用于疾病相关的硫醇化合物的快速测定的设备的制作方法

专利名称：用于疾病相关的硫醇化合物的快速测定的设备的制作方法
用于疾病相关的硫醇化合物的快速测定的设备 关于联邦政府赞助的研究&开发的声明
在本申请中描述的发明不是根据任何联邦政府赞助的研究或开发而作出的。
背景技术：
直到最近，口腔和全身健康状态之间的密切关系还未充分地了解，并且很大程度上被 忽视。然而，现在强力的身体证据表明的是，口腔疾病例如牙周炎，与影响全身的失调紧密 地相关，例如心血管疾病、II型糖尿病和早产。发明概述
牙周炎的诊断是以及仍然是费力的过程，其中围绕每个牙齿的牙周袋中的空间必需被 多次探测，同时患者在牙医的椅子上坐很长时间。传统的诊断操作中涉及的时间和不适阻 挡了患者，导致这种严重的但可治疗的状况总体是不良诊断的。牙周炎涉及宿主组织的微生物感染和宿主的炎性反应。虽然在分析上是可分的， 这两个方面实际上串联地作用，在数年和实际上数十年的时间上引起组织破坏的代价。鉴于这种长期的远景，牙周炎可以看作是连续事件的一部分，其中某些微生物的 水平逐渐地提高，常常伴随提高的炎症。这样，从与良性的微生物过度生长时可能出现的相 关的口臭，到齿龈炎和牙周炎，显示了正反馈环的特征，其原则上可以通过合适的预防和/ 或治疗介入来中断。这种破坏性螺旋的一个独特的生物化学特征是随着受试者从口臭发展到齿龈炎 到牙周炎，某些口腔流体中硫醇化合物水平的提高。硫醇化合物是带有-SH或巯基官能团 的化合物，被认为也包括硫化物阴离子(HS_)以及带有硫醇阴离子(RS_)的化合物。口腔流体中硫醇化合物的测量一般涉及填满电路的复杂的装置，或多个步骤、多 个容器、耗时的分析。因此，存在着对测量口腔流体中硫醇化合物的简单、快速和低成本方 式的长期需要。本发明满足了这种长期需要，并附带地解决了快速和方便地测定流体中硫醇水平 的更一般的难题，以及快速和方便地评估受试者的各种状况和/或疾病的风险的更具体的难题。本发明提供了用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的 制品。附图的简要说明
本专利或申请文件含有至少一个以彩色制作的图画。带有彩色附图的本申请或专利申 请公开物的拷贝将在请求和支付了必要的费用时由美国专利商标局提供。附

图1描绘了直接接触法。附图IA描绘了具有吸饱了试剂溶液的垫片的测试条。 箭头表明测试样品的应用。附图IB描绘了在一段时间后的测试棒，其中垫片在口腔流体进 入垫片后(例如，舌接触)产生颜色，与试剂反应来为垫片赋予颜色改变。附图2A-2D描绘了直接接触方法。附图3A-3E描绘了可选择的测试条结构。附图4A和4B描绘了间接接触设备(近端/远端型)。
附图5描绘了间接接触设备的实例(屏罩型)。附图6描绘了间接接触设备的实例(屏罩型)。附图7A-7D描绘了间接接触设备的各种实施方式，其中折叠或滑动使得分离的部 件彼此接触。附图8A-8F描绘了本发明的各种包装设计。附图9描绘了间接接触设备的实例。附图10描绘了间接的有盖的采集器设备的实例。附图11显示了用原型TDR溶液处理的、在短期稳定性研究中使用的材料的结果。附图12显示了从垫片释放的试剂的量。附图13显示了与呈现的TDR的量相比较的信号水平(可见的输出)的图形。发明的详细说明
本发明提供了用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的制品。本发明的以下的详细说明意图被诊断测试条和化学领域的技术人员理解。因此， 详细说明中采用的术语意图一般地具有它们在诊断测试条和化学领域中普通的含义。在所 采用的术语没有为这些领域所特有的一般含义时，这些术语意图是具有同时代的美国英语 运用之内的普通含义，其中的使用意图是具有持久的法律效力。如果任何术语在本文件的 文本中被定义或澄清，本文件的文本内的定义或澄清意图控制该术语的任何其他含义。当与本发明联系使用时，“ 5，5 ’ - 二硫代双_(2-硝基苯甲酸)”、“ 5_( 2-氨乙基)_ 二 硫代-2-硝基苯甲酸”、“N，N’ -二(4-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺” “N，N’ - 二 (3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺”、“N，N’ - 二(2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二 硫代二苯胺”、“N，N’ - 二( 2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺”和“N，N’ - 二 (4-nitrocinnamalylidene)-4, 4’ - 二硫代二苯胺”不仅是指相应的化学组成本身，还指任 何它的盐，包括任何它的化妆学和/或药学上可接受的盐。当与本发明联系使用时，“吸收材料”是指纤维材料。在某些实施方式中，所述吸 收材料是合成的、生物相容的、无纺的和/或多孔的/材料。吸收材料可以是，例如，包含聚 酰胺的纤维材料。相信的是，吸收材料可以是例如美国专利NO. 7，290, 668中描述的材料。 吸收材料可以是TRANS0RB 牌的材料(TRANS0RB是Filtrona Richmond, Inc .的注册商 标)，例如称为 R-27378 或 R28445 D#4345 的 TRANS0RB 牌材料，可从 Filtrona Fibertec, Richmond, Virginia, US 获得。当与本发明联系使用时，“流体”是指至少其相当部分可以经历流动的材料。气体 和液体是流体。流体不必是勻质的，但是可以含有偶发的颗粒或其它外来物质。因此，唾液、 龈沟液、龈线生物膜、舌生物膜、舌刮擦物和呼吸是流体，这些的任意多种的混合物也是，虽 然这些当中的任何可以含有某些固体。当与本发明联系使用时，“基质”是指根据本发明的物体的部分或部件，样品可以 被采集在其中和/或其上，不是指被采样的流体，也不是指该流体中的被分析物。当与本发明联系使用时，“样片(swatch)，，是指代表性的颜色样本。本发明在许多实施方式中提供，尤其是，可以在各个方面中了解。以下方面提供了 本发明的广度和可用性的说明性但非限制性的描述。本发明提供了以下方面的每一个
方面1. 一种用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的制品，所述制品包括
(a)包含至少一种吸收材料的基质，所述基质能够吸收所述样品；和
(b)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫醇化合物的浓度的信号。方面2.方面1的制品，其中所述制品是测试条。方面3.方面1的制品，其中所述流体的样品是生理性流体的样品。方面4.方面3的制品，其中所述生理性流体是口腔流体。方面5.方面4的制品，其中所述口腔流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生物 膜和/或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。方面6.方面1的制品，其中所述至少一种吸收材料包括聚酰胺材料。方面7.方面1的制品，其中所述检测试剂包括以下的至少一种5，5’_ 二硫代 双-(2-硝基苯甲酸)；5_ (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯亚 甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N，- 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代 二苯胺；N, N，- 二(4-nitrocinnamalylidene) -4, 4，- 二硫代二苯胺。方面8.方面7的制品，其中所述检测试剂是5，5’ - 二硫代双_(2_硝基苯甲酸)。方面9.方面1的制品，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与所述 样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的 至少一部分接触之后约十分钟结束。方面10.方面1的制品，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与所述 样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的 至少一部分接触之后约五分钟结束。方面11.方面1的制品，其中所述信号包括电磁信号。方面12.方面11的制品，其中所述电磁信号包括可见信号。方面13. —种用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的方法，所述方法包括
(a)提供单次使用的可丢弃的制品，其包含(i)包含至少一种吸收材料的基质，所述 基质能够吸收所述样品；和(ii) 一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与 所述样品的至少一部分接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中 硫醇化合物的浓度的信号；
(b)使所述基质与所述样品接触；
(c)观察由所述检测试剂的量提供的信号；
(d)将所述检测试剂的量所提供的信号与一个或更多个参考值比较，参考值的每一个 是硫醇化合物的浓度的指示，
从而测定所述样品中硫醇化合物的浓度。方面14.方面13的方法，其中所述流体是生理性流体。方面15.方面14的方法，其中所述生理性流体是口腔流体。方面16.方面15的方法，其中所述口腔流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线 生物膜和/或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。
