专利名称：一种环黄芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷一水合物原料药的检测方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体地说，涉及一种环黄芪醇-6-0-β-D-葡萄糖苷一水合物原料药的检测方法。
背景技术：
环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物(简称ΤΥ6052，英文名称6_0_β _D_gl ucopyranosyl-cycloastragenol monohydrate)的母核结构系环羊毛月旨烷型四环三萜类， C9、19环丙烷为其结构主要特征，C-3游离羟基呈β构型，C-6位α-羟基糖苷化。环黄芪醇(Cycloastragenol)类化合物属羊毛留烷型四环三萜类结构，是豆科黄芪属(Astragalus)植物中的指标性成分类群。环黄芪醇类三萜皂苷成分是常用中药黄芪 (Astragalus membranaceus Beg.)中的主要生物活性成分，具有调节免疫、强心、抗心脑缺血损伤、保肝、抗炎、抗病毒以及改善肾脏、胰岛损伤等诸多药理作用。然而，由于环黄芪醇-6-0-i3_D-葡萄糖苷一水合物在制备过程中可能引入杂质黄芪甲苷，因此，建立相应的含量测定方法和杂质检测方法，对控制环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物的质量有着重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使用高效液相-蒸发光散射检测器色谱法准确检测 ΤΥ6052及杂质黄芪甲苷含量的方法。实现本发明目的技术方案如下—种环黄芪醇-6-0- β -D-葡萄糖苷一水合物原料药的检测方法，该检测方法包括采用高效液相色谱法检测环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物和杂质黄芪甲苷的含量，其中高效液相色谱的条件包括色谱柱Inertsil0DS—3，5 μ m，250 X4. 6mm(I. D.)，流动相组成体积比甲醇水=80 20，流速1.OmL/min，柱温30°C，进样量20μ L，检测器蒸发光散射检测器。上述测定方法中，所述蒸发光散射检测器的条件包括蒸发温度(Evap):80°C,雾化温度(Neb):50°C,载气流速(氮气)1. 5L/min。上述测定方法中，测定杂质黄芪甲苷含量的进样样品的浓度是测定环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物含量进样样品浓度的10倍。
上述测定方法适用于各种需要进行TY6052及杂质黄芪甲苷的含量测定的相关制齐U，例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释和缓释制剂以及各种TY6052的复方制剂。采用本发明的TY6052及杂质的高效液相色谱分析法可以同时准确测定TY6052样品中TY6052及杂质黄芪甲甘的含量，为生产进程中的质量控制分析提供了简单可靠的方法。
图1为主成分TY6052与其杂质黄芪甲苷分离色谱图；图2为TY6052样品的色谱图；图3为黄芪甲苷样品的色谱图；图4为TY6052标准曲线；以及图5为黄芪甲苷标准曲线。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中使用的试剂与药品、实验仪器及色谱条件如下试剂与药品环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物(ΤΥ605》、黄芪甲苷对照品由天津药物研究院新药创新中心提供。甲醇(HPLC级)购自Fisher公司。实验中流动相和溶液用水均为纯净水。实验仪器及色谱条件岛津-6Α液相色谱仪，WaterS717自动进样器，蒸发光散射检测器PL-ELS2100。色谱分离系统的控制和记录由色谱工作站完成。色谱柱选用的是hertsil 0DS-3 (迪马科技有限公司)，5 μ m，250X4. 6mm(I. D.)。流动相甲醇水=80 20(体积比)；流速1. OmL/min ；柱温30°C;蒸发光散射检测器条件为蒸发温度(Evap) :80°C，雾化温度(Neb) :50°C，载气流速(氮气):1.5slm。实施例1色谱条件的选择1. 1检测器的选择环黄芪醇-6-0- β -D-葡萄糖苷一水合物原料药在205nm的波长处有最大吸收，考虑最常用的紫外检测器进行试验，结果表明检测灵敏度较低，不适用于有关物质(即杂质) 的检查。因此，为更好地检出杂质，更好地控制产品质量，我们选用了蒸发光散射检测器。1.2流动相的选择环黄芪醇-6-0-β-D-葡萄糖苷一水合物原料药在甲醇中微溶，在乙腈、水、 0. lmol/L盐酸溶液或0. lmol/L氢氧化钠溶液中几乎不溶。蒸发光散射检测器通常不适用于含不挥发盐组分的流动相。