曲线；iii.待测抗原用权利要求1所述的试纸进行免疫层析，利用上述的标准 曲线求得抗原浓度。
10.根据权利要求9所述的荧光免疫层析试纸定量检测抗原的方法，其特征在 于，所述的抗原为甲胎蛋白或尿纤维连接蛋白。
全文摘要
本发明涉及一种荧光免疫层析试纸，由依次在带有粘合剂的衬板上相互搭接的样品垫、结合垫、抗体承载膜、吸水纸组成，其中，所述的结合垫上涂有荧光材料-抗体1复合物，所述的荧光标记材料为荧光素颗粒或稀土上转荧光材料，所述的抗体承载膜为硝酸纤维素膜或尼龙膜，抗体承载膜上分别为连接有抗体2和二抗的T线和C线；荧光材料为荧光素颗粒或稀土上转荧光颗粒，其中荧光素颗粒选自异硫氰酸荧光素或四甲基异硫氰酸罗丹明或四乙基罗丹明，荧光标记材料的表面经氨基化并通过交联反应与抗体结合；利用荧光定量测量系统检测T线和C线区域的荧光强度，通过抗原浓度的标准曲线完成定量检测。适用于尿纤维连接蛋白等的肿瘤标志物免疫检测。
文档编号G01N33/533GK101526534SQ20091004735
公开日2009年9月9日 申请日期2009年3月10日 优先权日2009年3月10日
发明者沈鹤柏, 赵露晶, 马经纬 申请人:沈鹤柏