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方面17.方面13的方法，其中所述制品是测试条。方面18.方面13的方法，其中所述至少一种吸收材料包括聚酰胺材料。方面19.方面13的方法，其中所述检测试剂包括以下的至少一种5，5’ - 二硫代 双-(2-硝基苯甲酸)，也称为DTNB ;5- (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二 (4-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二 苯胺；N，N’ - 二(2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(2，4- 二硝基苯亚甲 基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ -二(4-nitrocinnamalylidene) -4，4’ - 二硫代二苯胺。方面20.方面19的方法，其中所述检测试剂是5，5’-二硫代双-(2_硝基苯甲 酸)。方面21.方面13的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品 的至少一部分接触之后约十分钟结束。方面22.方面13的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品 的至少一部分接触之后约五分钟结束。方面23.方面13的方法，其中所述信号包括电磁信号。方面方面23的方法，其中所述电磁信号包括可见信号。方面25.方面M的方法，其中所述一个或更多个参考值的每一个是作为(a)颜 色的样片和(b)硫醇化合物的浓度的配对的组合提供的。方面沈.一种用于测定哺乳动物受试者患有特定疾病的风险的方法，所述方法包 括
(a)提供单次使用的可丢弃的制品，其包含(i)包含至少一种吸收材料的基质，所述基 质能够吸收所述样品；和(ii)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫 醇化合物的浓度的信号；
(b)使所述基质与包含来自所述受试者的一种或更多种生理性流体的样品接触；
(c)观察由所述检测试剂的量提供的信号；
(d)将所述检测试剂的量提供的信号与一个或更多个参考值比较，所述参考值的每一 个是受试者患有特定疾病的风险的指示，从而确定所述受试者患有特定疾病的风险。方面27.方面沈的方法，其中所述流体是生理性流体。方面观.方面27的方法，其中所述生理性流体是口腔流体。方面四.方面观的方法，其中所述口腔流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生 物膜和/或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。方面30.方面沈的方法，其中所述制品是测试条。方面31.方面沈的方法，其中所述至少一种吸收材料包括聚酰胺材料。方面32.方面沈的方法，其中所述检测试剂包括以下的至少一种5，5 ’-二硫代 双-(2-硝基苯甲酸);5- (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯亚甲 基)-4，4 ’-二硫代二苯胺；N，N’-二(3-硝基苯亚甲基)-4，4 ’-二硫代二苯胺；N，N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4 ’-二硫代二苯胺；N，N’-二(2，4-二硝基苯亚甲基)-4，4 ’-二硫代二苯胺；N，N’ -二(4-nitrocinnamalylidene) -4，4’ - 二硫代二苯胺。方面33.方面32的方法，其中所述检测试剂是5，5’-二硫代双-(2_硝基苯甲 酸)。方面34.方面沈的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品 的至少一部分接触之后约十分钟结束。方面35.方面沈的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品 的至少一部分接触之后约五分钟结束。方面36.方面沈的方法，其中所述信号包括电磁信号。方面37.方面36的方法，其中所述电磁信号包括可见信号。方面38.方面37的方法，其中所述一个或更多个参考值的每一个是作为(a)颜色 的样片和(b)受试者患有特定疾病的风险的配对的组合提供的。方面39.方面23的方法，其中所述观察和/或比较的步骤的至少一个是由自动化 的读取器进行的。方面40.方面36的方法，其中所述观察和/或比较的步骤的至少一个是由自动 化的读取器进行的。方面41.方面38的方法，其中所述特定疾病是牙周炎。方面42.方面38的方法，其中所述特定疾病是齿龈炎。方面43.方面38的方法，其中所述特定疾病是口臭。方面44.方面38的方法，其中所述特定疾病是心血管疾病。方面45.方面38的方法，其中所述特定疾病是II型糖尿病。方面46.方面38的方法，其中所述特定疾病是早产。方面47. —种试剂盒，包含
(a)至少一个用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的制品， 所述制品包括
(i)包含至少一种吸收材料的第一基质，所述基质能够吸收所述样品；和
(ii)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫醇化合物的浓度的可 见信号；
(b)比较物，其上印刷和/或固定了
(i)至少一个颜色样片，相对所述颜色样片来比较所述可见信号；和
(ii)与每个颜色样片相联系的，表明与所述颜色样片相关的硫醇化合物的相对浓度的 字母数字标识符；
(c)任选地，适合于含有所述制品和所述比较物的包装； (d )任选地，所述制品和所述比较物的使用说明书。方面48.方面12的制品，进一步包括比较物区域，所述比较物区域包含至少一个 颜色样片，相对所述颜色样片来比较所述可见信号。方面49. 一种用于测定来自哺乳动物受试者的流体的样品中硫醇化合物的浓度
12的单次使用的可丢弃的测试条，所述测试条包括
(a)包含至少一种吸收材料的基质，所述基质能够吸收所述样品；和
(b)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫醇化合物的浓度的信号。方面50.方面49的测试条，其中所述流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生 物膜和/或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。方面51.方面49的测试条，其中所述检测试剂包括以下的至少一种5，5’_ 二硫 代双-(2-硝基苯甲酸);5- (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯亚 甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N，- 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N，- 二(2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代 二苯胺；N, N，- 二(4-nitrocinnamalylidene) -4, 4，- 二硫代二苯胺。方面52.方面51的测试条，其中所述检测试剂是5，5’ - 二硫代双_(2_硝基苯甲 酸)。方面53.方面49的测试条，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与 所述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样 品的至少一部分接触之后约十分钟结束。方面方面49的测试条，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分与 所述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样 品的至少一部分接触之后约五分钟结束。方面55.方面49的测试条，其中所述信号包括电磁信号。方面56.方面55的测试条，其中所述电磁信号包括可见信号。方面57. —种用于测定哺乳动物受试者患有特定疾病的风险的单次使用可丢弃 的测试条，所述测试条包括
(a)包含至少一种吸收材料的基质，所述基质能够吸收所述样品；和
(b)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述受试者患有特定疾病的风险的 信号，和其中
(i)所述检测试剂包括以下的至少一种5，5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)； 5- (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N' -二(4-硝基苯亚甲基)-4，4' - 二硫代 二苯胺；N，N’ - 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’-二硫代二苯胺；N，N’-二(2-硝基苯亚甲 基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二( 2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二 (4-nitrocinnamalylidene)-4, 4’ - 二硫代二苯胺；和(ii)所述特定疾病是以下至少一种 牙周炎、齿龈炎、口臭、心血管疾病、II型糖尿病、早产。方面58.方面57的测试条，其中所述检测试剂包含5，5’ - 二硫代双_(2_硝基苯 甲酸)。方面59.方面57的测试条，其中所述特定疾病是牙周炎。方面60.方面57的测试条，其中所述特定疾病是齿龈炎。方面61.方面57的测试条，其中所述特定疾病是口臭。
方面 62.方面57的测试条，其中所述特定疾病是心血管疾病。方面 63.方面57的测试条，其中所述特定疾病是II型糖尿病。方面 64.方面57的测试条，其中所述特定疾病是早产。方面 65.一种试剂溶液，包含缓冲液、5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)
和湿润剂。方面 66.方面65的试剂溶液，其中所述缓冲液是浓度约5 mM到200 mM的磷酸钠
缓冲液。方面 67.方面65的试剂溶液，其中所述缓冲液是浓度约20 mM到150 mM的磷酸
钠缓冲液。方面68.方面65的试剂溶液，其中所述缓冲液是浓度约IOOmM的磷酸钠缓冲液。