选择甲醇-水体系为流动相，分别选择了甲醇-水比例为 70 30,80 20,90 10(体积比)进行实验。经研究发现，甲醇-水比例为70 30 (体积比)时，主成分TY6052出峰时间太晚， 为30分钟以后，且峰型拖尾严重。甲醇-水比例为90 10(体积比)时，主成分TY6052与其杂质黄芪甲苷无法分离。甲醇-水比例为80 20(体积比)时，主成分TY6052与其杂质黄芪甲苷能够达到基线分离(如图1所示)。因此，最后确定流动相为体积比为80 20的甲醇-水。1. 3蒸发光散射检测器(ELSD)条件的选择分别选择了蒸发温度(Evap):90°C、80°C、70°C；雾化温度(Neb) :60°C、50°C、40°C； 载气流速(氮气)1. 2L/min、l. 4L/min、l. 5L/min、l. 6L/min 进行实验。经研究发现，蒸发温度降低至70°C时，基线波动较大，出现拖尾现象。蒸发温度升高至90°C时，主峰面积减小。故选择蒸发温度为80°C。雾化温度降低至40°C时，基线波动较大，主峰面积明显减小。雾化温度升高至 60°C时，出现拖尾现象。故选择雾化温度为50V。载气流速降低为1. 2L/min与1. 4L/min时，基线波动较大，拖尾现象严重，不利于检测。载气流速升高至1.6L/min时，主峰面积明显减小。故选择载气流速为1. 5L/min。因此，最后确定以蒸发温度(Evap) :80°C，雾化温度(Neb) :50°C，载气流速(氮气)1. 5L/min为ELSD检测条件。1. 4样品浓度为了兼顾主成份含量与杂质含量的测定，在测定杂质时，样品的浓度必须较大，足以使杂质能够出峰；测定主成份含量时，溶液浓度太大会导致主峰超线性而使定量不准，故将样品稀释10倍后测定，试验准确度令人满意。实施例2考察指标2. 1重复性试验精密称取TY6052和黄芪甲苷对照品，分别加流动相稀释制成每Iml中含TY6052 对照品5mg、黄芪甲苷对照品25 μ g的溶液，作为供试品溶液，分别量取TY6052样品溶液 (5mg/ml)以及黄芪甲苷溶液(0.025mg/ml)20yl注入液相色谱仪，重复进样6次，测得 TY6052峰面积和黄芪甲苷峰面积，计算RSD，结果见表1。其中，TY6052供试品溶液的色谱图如图2所示，黄芪甲苷供试品溶液的色谱图如图3所示。表1重复性试验结果
权利要求
1.一种环黄芪醇-6-0- β -D-葡萄糖苷一水合物原料药的检测方法，该检测方法包括采用高效液相色谱法检测环黄芪醇-6-0-β-D-葡萄糖苷一水合物和杂质黄芪甲苷的含量，其中高效液相色谱的条件包括色谱柱 Jnertsil 0DS-3, 5 μ m, 250 X 4. 6mm(I. D.),流动相组成体积比甲醇水=80 20，流速:1. OmL/min,柱温30°C，进样量20 μ L，检测器蒸发光散射检测器。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蒸发光散射检测器的条件包括 蒸发温度(Evap) :80°C,雾化温度(Neb) :50°C, 载气流速(氮气):1.5L/min0
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，测定杂质黄芪甲苷含量的进样样品的浓度是测定环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物含量进样样品浓度的10倍。
4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法适用于检测片剂、 胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂、缓释制剂或复方制剂中环黄芪醇-6-0-β -D-葡萄糖苷一水合物和杂质黄芪甲苷的含量。
全文摘要
本发明提供一种环黄芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷一水合物原料药的检测方法，该检测方法包括采用高效液相色谱法检测环黄芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷一水合物和杂质黄芪甲苷的含量，其中高效液相色谱的条件包括色谱柱Inertsil ODS-3，5μm，250×4.6mm(I.D.)，流动相组成体积比甲醇∶水＝80∶20，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量20μL，检测器蒸发光散射检测器。采用本发明的检测法可以同时准确测定TY6052样品中TY6052及杂质黄芪甲甘的含量，为生产进程中的质量控制分析提供了简单可靠的方法。
文档编号G01N30/74GK102478559SQ201010564220
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月29日 优先权日2010年11月29日
发明者蔡振华 申请人:天津药物研究院