方面69.方面65的试剂溶液，其中所述缓冲液pH值约6. 5到8. 5。
方面70. 方面65的试剂溶液，其中所述缓冲液pH值约6. 5到7. 5。
方面71.方面65的试剂溶液，其中所述缓冲液pH值约7. 0。
方面72.方面65的试剂溶液，其中所述DTNB以约10 mg/L到150 mg/L的浓度存 在。方面73.方面65的试剂溶液，其中所述DTNB以约80 mg/L到120 mg/L的浓度存在。方面74.方面65的试剂溶液，其中所述DTNB以约100 mg/L的浓度存在。 方面75.方面65的试剂溶液，其中所述湿润剂包括甘油、木糖醇、山梨醇、甘油或
丙二醇方面76.方面75的试剂溶液，其中所述湿润剂包括甘油。方面77.方面76的试剂溶液，其中所述甘油以按体积约0. 1%到5. 0%的浓度存在。方面78.方面76的试剂溶液，其中所述甘油以按体积约0. 5%的浓度存在。方面79.方面75的试剂溶液，其中所述湿润剂包括木糖醇。 方面80.方面79的试剂溶液，其中所述木糖醇以按重量约洲到10%的浓度存在。
方面81.方面79的试剂溶液，其中所述木糖醇以按重量约4%的浓度存在。

方面82.方面65的试剂溶液，进一步包含调味剂或香剂。方面83.方面82的试剂溶液，其中所述调味剂或香剂是薄荷。方面85.方面84的试剂溶液，其中所述醇是异丙醇或乙醇。方面86.方面65的试剂溶液，进一步包含碱土金属或过渡金属。方面87.方面86的试剂溶液，其中所述金属包括锰、镁或钴。方面88.—种包含固体基底的检测设备，所述固体基底包含检测区域，其中所述
检测区域浸透方面65-87的任一项的试剂溶液方面 89.方面88的检测设备，其中所述试剂溶液被干燥。方面90. 方面88的检测设备，其中所述固体基底是惰性纤维的垫片。方面91. 方面90的检测设备，其中所述纤维包括美国专利NO. 7，290, 668中描述的至少一种材料
方面92.方面90的检测设备，其中所述纤维包含称为R-27378或R28445 D#4345 的TRANS0RB 牌材料。方面93.方面88的检测设备，其中所述固体基底是矩形的，或由一个或多个模切 的形状组成，一般最多达约8 mmX8 mm，厚度约1.0 mm。方面94.方面90-93的检测设备，其中所述固体基底进一步包含一个或更多个标 准区域。方面95.方面94的检测设备，其中所述一个或更多个标准区域包含预定颜色和 强度的比色标准。方面96. —种制造硫醇化合物检测设备的方法，包括使固体基底与根据方面 65-87的任一项的试剂溶液接触，以及干燥所述设备。方面97.通过方面96的方法制造的检测设备。方面98. —种检测受试者中的口臭的方法，包括使采自所述受试者的口腔的生理 性流体与方面88或方面97的检测设备接触来形成接触了生理性流体的设备，以及检测所 述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水平，其中至少约40微摩尔的硫醇的水平 是口臭的指示。方面99. 一种检测受试者中的齿龈炎的方法，包括使采自所述受试者的口腔的生 理性流体与方面88或方面97的检测设备接触来形成接触了生理性流体的设备，以及检测 所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水平，其中至少约80微摩尔的硫醇的水 平是齿龈炎的指示。方面100. —种检测受试者中的牙周病的方法，包括使采自所述受试者的口腔的 生理性流体与方面88或方面97的检测设备接触来形成接触了生理性流体的设备，以及检 测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水平，其中至少约160微摩尔的硫醇的 水平是牙周病的指示。方面101. 方面98、99或100的任一项的方法，其中所述检测是通过比较(a)接 触了生理性流体的设备与(b )标准物的颜色强度或吸光度来进行的。方面102.方面101的方法，其中所述检测是通过眼睛进行的。方面103.方面101的方法，其中所述检测是通过机械进行的。方面104.方面101的方法，其中所述检测是通过分光光度计进行的。方面105.方面101的方法，其中所述检测提供了定量或半定量的信号。方面106.方面98、99或100的任一项的方法，其中所述生理性流体是GCF、舌刮 擦物、舌生物膜、龈线生物膜、唾液或呼吸。方面107. —种对于口腔硫醇化合物的检测有用的测试试剂盒，包括方面65的试 剂溶液、方面88的检测设备或方面97的检测设备。本发明的进一步的方面。本发明尤其地在以下进一步的方面中提供。在正常的状况中，许多微生物在人体之上或之中生存而不引起对这些人的损害。 然而，某些微生物的提高的量可能与疾病状态相关联。特别有问题的是产生对人类有毒的 显著浓度的化学物的微生物量的提高。这样的毒素包括挥发性的含硫化合物(VSC)，例 如，硫化氢、甲硫醇、二甲基二硫醚和二甲基硫。更高浓度的挥发性硫化合物与某些疾病状 态相关，并与社交的非难状况相关，例如口臭，或呼吸臭。期望的是允许挥发性硫化合物的容易的检测，以促进潜在致病微生物的存在的检测，以及这些微生物相关的疾病状态和状 况的检测。口腔细菌产生的主要的VSC是硫化氢和甲硫醇。硫化氢由细菌酶L 一半胱氨酸脱 巯基酶产生，所述酶降解氨基酸L 一半胱氨酸产生硫化氢、铵和2-丙酮酸。另一种主要的 VSC,甲硫醇，在细菌酶L 一甲硫氨酸γ裂解酶的作用下产生，所述酶分解氨基酸L 一甲硫 氨酸产生甲硫醇、铵和2- 丁酮酸。已经报道了毫摩尔水平的VSC在患有严重牙周病的人的龈沟液(GCF)中出现。VSC 的存在给患有疾病的人的呼吸带来恶臭。除了恶臭之外，VSC还显示了是有毒的以及不利 地影响许多哺乳动物酶。在口腔内的舌背面和其他地方寄居的细菌的VSC产生给呼出的呼 吸带来恶臭，引起口臭。几种口腔流体的每一种中的VSC的水平与牙周病活性的水平直接 相关。呼出气中VSC的水平与呼吸臭或口臭的水平直接相关。虽然本领域中DTNB的比色反应可能被认为在pH 8. 0下最佳地工作，DTNB的水溶 液在这样的条件下在室温下保存几天时是不稳定的。出乎意料地发现的是，包含金属盐以 及约中性的PH值的调整赋予了显著地延长的储存期限的有利性质。举例来说和非限制性 的，发现的是，当混合物包括磷酸盐或咪唑缓冲液，PH 7. 0和0. 1 mM氯化锰时，DTNB混合物 在室温下维持稳定超过一年。因此，本发明尤其地提供了产色的组合物，其吸光度与和所述 组合物混合的流体中VSC的浓度直接相关，并且所述组合物具有至少一年的储存期限。根据本发明的制品和/或方法和/或组合物对于检测口腔流体中存在的、以及由 舌背面寄居的尤其是细菌产生的、和来自齿龈缝的GCF中的恶臭性毒素的存在是有用的。例如，在根据本发明的方法的一个方面中，通过根据本发明的制品的至少基质部 分轻轻地接触受试者的口腔中的口腔流体，从而来自受试者口腔的口腔流体被吸收到所述 制品的基质部分中，来获得口腔流体的样品，然后等待数秒到数分钟之间的时间，此后观察 在所述制品的基质部分上产生的颜色，所述颜色然后与和所述制品一起提供的颜色比较物 图表上的一种或更多种颜色比较。举例来说而非限制性的，根据本发明的检测VSC的方法可以具有10微摩尔VSC级 别的检测下限，以及2毫摩尔VSC级别的响应范围的上限。本发明还提供了检测呼出呼吸中VSC的方法。受试者向紧靠受试者口腔持握的根 据本发明的制品上呼出呼吸，呼出呼吸的冷凝物接触并被吸收到所述制品的基质部分中。根据本发明的制品和/或方法和/或组合物的使用简单性促成了护理专业人员的 办公室内测试和受试者的家庭测试。根据本发明的制品和/或方法和/或组合物更一般地 对于样品中VSC的检测是有用的，所述样品包括空气、水、油和/或与粮食或食物接触的其 他流体，因此对于微生物代谢作用的产物、致病微生物、口臭、VSC污染、食物腐败或污染的 检测也是有用的。本发明在许多实施方式中提供，尤其是，可以在各个实施例中了解。以下实施例提 供了本发明的广度和可用性的说明性但非限制性的描述。实施例1.根据本发明的制品的实施方式的制造。选择吸收材料。一片选定的吸 收材料浸入溶液中，所述溶液含有溶剂和检测试剂以及任选地其他成分。在一段时间以后， 片层从溶液中取出并干燥。干燥的片层固定在塑料背衬上形成片层-背衬叠层。片层-背 衬叠层切割成条，所述条的每一个是根据本发明的制品。
实施例2. 吸收材料。例如在美国专利NO. 7，290，668中描述的材料或其他类 似的材料可以用作吸收材料。材料例如称为R-27378或R28445 D#4345和可从Filtrona Fibertec, Richmond, Virginia, US获得的TRANS0RB 牌材料可以用作吸收材料。实施例3. 检测试剂。检测试剂可以包括5，5’_ 二硫代双-(2-硝基苯甲酸)； 5-(2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯亚甲基)-4，4’-二硫代二苯胺； N，N，- 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N，- 二(2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二 硫代二苯胺；N，N’-二(2，4-二硝基苯亚甲基)-4，4’-二硫代二苯胺；和/或N，N’-二 (4-nitrocinnamalylidene)-4, 4’ - 二硫代二苯胺。二硫代二苯胺化合物，例如在美国专利 NO. 4，414，414的实施例1_13的任一个中描述的，作为检测试剂是合适的。实施例4.含有溶剂和检测试剂的溶液。水可以用作5，5’ - 二硫代双-(2-硝基 苯甲酸)的溶剂。非水性溶剂可以用作N，N’-二(4-硝基苯亚甲基)-4，4’-二硫代二苯胺； N，N，- 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N，- 二(2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二 硫代二苯胺；N，N’-二(2，4-二硝基苯亚甲基)-4，4’-二硫代二苯胺；和/或N，N’-二 (4-nitrocinnamalylidene) -4，4’ - 二硫代二苯胺的溶剂。实施例5.含有溶剂和检测试剂的溶液的任选的其他成分。对于水溶液，本领域 已知的水可混溶的醇类，例如，异丙醇，可以被包括来促进片层的干燥。本领域已知的缓冲 液，例如，磷酸钠，可以被包括用于PH值稳定在接近中性和由此检测试剂的稳定。本领域已 知的湿润剂，例如，木糖醇、山梨醇、甘油或丙二醇，可以被包括，从而根据本发明的制品可 以保持稍微潮湿和不会不必要地易碎。本领域已知的二价阳离子的化妆上可接受的盐，例 如，氯化锰、氯化镁或氯化钴，可以被包括用于根据本发明的未使用的制品的颜色-固定。 本领域已知的二价阳离子的化妆上可接受的螯合剂，例如，乙二胺四乙酸(EDTA)可以被包 括，用于在根据本发明的制品的使用期间产生的颜色的稳定。本领域已知的香味素、本领域 已知的着色剂和/或本领域已知的抗微生物剂也可以任选地被包括。实施例6.直接和间接接触设备。在第一个示范性的实施方式中，根据本发明的 制品是薄的和浅的正矩形棱柱体。占据最大表面积的棱柱的两个面之一的末端部分、固定 于其上的是正矩形的棱柱状的第一垫片。第一垫片含有检测试剂。这种实施方式预计用于 样品与检测试剂的直接接触。在第二个示范性的实施方式中，对于样品与检测试剂的间接 接触，正矩形的棱柱状的第二垫片置于与第一个示范性的实施方式中固定第一垫片的同一 面的对侧末端上，所述制品沿着这个面的纬度方向的轴卷曲，以具有“V”形形状，第一垫片 处在“V”形的一个臂的末端，第二垫片处在另一个臂的末端。在这个实施方式中，第二垫片 没有检测试剂。第二垫片与样品接触。第二垫片然后与第一垫片接触，从而将所述样品的 至少一部分从第二垫片转移到第一垫片。实施例7.垫片颜色和检测试剂的组合的选择以便于结果的可视化。在合适的条 件下，DTNB在与硫醇化合物反应时提供了黄色的信号。在一个实施方式中，类似于上述第 一个示范性的实施方式中的制品用白色垫片制成。观察到的是，淡黄色颜色有时是人眼难 以针对比较物来辨别的，DTNB提供的黄色信号将与所述比较物来比较，其带有白色的样片 和相应于各种硫醇浓度的各种浓淡的黄色的样片。在一个可选择的实施方式中，类似于上 述第一个示范性的实施方式中的制品用蓝色垫片制成。观察到的是，在这个蓝色背景上产 生的黄色可以向人眼呈现绿色，在某些情况下比在白色背景上产生的黄色更容易辨别。对于这种可选择的实施方式，提供了比较物，DTNB提供的信号将针对所述比较物来比较，其带 有蓝色的样片(来匹配未反应的垫片)、和与各种硫醇浓度相应的各种浓淡的绿色的样片。实施例8.根据本发明的制品用于诊断目的的用途筛选牙周病的唾液测试条的 临床研究。制备根据本发明的唾液测试条，其具有浸透显色试剂的多孔的垫片，所述显色试 剂检测微生物硫化合物。这项研究比较了有和没有牙周疾病的受试者中的唾液条(SS)分 值，并检查了 SS分值和牙周病状态的临床度量之间的关系。编入了七十三位受试者，平均 年龄(SD) 44. 73 (19.61)，年龄范围23到85岁，男性百分比55%，白种人百分比44%。对 每个牙齿的6个位点进行牙周病学评估，包括菌斑指数(PI)、齿龈指数(GI)、临床的牙周病 学附着体水平(AL)和探查时的出血(Β0Ρ)。受试者分成3个组牙周健康的(没有附着体的 损失和没有牙龈出血，18位受试者)、齿龈炎(没有附着体的损失和存在牙龈出血，32位受试 者)、和牙周炎(在5颗或更多牙齿中附着体的损失〉5 mm，23位受试者)。产色的条被用于 从所有存在的牙齿的牙龈缘采集唾液流体(每个牙龈1条)。根据比色图表对显色反应计分。 计分检查人对临床状态是不知晓的。在平均SS分值和GI (r=0. 6，p=0. 001)和AL(r=0. 47， P = 0.001)之间发现了良好到中度的相关性。方差分析显示了在三个研究组之间SS分值 的显著差异(P= 0.03) ;p0st-h0C分析显示了健康和牙周炎之间的差异(p = 0.01)。结果 表明这些条作为牙周疾病的筛选测试是有用的。它们使用简单，提供了快速的结果，不需要 临床的专门技能。同样的测试可以在任何医学的/牙科的环境中容易地进行。实施例9.用于检测/估计溶解的口腔硫醇的装置和方法。口腔的口臭和牙周 疾病经常涉及挥发性硫化合物(VSC)、主要是硫化氢和甲硫醇的微生物产生。历史上，工作 集中于检测它们在呼出呼吸中的存在，而不是微生物的生物膜内的存在。这项研究的目的 是开发针对溶解的硫醇的测试条，其提供了快速可见的结果，易于使用，对口腔组织没有刺 激。筛选了各种材料在用含有根据本发明的方面7的硫醇检测试剂的溶液预处理之后提供 对溶解的硫醇的视觉可辨别反应的能力。通过用添加的硫醇攻击清洗液，光谱学地估计了 干燥的检测试剂从垫片浸出的倾向。原型测试条置入稳定性研究中以估计货架寿命。由独 立的实验室进行了刺激测试。最后，改变检测试剂的浓度，来确定是否可以达到不同的“截 止”结果显色。鉴定了多孔的垫片材料，其具有良好的物理性质并且适合于硫醇检测试剂和 它的生色产物。一旦干燥在垫片上，试剂显示了在再水化时浸出的很低倾向，维持了良好的 光谱反应，显示了随着时间的过去的合理的稳定性。当与标准的口腔护理产品比较时，发现 所述试剂对于培养的齿龈组织细胞是非刺激性的。最后，通过提高或降低试剂浓度(垫片中 检测物的量)，我们发现我们可以操纵测试的平台期显色。这些结果表明本发明包含的测试 条作为检测口臭和牙周疾病致病病原体的辅助是有用的。实施例10.利用原型测试条的溶解的口腔硫醇的检测。革兰氏阴性厌氧菌一般 对口臭和牙周病特征性的硫化合物负责。当活跃时，它们可以通过标记代谢活性，例如，硫 化氢和甲硫醇的产生来检测。这些可以在气相中，例如在通过口腔呼出的呼吸中检测，然而 这样的技术需要昂贵的装置。因此，制备了相对便宜的、易于使用和解释的原型测试条，其 可以检测溶解在水性液体中的挥发性和非挥发性的硫醇。这项研究的目的是1)确定测试 条检测舌背面的口腔流体中的硫醇的能力；2)确定测试条检测齿龈表面的口腔流体中的硫 醇的能力；3)比较舌表面的发现和齿龈表面的发现；和4)比较测试条结果与利用气相色 谱法分析的样品。制备原型，其类似于和呈现为像可丢弃的PH值测试条。它们由软质塑料背衬上的多孔垫片组成。在装配之前，垫片用硫醇检测物溶液处理并干燥。利用标准的硫 醇溶液，产生比色图表，它的颜色条(样片)与硫醇的具体浓度相关。图表随后用于估计未知 的流体样品中的硫醇浓度。在采集自舌背面的流体、以及来自齿龈表面的流体中检测溶解 的硫醇。在小的研究群体中，来自舌背面的溶解的硫醇的平均水平(15 μΜ)相对低于自齿 龈表面发现的(88 μΜ)。总体上，具有可检测的口腔流体硫醇(任何来源)的个体显示了一 般更高水平的挥发性的硫醇，如通过气相色谱法测量的。因此，开发了快速和容易的分析， 其能够检测口腔流体中溶解的硫醇。舌背面和齿龈生物膜具有潜在的诊断价值，每一种显 示了与呼出呼吸中可测量的原始挥发性硫醇相关。这些结果表明，类似这些的测试条也可 以在期望估计的溶解的硫醇时一般地使用。另外，以下提供了本发明的进一步描述和实施例说明。本发明提供了尤其是检测硫醇化合物的试剂溶液、检测设备和产色方法，所述硫 醇化合物包括寄居在舌背面上和齿龈缝中的口腔细菌产生的挥发性的硫化合物(VSC)。如 在此使用的，“硫醇化合物”是指具有硫醇或“-SH”官能团的分子，或具有硫醇盐或硫化物阴 离子的分子。含硫分子的实例包括硫化氢和甲硫醇(methanethiol，甲硫醇)。在本发明的 某些实施方式中，根据本发明的产色组合物的吸光度与同所述组合物混合的流体中硫醇化 合物的浓度直接相关。根据本发明的组合物和方法对于检测舌背面上和获自齿龈缝的GCF中寄居的细 菌所产生的恶臭性毒素的存在是有用的。例如，在根据本发明的方法的方面中，通过针对舌背面轻轻地摩擦测试条获得舌 刮擦物，来形成装载了刮擦物的敷涂器尖端。另外，或作为选择，测试条可以用唾液湿润。在 另一个实施方式中，通过将消毒的纸吸收点插入到齿龈缝中来获得GCF样品。产生发色团 的测试条或吸收点的颜色与颜色编码图表上的标准或与内部对照物比较。在某些实施方式 中，图表按照黄色的浓淡分级，从相应于20-100微摩尔硫醇的LOW (淡黄)、相应于100-200 微摩尔硫醇的MEDIUM (黄色)到相应于>200微摩尔硫醇的HIGH (亮黄)。本发明提供了，尤其是，含有缓冲液、5，5’ - 二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和 湿润剂的试剂溶液。当与本发明联系使用时，“DTNB”是指5，5’ - 二硫代双(2-硝基苯甲 酸)。DTNB也称为Ellman’ s试剂，具有CAS编号69-78-3。不希望受理论的限制，发明人相 信，本领域已知的是DTNB与从H2S或CH3SH中存在的-SH官能团形成的硫化物或硫醇阴 离子反应。在这样的反应中，DTNB的二硫化物硫之一被HS_或CH3S_阴离子攻击，此时释放 5-硫代2-硝基苯甲酸盐阴离子(TNB)。TNB与互变的硫代苯醌平衡地存在。硫代苯醌具有 在412 nm处最大的吸收(吸光度)，13，GOOM-1CnT1的摩尔消光系数。这容许反应通过混合物 的黄色的提高来光谱学地或视觉上定量。本发明还提供了检测设备，其是固体基底，例如，多孔质固体基底，包括检测区域， 其中所述检测区域浸透了含有缓冲液、5，5’ - 二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和湿润剂 的试剂溶液。本发明还提供了制造对于检测生理性流体中硫醇化合物有用的检测设备的方法。 所述制造方法包括使固体基底与含有缓冲液、5，5’ - 二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和 湿润剂的试剂溶液接触，和干燥所述设备。本发明还提供了通过如上所述的方法制造的、对于检测生理性流体中的硫醇化合物有用的检测设备。本发明提供了通过使取自受试者的口腔的生理性流体与如上所述检测设备接触， 来形成接触了生理性流体的设备，检测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水 平，来检测受试者的口臭的方法，其中大于约40微摩尔硫醇的水平是口臭的指示。在某些 实施方式中，所述硫醇化合物浓度水平在约40-200微摩尔之间。本发明提供了通过使取自受试者的口腔的生理性流体与如上所述检测设备接触， 来形成接触了生理性流体的设备，检测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水 平，来检测受试者的齿龈炎的方法，其中大于约80微摩尔硫醇的水平是齿龈炎的指示。在 某些实施方式中，所述硫醇化合物浓度水平在约80-400微摩尔之间。本发明提供了通过使取自受试者的口腔的生理性流体与如上所述检测设备接触， 来形成接触了生理性流体的设备，检测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水 平，来检测受试者的牙周炎的方法，其中大于约160微摩尔硫醇的水平是牙周炎的指示。在 某些实施方式中，所述硫醇化合物浓度水平在约160-600微摩尔之间。本发明进一步提供了对于检测来自口腔的生理性流体中的硫醇化合物有用的测 试试剂盒，包括试剂溶液的测试试剂盒，所述试剂溶液含有缓冲液、5，5’ - 二硫代双(2-硝 基苯甲酸)(DTNB)和润湿剂，是包括检测区域的固体基底的检测设备，其中所述检测区域浸 透含有缓冲液、5，5’ - 二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和湿润剂的试剂溶液，或通过上述 方法制成的检测设备。试剂溶液.发明人开发了在检测口臭、齿龈炎和/或牙周疾病中有用的试剂溶 液。所述试剂溶液含有缓冲液、检测试剂和湿润剂。所述缓冲液用于将溶液保持在靠近生 理学pH值的pH值，其是约7. 0的pH值。当前的试剂溶液的pH值可以在约6. 5到8. 5的 范围内，或在约6.5到7.5的范围内。在某些实施方式中，所述试剂溶液的pH值在7.0。在 某些实施方式中，所述缓冲液是浓度约5 mM到200 mM的磷酸钠缓冲液。在某些实施方式 中，所述缓冲液是浓度约20 mM到150 mM的磷酸钠缓冲液。在某些实施方式中，所述缓冲 液是浓度约100 mM的磷酸钠缓冲液。本发明的试剂溶液含有检测试剂。在某些实施方式中，所述检测试剂是5，5’ - 二 硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)。在某些实施方式中，所述DTNB以约10 mg/L到150 mg/L 的浓度存在。在某些实施方式中，所述DTNB以约30 mg/L到150 mg/L的浓度存在。在某 些实施方式中，所述DTNB以约80 mg/L到120 mg/L的浓度存在。在某些实施方式中，所述 DTNB以约100 mg/L的浓度存在。本发明的试剂溶液含有湿润剂。本发明的湿润剂是食品或药品级别的。适合的湿 润剂包括甘油、木糖醇、山梨醇、甘油或丙二醇。在某些实施方式中，所述试剂溶液包括以按 体积约0. 1%到5.0%的浓度存在的甘油。在某些实施方式中，所述甘油以按体积约0.5%的 浓度存在。在某些实施方式中，所述试剂溶液包括木糖醇。在某些实施方式中，所述木糖醇 以按重量计算约洲到10%的浓度存在。在某些实施方式中，所述木糖醇以按重量计算约4% 的浓度存在。本发明人发现对于某些应用，甘油和木糖醇良好地工作，来维持垫片材料的起始 颜色(米色)，以提供检测与硫醇/DTNB反应相关的颜色改变的最佳“平台”。此外，木糖醇为 垫片表面赋予了甜味(在许多口腔护理制剂中使用)，甘油赋予了更软的触感。添加甘油，一
20种湿润剂和软化剂，帮助维持干燥时起始的垫片颜色，也为垫片提供了更平滑的触感。本发明的试剂溶液还可以含有调味剂或香剂，例如，薄荷。在一个实施方式中，0. 5 g羟基丙基β -环糊精用作载体，向它添加0. 16 mL薄荷油。处在IOmL水中的这种混合物 用作向100 mL试剂溶液中的添加剂。因而，每IL标准试剂溶液量，香味剂/香剂添加物是 5 g羟基丙基环糊精和1.6 mL薄荷油，复合的油混合到100 mL水中，之后将它添加到试剂 溶液的主体中。本发明的试剂溶液还可以含有醇，例如，异丙醇。在某些实施方式中，使用70%的 异丙醇。醇是USP级别的。在某些实施方式中，达到试剂的十分之一体积是醇。醇的存在 容许检测试剂在固体基底例如垫片材料上更快地干燥。本发明的试剂溶液任选地还可以含有碱土金属或过渡金属。适合的金属的实例包 括锰、镁，以及，特别是对于间接接触设备，包括钴。在室温和大气压力下，当水性液体被容 纳在开放容器中时，硫化氢倾向于从溶解了硫化氢的水性液体中逃逸，进入开放容器上方 的空气中。本发明的设备和方法在测量液体样品以及气体样品中的硫醇化合物水平方面是 令人惊讶地成功的。检测设备。发明人开发了在检测口臭、齿龈炎和/或牙周炎中有用的检测设备。在 某些实施方式中，所述检测设备是固体基底，其含有检测区域，其中所述检测区域浸透如上 所述的试剂溶液。在某些实施方式中，所述试剂溶液被干燥在所述固体基底上。发明人发 现，一旦试剂溶液被干燥在所述固体基底上，它是相当稳定的。在某些实施方式中，可以添 加金属离子(例如锰)。在某些实施方式中，所述固体基底是惰性纤维的多孔的垫片。在某些实施方式中， 所述纤维由美国专利NO. 7，290，668中描述的至少一种材料组成。在某些实施方式中，所 述纤维由称为R-27378或R28445 D#4345的TRANS0RB 牌材料组成。在某些实施方式中， 有色的(例如，蓝色)垫片可以代替白色垫片使用。蓝色的显现容许可选择的颜色发生可能 性，能够改变垫片的起始颜色，也容许有效地操纵与疾病过程的不同阶段相应的阈值浓度。 在某些实施方式中，“标准”垫片或色带(即，具有静态的颜色)紧邻于“检测物”垫片放置。 在其他实施方式中，这些“标准”和“检测物”区域通过小的间隙互相分隔，显示在它们之间 的白色背景。当视觉地比较某些颜色组合时，两个区域之间的细小间隙容许更好的可见性。 发现的是，当检测取决于黄色指示物时，以及当颜色强度和/或浓淡的差异细微、而不是非 常明显时，这是实际的。在某些实施方式中，也可以使用内部对照物。在某些实施方式中，固体基底可以被切割或另外形成某些期望的形状和/或大小 (例如，通过模切)。在某些实施方式中，所述固体基底例如垫片可以是约0.8 mm到约1.2 mm 之间的厚度、约5. 5 mm到约8 mm之间的宽度，和约7 mm到8 mm之间的长度。可以形成除 了正矩形的棱柱状形状以外的形状，例如，在大约8 mmX8 mm的区域内，例如，形成圆形、菱 形和加号形。也可以模切其他期望的形状。并且，也可以引入反应性和非反应性部分之间 的间隙。在某些实施方式中，除了具有检测区域之外，检测设备还具有标准区域。因而，检 测设备的用户能够容易地比较检测区域和标准区域来确定测试是阳性还是阴性。在某些实 施方式中，所述标准区域是预定强度的比色标准。在一个实施方式中，测试棒被用于直接接触应用(附图1)。在这个实施方式中，使用在棒的一个末端含有垫片的测试棒，其中所述垫片浸透测试溶液。在某些实施方式中测 试溶液被干燥，容许溶剂蒸发。垫片置于与样品(例如，唾液)直接接触中。在一段时间之 后，检查垫片来确定颜色的发生。某些实施方式包括直接接触试验设备(附图2A-2D)。在与测试样品接触时，反应性 垫片可以或可以不改变颜色(取决于样品中存在的硫醇的水平)。比较物的颜色在测试期间 不改变，因为在比较物垫片中不存在检测试剂。比较物可以具有a)与反应性垫片的起始颜 色相同的颜色(例如，附图2A，其中样品中更高的硫醇水平导致反应性垫片与比较物颜色逐 渐地分开)，或b)目标截止颜色(例如，附图2B，其中在设定的时点，逐步更高的硫醇水平引 起所述反应性垫片集中，或可能超过比较物颜色)。可以采用超过一个比较物，例如，当例如 起始和截止比较物颜色都存在时，分别紧靠反应性垫片的上方或下方(附图2C)。因此，截 止颜色可以表明如果样品中存在一定的硫醇水平，反应性垫片可能获得的颜色。嵌套的反 应性垫片可以(取决于硫醇浓度)获得或超过比较物的颜色。围绕反应性垫片的间隙(参见 上文的较早的论述)，可以便于颜色改变的更好的识别。附图2D描绘了一种情况，其中附图 2B的垫片位置相反。附图3 (也是直接接触形式)描绘了可选择的测试条结构，其中模切的(成形的)反 应性垫片嵌套在比较物内。举例来说，此处呈现的形状是圆形、菱形或交叉形。附图3A-C 描绘了嵌套在比较物内的圆形的反应性垫片。嵌套的反应性垫片可以(取决于硫醇浓度)获 得或超过比较物的颜色。作为阳性测试的指示的匹配或超过比较物颜色由附图3A和;3B显 示。作为阳性测试的指示的单独的超过由附图3C-E显示。附图3C和3D类似于3C，但是具 有非圆形的反应性垫片。没有在这个系列中显示的是围绕反应性垫片的间隙(参见上文的 较早的论述)，其可以便于颜色改变的更好的识别。本发明提供了尤其是间接接触设备(例如，附图4A和4B)。在本发明的一个实施方 式中(附图4A)，试剂被施加在圆柱形多孔基质的远端，试剂稍微地朝向近端迁移到部分中。 然后干燥材料，置入透明的保护罩中。在使用期间，样品施加到近端，流体迁移朝向远端，并 填充所述材料。当样品与处在远端的检测试剂接触时，它可以与试剂反应，引起颜色改变。 在本发明的另一个实施方式中(附图4B)，试剂溶液被施加到两个圆筒之一上，容许干燥。浸 透试剂的圆筒置入透明的保护罩内。第二圆筒(用于样品)置于靠近、但不直接接触所述第 一圆筒的位置。在使用期间，样品施加到“样品”圆筒上并填充“样品”圆柱。然后使样品 圆筒与试剂圆筒接触，样品流体从样品圆筒迁移到检测圆筒中。与检测试剂反应的样品中 的硫醇将在检测圆筒中显现。在间接接触设备的另一个实施方式中(例如，附图5)，样品接触平的表面，然后将 它导引到反应性垫片上。然后通过相对样品应用面的测试设备的表面的透明窗，观察反应 性垫片中的颜色改变(或颜色改变的缺乏)。本发明的检测设备的一个实施方式在附图6中示出。检测设备10具有样品侧面 11和结果侧面12。位于侧面11的是样品垫片20。一旦样品流体进入侧面11上的样品垫 片20，它被转移到反应垫片22，其面对侧面12。透明盖23覆盖了结果垫片22。间接接触设备的其他实施方式在附图7A-7D中示出。附图7A和7B是“折叠”设 备的实例。在附图7A中显示了设备30，其具有支持物31、样品采集垫片32和试剂垫片33。 试剂溶液浸入试剂垫片33，任选地可以在其中干燥。样品(例如，唾液)施于样品采集垫片32中，折叠支持物，从而所述样品采集垫片32和试剂垫片33相互接触。当折叠时，样品采 集垫片32和试剂垫片33可以被轻轻地挤压，从而来自样品采集垫片32的流体湿润了并转 移到试剂垫片33。用户然后打开设备并观察结果(例如，颜色改变对比没有颜色改变)，在试 剂垫片中见到。附图7B显示了具有样品采集区域41、试剂区域42和反应窗口 45的试验设备40。 试剂溶液浸入试剂区域42，可以任选地在内干燥。样品(例如，唾液)施于样品采集区域41 中，折叠支持物，从而所述样品采集区域41和试剂区域42相互接触。当折叠时，样品采集 区域41和试剂区域42可以被轻轻地挤压，从而来自样品采集区域41的流体湿润了试剂区 域42。不同于打开设备来观察结果(如附图7A中的)，用户简单地翻转试验设备，来通过透 明的(例如，塑料的)窗口 45观察结果。附图7C和7D显示了采用“滑动物”构思的检测设备。在附图7C所示的实施方式 中，设备50由条51组成，其包括样品采集区域52和透明(例如，塑料)套筒53。套筒53包 括附着在其内的试剂区域M。可以被干燥的试剂溶液浸入试剂区域M。用户从套筒53中 移出条51，向样品采集区域52施加样品。用户然后滑动条51进入套筒53，从而样品采集 区域52接触试剂区域M。用户可以轻轻地挤压样品采集区域52和试剂区域M，从而来自 样品采集区域52的流体润湿试剂区域54。在一个实施方式中，试剂区域M是套筒53的不 可分割的部分。附图7D显示了检测设备60，其包括样品采集区域62、套筒63和反应窗口 65。套 筒63包括试剂区域64。可以被干燥的试剂溶液浸入试剂区域64。用户将样品施加到样品 采集区域62上，然后滑动套筒从而试剂区域64接触样品采集区域62。所述接触足够紧密 以容许样品迁移到反应区域64中。用户然后通过透明(例如，塑料)窗口 65读取结果，其紧 靠反应区域64的上方安置。附图8A-8F描绘了本发明的各种可选择的包装设计。附图8A描绘了“火柴板”设 计。单独的条由用户取下。每个条可以任选地被包装，例如，用箔片。每个板具有方便量的 测试条，例如每个板6-12个。附图8B描绘了箔包装和盒形设计。测试条以批量保存在盒 子中，例如，卡纸板或塑料盒子，或包装在箔条中。每个箔条含有方便量的测试条，例如每条 5-10个。附图8C描绘了“口香糖包装”设计。测试条以批量保存在盒子中，例如，纸板或 塑料盒子，或单独地包装在铝箔包装中。附图8D是与附图8C类似的设计，仅仅包装是塑料 罩。每个测试条独立地包装。在一个实施方式中，5-10个测试条包装在分配器中。附图8E 提供了具有盖子的分配器。附图8F提供了滑动抽取型分配器。本发明进一步提供了模压的测试壳(附图9)。在一个实施方式中，反应区域被包裹 在模压的塑料部分中。在这个实施方式中，试剂区域浸入检测试剂溶液，其在反应区域上干 燥。反应区域由可移动的多孔膜或垫片覆盖，其充当样品区域。样品(例如，唾液)被采集在 样品垫片上，然后迁移到邻近它的试剂区域。不同于通过透明窗口观察结果(如使用附图6 中的设备时)，样品垫片被取下和丢弃，露出试剂区域。查看结果并解释。本发明进一步提供了有盖的采集器设备(附图10)。附图10显示了有盖的检测设 备80。在一个实施方式中，检测设备包括把手81、样品采集区域82、盖子83和试剂区域84。 可以被干燥的试剂溶液浸入试剂区域84。在可选择的实施方式中，检测设备80包括把手 81、样品采集区域82和盖子83。可以被干燥的试剂溶液浸入样品采集区域82。在这个实施方式中，保护帽从试验设备上取下，样品采集垫片/棉拭插入受试者的口中。样品采集垫 片/棉拭与测试样品接触。然后从口腔中取出样品采集垫片/棉拭，重新盖上设备。在某 些实施方式中，样品采集垫片/棉拭已经浸透检测试剂，其可以任选地在样品采集垫片/棉 拭上干燥。在其他实施方式中，已经浸透可以任选地在试剂垫片上干燥的检测试剂的试剂 垫片被整合到保护帽中。在这个实施方式中，当设备被重新盖上时，这个动作使得样品采集 垫片/棉拭与试剂垫片接触。在任一实施方式中，在合适的时间之后，观察试剂垫片来确定 颜色改变的程度。制造方法和制造的设备。本发明包括制造用于测量含有牛理件流体的样品中硫醇 化合物的量的检测设备的方法。所述制造方法包括用如上所述的试剂溶液接触固体基底， 和干燥所述设备。本发明进一步包括通过如上所述的方法制造的、用于测量含有生理性流体的样品 中硫醇化合物的量的检测设备。牛理学样品中硫醇化合物的检测方法。本发明提供了检测受试者中的口臭、齿龈 炎和/或牙周炎的方法。所述方法涉及使采自受试者的口腔的生理性流体与如上所述的检 测设备之一接触来形成接触了生理学流体的设备，和检测所述接触了生理学流体的设备中 硫醇化合物的浓度水平。至少约40微摩尔的水平是口臭的指示，至少约80微摩尔的水平 是齿龈炎的指示，至少约160微摩尔的水平是牙周炎指示。在某些实施方式中，所述检测设 备能够检测低达10-20微摩尔的水平的硫醇化合物的存在。在某些实施方式中，所述生理性流体从受试者的口腔中取出，然后与检测设备接 触。在其他实施方式中，所述检测设备插入受试者的口腔，从而生理性流体与所述设备原位 地直接接触。例如，测试条被插入口腔中，反应性基质直接接触受试者的唾液。令人惊讶地， 发现的是，含有检测试剂的原型试剂溶液不刺激口腔，即使当口腔组织与含有DTNB的棉拭 直接接触时。在某些实施方式中，检测设备以“直接接触”方法来使用。在这种方法中，具有浸透 检测物的基质的设备与用户进行直接接触。例如，设备的检测区域是条的末端的简单的垫 片。在某些实施方式中，所述检测设备在“间接接触”方法中使用。在这种方法中，检测物浸 透的基质的设备不与用户进行直接接触。通过流体样品的扩散、或采集的样品基质的机械 运动，从而流体样品或采集的样品基质与检测物浸透的基质接触，来在一定时间进行接触。在某些实施方式中，检测通过比较(a)接触了生理学流体的设备和(b)标准物的 颜色强度或吸光度来进行。在某些实施方式中，检测通过眼睛进行。在其他实施方式中，检 测通过机器，例如通过分光光度计(例如，反射分光光度计)来进行。在某些实施方式中，检 测步骤提供了定量的或半定量的信号，其倾向于最小化人与人之间的主观性。在当前方法中测试的生理性流体是GCF、舌刮擦物、舌生物膜、龈线生物膜、唾液或 呼吸、或多种这些流体的组合。在本发明的方法的一个实施方式中，滤纸条通过用试剂溶液接触所述条来浸透试 剂混合物，容许过量的溶剂蒸发来形成浸透的测试条。然后由受试者吐出唾液到浸透的测 试条上。容许反应在浸透的测试条之中或之上进行。在固定的时间之后，通过比较浸透的 测试条的表面上产生的颜色和标准物例如分级的比色图表，来测定硫醇化合物的浓度。在一个实施方式中，测试棒在直接接触应用中使用。在这个实施方式中，使用在棒的一个末端含有多孔的垫片的测试棒，其中所述垫片浸透测试溶液。在某些实施方式中测 试溶液被干燥，容许过量的溶剂蒸发。垫片置于与样品(例如，唾液)直接接触中。一段时间 以后(例如，5-10秒)，检查垫片来确定颜色的发生或颜色的改变。在另一个实施方式中，测试条含有邻近于所述检测垫片的比较物(S卩，内部对照 物)。在一个实施方式中，未使用的测试条的反应性区域和比较物区域具有相同的颜色。当 测试条的这两个区域与样品接触时，它们起初从不使用的测试条变为不同的颜色(即，在被 样品水化之后它们都获得的颜色)。一段时间以后，反应性区域的颜色偏离比较物区域，强 度是硫醇化合物的浓度的指示(例如，在附图2A中示出的)。在另一个实施方式中，检测和比较物区域可以起初具有不同的颜色。在更高浓度 的硫醇下，反应性垫片变为逐渐更象比较物，并且可以超过截止强度(例如，在附图2B中示 出的)。在另一个直接接触方法实施方式中，条含有三个不同的区域显示了起始颜色的 比较物、显示截止(诊断)颜色的比较物和反应性区域(附图2C)。随着硫醇水平提高，反应 性区域颜色偏离起始(上部的)颜色并与比较物(下部)汇合。在这样的情况下，观察者或电 子设备比较各个区域，对于反应性区域(例如，中心垫片)是更像起始颜色(例如，上部垫片) 还是更像比较物颜色(例如，下部垫片)作出确定。在另一个直接接触方法实施方式中，条含有两个不同的区域反应性垫片(上部)， 以淡蓝色开始；在更高浓度的硫醇下变得逐渐地更绿(例如，如附图2D显示的)。显色可以 满足或超过颜色或比较物(垫片下方)。这类似于附图2B中显示的形式，除了检测和比较物 垫片的位置被调换。在某些实施方式中，使用不同的指示物颜色，和/或使用不同的形状(例如，附图 3A-3E)。测试试剂盒。本发明提供了对于硫醇化合物的检测有用的测试试剂盒。所述试剂 盒包括如上所述的试剂溶液和/或检测设备。现在将通过以下非限制性的进一步实施例来说明本发明。进一步的实施例1.试剂溶液如下配置 缓冲液(磷酸钠，USP)-100 mM, pH 7.0 DTNB, 100mg/L
甘油(USP)，按体积0.5% 木糖醇(食物/药物级别)，按重量计算4% 进一步的实施例2.试剂溶液如下配置 成分和量(对于IL溶液)
去离子水(DI H20 ；适合于摄食) 800 mL+适量到IL
磷酸氢二钠七水化物，USP 3. 093 g (3. 060-3. 120 g)
磷酸二氢钠，USP 1.015 g (1. 010-1. 020 g)
甘油，USP 5. 0 mL (4.9-5. 1 mL)
木糖醇，食物/药物级别 40. 0 g (39. 6-40. 4 g)
DTNB 0.100 g (0.099-0. 101 g)
70%异丙醇(或USP级别IPA，稀释到70%) 100 mL (任选的)试剂溶液然后利用PES滤器(0.2微米孔径大小)过滤。用50或100 mg DTNB/L溶液 制备的条发现对于白色垫片是合理地适合的，因为DTNB的水平在干燥时给垫片赋予了即 使有也很小的颜色。进一步的实施例3.本领域已知的是硫醇化合物在与腐坏的肉相关的流体中积 累。因而，根据本发明的制品对于检测与腐坏的肉相关的提高的硫醇水平是有用的。进一步的实施例4.本领域已知的是硫醇化合物在与降解的墙板产品相关的流体 中积累，墙板产品含有硫酸钙并经历硫酸盐还原细菌的降解。因而，根据本发明的制品对于 检测与降解的墙板产品相关的提高的硫醇水平是有用的。进一步的实施例5.在下文的内容中公开了本发明的各种进一步的方面，其中硫 醇检测试剂包含根据本发明的方面7的检测试剂。检测/估计溶解的口腔硫醇的快速方法
目的口腔的口臭和牙周疾病经常涉及挥发性硫化合物(VSC)、主要是硫化氢和甲 硫醇的微生物产生。历史上，工作集中于检测它们在呼出呼吸中的存在，而不是微生物的生 物膜内的存在。我们的目的是开发针对溶解的硫醇的测试条，其提供了快速可见的结果，易 于使用，对口腔组织没有刺激。方法我们筛选了各种材料在用硫醇检测化合物预处理之后提供对溶解的硫 醇的视觉上可辨别的反应的能力。通过用添加的硫醇攻击清洗液，光谱学地估计了干燥的 检测试剂从垫片浸出的倾向。原型测试条置入稳定性研究中以估计货架寿命。由独立的实 验室进行了刺激测试。最后，我们改变检测试剂的浓度，来确定是否可以达到不同的“截止” 结果颜色。结果鉴定了多孔的垫片材料，其具有良好的物理性质并且适合于硫醇检测试剂 和它的产色的产品。一旦干燥在垫片上，试剂显示了在再水化时浸出的很低倾向，维持了良 好的光谱反应，显示了随着时间的过去的合理的稳定性。当与标准的口腔护理产品比较时， 发现垫片处理试剂对于培养的齿龈组织细胞是非刺激性的。最后，通过提高或降低试剂浓 度(垫片中检测物的量)，我们发现我们可以操纵测试的平台期显色。结论我们的结果表明采用这种技术的测试条作为检测口臭和牙周疾病致病病 原体的辅助是有用的。这项努力中我们的一般方法是利用硫醇检测试剂("TDR")的性质和能力，来检测 与口腔恶臭和牙周疾病相关的溶解的硫化合物，和利用干燥的化学试剂形式来进行。在此 呈现了这种形式的某些设计方面和能力。背景
口腔恶臭(口臭)和慢性牙周疾病通常特征在于分别在舌背面或槽内、牙齿和牙龈组织 之间的细菌的存在。存在于这些舌和齿龈生物膜中的许多革兰氏阴性厌氧细菌，随着它们 代谢带有含硫氨基酸的蛋白质，具有从半胱氨酸和甲硫氨酸除去末端含硫基团的能力，分 别产生硫化氢和甲硫醇。
2权利要求
1.一种用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的制品，所述制 品包括(a)包含至少一种吸收材料的基质，所述基质能够吸收所述样品；和(b)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫醇化合物的浓度的信号。
2.权利要求1的制品，其中所述制品是测试条。
3.权利要求1或权利要求2的制品，其中所述流体的样品是生理性流体的样品。
4.权利要求3的制品，其中所述生理性流体是口腔流体。
5.权利要求4的制品，其中所述口腔流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生物膜和 /或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。
6.权利要求1到5的任一项的制品，其中所述至少一种吸收材料包括聚酰胺材料。
7.权利要求1到6的任一项的制品，其中所述检测试剂包括至少一种的5，5’- 二硫 代双-(2-硝基苯甲酸);5- (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯亚 甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N，- 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代 二苯胺；N, N，- 二(4-nitrocinnamalylidene) -4, 4，- 二硫代二苯胺。
8.权利要求7的制品，其中所述检测试剂是5，5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)。
9.权利要求1到8的任一项的制品，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分 与所述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述 样品的至少一部分接触之后约十分钟结束。
10.权利要求1到8的任一项的制品，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部分 与所述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述 样品的至少一部分接触之后约五分钟结束。
11.权利要求1到10的的任一项的制品，其中所述信号包括电磁信号。
12.权利要求11的制品，其中所述电磁信号包括可见信号。
13.权利要求12的制品，进一步包括比较物区域，所述比较物区域包含至少一个颜色 样片，相对于所述颜色样片来比较所述可见信号。
14.一种用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的方法，所述方法包括(a)提供单次使用的可丢弃的制品，其包含(i)包含至少一种吸收材料的基质，所述基 质能够吸收所述样品；和(ii) 一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫 醇化合物的浓度的信号；(b)使所述基质与所述样品接触；(c)观察由所述检测试剂的量提供的信号；(d)将所述检测试剂的量所提供的信号与一个或更多个参考值比较，参考值的每一个 是硫醇化合物的浓度的指示，从而测定所述样品中硫醇化合物的浓度。
15.权利要求14的方法，其中所述流体是生理性流体。
16.权利要求15的方法，其中所述生理性流体是口腔流体。
17.权利要求16的方法，其中所述口腔流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生物膜 和/或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。
18.权利要求14到17的任一项的方法，其中所述制品是测试条。
19.权利要求14到18的任一项的方法，其中所述至少一种吸收材料包括聚酰胺材料。
20.权利要求14到19的任一项的方法，其中所述检测试剂包括至少一种的5，5’- 二 硫代双-(2-硝基苯甲酸);5_ (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯 亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二( 3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代 二苯胺；N, N，- 二(4-nitrocinnamalylidene) -4, 4，- 二硫代二苯胺。
21.权利要求20的方法，其中所述检测试剂是5，5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)。
22.权利要求14到21的任一项的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部 分与所述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约十分钟结束。
23.权利要求14到21的任一项的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部 分与所述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约五分钟结束。
24.权利要求14到23的任一项的方法，其中所述信号包括电磁信号。
25.权利要求对的方法，其中所述电磁信号包括可见信号。
26.权利要求14到25的任一项的方法，其中所述一个或更多个参考值的每一个是作为 (a)颜色的样片和(b)硫醇化合物的浓度的配对的组合提供的。
27.权利要求14到沈的任一项的方法，其中所述观察和/或比较的步骤的至少一个是 由自动化的读取器进行的。
28.一种用于测定哺乳动物受试者患有特定疾病的风险的方法，所述方法包括(a)提供单次使用的可丢弃的制品，其包含(i)包含至少一种吸收材料的基质，所述基 质能够吸收所述样品；和(ii) 一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫 醇化合物的浓度的信号；(b)使所述基质与包含来自所述受试者的一种或更多种生理性流体的样品接触；(c)观察由所述检测试剂的量提供的信号；(d)将所述检测试剂的量提供的信号与一个或更多个参考值比较，所述参考值的每一 个是受试者患有特定疾病的风险的指示，从而确定所述受试者患有特定疾病的风险。
29.权利要求观的方法，其中所述流体是生理性流体。
30.权利要求四的方法，其中所述生理性流体是口腔流体。
31.权利要求30的方法，其中所述口腔流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生物膜 和/或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。
32.权利要求观到31的任一项的方法，其中所述制品是测试条。
33.权利要求观到32的任一项的方法，其中所述至少一种吸收材料包括聚酰胺材料。
34.权利要求观到33的任一项的方法，其中所述检测试剂包括至少一种的5，5’- 二 硫代双-(2-硝基苯甲酸);5-(2_氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’ - 二(4-硝基苯亚 甲基)-4，4，- 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代 二苯胺；N, N，- 二(4-nitrocinnamalylidene) -4, 4，- 二硫代二苯胺。
35.权利要求34的方法，其中所述检测试剂是5，5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)。
36.权利要求观到35的任一项的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部 分与所述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约十分钟结束。
37.权利要求观到35的任一项的方法，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一部 分与所述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与所 述样品的至少一部分接触之后约五分钟结束。
38.权利要求观到37的任一项的方法，其中所述信号包括电磁信号。
39.权利要求38的方法，其中所述电磁信号包括可见信号。
40.权利要求观到39的任一项的方法，其中所述一个或更多个参考值的每一个是作为 (a)颜色的样片和(b)受试者患有特定疾病的风险的配对的组合提供的。
41.权利要求28到40的任一项的方法，其中所述观察和/或比较的步骤的至少一个是 由自动化的读取器进行的。
42.权利要求观到41的任一项的方法，其中所述特定的疾病是牙周炎。
43.权利要求观到41的任一项的方法，其中所述特定的疾病是齿龈炎。
44.权利要求观到41的任一项的方法，其中所述特定的疾病是口臭。
45.权利要求观到41的任一项的方法，其中所述特定的疾病是心血管疾病。
46.权利要求观到41的任一项的方法，其中所述特定的疾病是II型糖尿病。
47.权利要求观到41的任一项的方法，其中所述特定的疾病是早产。
48.一种试剂盒，包括(a)至少一个用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的 制品，所述制品包括(i)包含至少一种吸收材料的第一基质，所述基质能够吸收所述样品；和(ii)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫醇化合物的浓度的可 见信号；(b)比较物，其上印刷和/或固定了 (i)至少一个颜色样片，相对所述颜色样片来比较所述可见信号；和(ii)与每个颜色样片相联系的，表明与所述颜色样片相关的硫醇化合物的相对浓度的 字母数字标识符；(c)任选地，适合于含有所述制品和所述比较物的包装；(d)任选地，所述制品和所述比较物的使用说明书。
49.一种用于测定来自哺乳动物受试者的流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的测试条，所述测试条包括(a)包含至少一种吸收材料的基质，所述基质能够吸收所述样品；和(b)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述样品中硫醇化合物的浓度的信号。
50.权利要求49的测试条，其中所述流体包括唾液和/或龈沟液和/或龈线生物膜和 /或舌生物膜和/或舌刮擦物和/或呼吸。
51.权利要求49或50的的测试条，其中所述检测试剂包括至少一种的5，5’- 二硫代 双-(2-硝基苯甲酸)；5_ (2-氨乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸；N，N’-二(4-硝基苯亚 甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N，- 二(3-硝基苯亚甲基)-4，4’ - 二硫代二苯胺；N, N’ - 二 (2-硝基苯亚甲基)-4，4 ’ - 二硫代二苯胺；N，N’ - 二(2，4- 二硝基苯亚甲基)-4，4 ’ - 二硫 代二苯胺；N，N’ -二(4-nitrocinnamalylidene) -4,4，- 二硫代二苯胺。
52.权利要求51的测试条，其中所述检测试剂是5，5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)。
53.权利要求49到52的任一项的测试条，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一 部分与所述样品的至少一部分接触之后约一秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与 所述样品的至少一部分接触之后约十分钟结束。
54.权利要求49到52的任一项的测试条，其中所述时间在所述检测试剂的量的至少一 部分与所述样品的至少一部分接触之后约五秒开始，在所述检测试剂的量的至少一部分与 所述样品的至少一部分接触之后约五分钟结束。
55.权利要求49到M的的任一项的测试条，其中所述信号包括电磁信号。
56.权利要求55的测试条，其中所述电磁信号包括可见信号。
57.一种用于测定哺乳动物受试者患有特定疾病的风险的单次使用的可丢弃的测试 条，所述测试条包括(a)包含至少一种吸收材料的基质，所述基质能够吸收所述样品；和(b)一定量的检测试剂，在所述检测试剂的量的至少一部分与所述样品的至少一部分 接触之后的时间期间，所述检测试剂的量能够提供表明所述受试者患有特定疾病的风险的 信号，和其中(i)所述检测试剂包括以下的至少一种5，5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸);5_(2-氨 乙基)-二硫代-2-硝基苯甲酸，N，N’-二(4-硝基苯亚甲基)-4，4 ’_ 二硫代二苯胺； N, N’ -二(3-硝基苯亚甲基)-4,4 ’- 二硫代二苯胺；N，N’ -二(2-硝基苯亚甲基)-4，4 ’_ 二硫代二苯胺；N，N’-二(2，4-二硝基苯亚甲基)-4，4 ’_ 二硫代二苯胺；N，N’-二 (4-nitrocinnamalylidene) -4, 4，- 二硫代二苯胺；禾口(ii)所述特定疾病是以下至少一种牙周炎、齿龈炎、口臭、心血管疾病、II型糖尿病、 早产。
58.权利要求57的测试条，其中所述检测试剂包含5，5’- 二硫代双-(2-硝基苯甲酸)。
59.权利要求57或58的测试条，其中所述特定疾病是牙周炎。
60.权利要求57或58的测试条，其中所述特定疾病是齿龈炎。
61.权利要求57或58的测试条，其中所述特定疾病是口臭。
62.权利要求57或58的测试条，其中所述特定疾病是心血管疾病。
63.权利要求57或58的测试条，其中所述特定疾病是II型糖尿病。
64.权利要求57或58的测试条，其中所述特定疾病是早产。
65.一种试剂溶液，包含缓冲液、5，5 ’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和湿润剂。
66.权利要求65的试剂溶液，其中所述缓冲液是浓度约5mM到200 mM的磷酸钠缓冲液。
67.权利要求65的试剂溶液，其中所述缓冲液是浓度约20mM到150 mM的磷酸钠缓冲液。
68.权利要求65的试剂溶液，其中所述缓冲液是浓度约IOOmM的磷酸钠缓冲液。
69.权利要求65到68的任一项的试剂溶液，其中所述缓冲液的pH值是约6.5到8. 5。
70.权利要求65到68的任一项的试剂溶液，其中所述缓冲液的pH值是约6.5到7. 5。
71.权利要求65到68的任一项的试剂溶液，其中所述缓冲液的pH值是约7.0。
72.权利要求65到71的任一项的试剂溶液，其中所述DTNB以约10mg/L到150 mg/L 的浓度存在。
73.权利要求65到71的任一项的试剂溶液，其中所述DTNB以约80mg/L到120 mg/L 的浓度存在。
74.权利要求65到71的任一项的试剂溶液，其中所述DTNB以约100mg/L的浓度存在。
75.权利要求65到74的任一项的试剂溶液，其中所述湿润剂包括甘油、木糖醇、山梨 醇、甘油或丙二醇。
76.权利要求75的试剂溶液，其中所述湿润剂包括甘油。
77.权利要求76的试剂溶液，其中所述甘油以按体积约0.1%到5. 0%的浓度存在。
78.权利要求76的试剂溶液，其中所述甘油以按体积约0.5%的浓度存在。
79.权利要求75的试剂溶液，其中所述湿润剂包括木糖醇。
80.权利要求79的试剂溶液，其中所述木糖醇以按重量约21到10%的浓度存在。
81.权利要求79的试剂溶液，其中所述木糖醇以按重量约4%的浓度存在。
82.权利要求65到81的任一项的试剂溶液，进一步包含调味剂或香剂。
83.权利要求82的试剂溶液，其中所述调味剂或香剂是薄荷。
84.权利要求65到83的任一项的试剂溶液，进一步包含醇。
85.权利要求84的试剂溶液，其中所述醇是异丙醇或乙醇。
86.权利要求65到85的任一项的试剂溶液，进一步包含碱土金属或过渡金属。
87.权利要求86的试剂溶液，其中所述金属包括锰、镁或钴。
88.—种包含固体基底的检测设备，所述固体基底包含检测区域，其中所述检测区域浸 透权利要求65-87的任一项的试剂溶液。
89.权利要求88的检测设备，其中所述试剂溶液在所述固体基底上被干燥。
90.权利要求88或89的检测设备，其中所述固体基底是惰性纤维的垫片。
91.权利要求90的检测设备，其中所述纤维包括美国专利NO.7，290, 668中描述的至 少一种材料。
92.权利要求90的检测设备，其中所述纤维包含称为R-27378或R28445D#4345的 TRANS0RB 牌材料。
93.权利要求88到92的任一项的检测设备，其中所述固体基底是矩形的，或由一个或 多个模切的形状组成，一般最多大约8 mmX8 mm，以及约1. 0 mm的厚度。
94.权利要求88-93的任一项的检测设备，其中所述固体基底进一步包含一个或更多 个标准区域。
95.权利要求94的检测设备，其中所述一个或更多个标准区域包含预定颜色和强度的 比色标准。
96.一种制造硫醇化合物检测设备的方法，包括使固体基底与根据权利要求65-87的 任一项的试剂溶液接触，以及干燥所述设备，从而形成所述检测设备。
97.通过权利要求96的方法制造的检测设备。
98.一种检测受试者中的口臭的方法，包括使采自所述受试者的口腔的生理性流体与 权利要求88到95或权利要求97的任一项的检测设备接触来形成接触了生理性流体的设 备，以及检测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水平，其中至少约40微摩尔 的硫醇的水平是口臭的指示。
99.一种检测受试者中的齿龈炎的方法，包括使采自所述受试者的口腔的生理性流体 与权利要求88到95或权利要求97的任一项的检测设备接触来形成接触了生理性流体的 设备，以及检测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水平，其中至少约80微摩 尔的硫醇的水平是齿龈炎的指示。
100.—种检测受试者中的牙周疾病的方法，包括使采自所述受试者的口腔的生理性 流体与权利要求88到95或权利要求97的任一项的检测设备接触来形成接触了生理性流 体的设备，以及检测所述接触了生理性流体的设备中硫醇化合物浓度水平，其中至少约160 微摩尔的硫醇的水平是牙周炎的指示。
101.权利要求98、99或100的任一项的方法，其中所述检测是通过比较(a)接触了生 理性流体的设备与(b)标准物的颜色强度或吸光度来进行的。
102.权利要求101的方法，其中所述检测是通过眼睛进行的。
103.权利要求101的方法，其中所述检测是通过机械进行的。
104.权利要求101的方法，其中所述检测是通过分光光度计进行的。
105.权利要求101到104的任一项的方法，其中所述检测提供了定量或半定量的信号。
106.权利要求98到105的任一项的方法，其中所述生理性流体是GCF、舌刮擦物、舌生 物膜、龈线生物膜、唾液或呼吸。
107.一种对于口腔硫醇化合物的检测有用的测试试剂盒，包括权利要求65的试剂溶 液，以及权利要求88的检测设备或权利要求97的检测设备。
全文摘要
公开的是用于测定流体的样品中硫醇化合物的浓度的单次使用的可丢弃的制品，以及如何制造和使用所述制品的说明。
文档编号G01N33/68GK102124337SQ200980131587
公开日2011年7月13日 申请日期2009年6月15日 优先权日2008年6月13日
发明者伯盖斯-卡斯勒 A., E. 哈利 B. 申请人:Alt 生物科学有限责任公司