专利名称：人载脂蛋白a1酶联免疫吸附测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于检测人载脂蛋白Al的试剂盒。
背景技术：
酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)的基础是抗 原或抗体的固相化及抗原或抗体特异性反应。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗 原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复 合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载 体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底 物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深 浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方 法达到很高的敏感度。抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。载脂蛋白Al(Apo-Al)是组成高密度脂蛋白HDL的主要蛋白质，临床研究证明 Apo-Al在稳定脂蛋白构型、结合和转运脂质、调节脂蛋白代谢关键酶的活性、识别脂蛋白受 体等方面具有重要作用。越来越多的研究表明Apo-Al的缺乏或异常是导致血脂及脂蛋白 代谢异常及动脉粥样硬化等疾病的重要原因。因此测定血浆或血清中的Apo-Al含量对探 讨这类疾病的发病机制，提供检测手段，判断风险度及了解预后具有重要意义。目前，Apo-Al的测定广泛采用免疫透射比浊法。此方法简便快速，自动化程度高， 但需使用全自动生化分析仪，该仪器价格昂贵，一次性投资大，且灵敏度和精密度均不够理
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实用新型内容本实用新型要解决的技术问题是采用以双抗体夹心为原理的酶联免疫吸附测定 法，提供一种人载脂蛋白Al酶联免疫吸附测定试剂盒，其操作简便，成本低，稳定性好，适 合于检测血清、血浆或其他生物液体中的Apo-Al的检测。为了解决上述技术问题，本实用新型所采用的技术方案是一种人载脂蛋白Al酶 联免疫吸附测定试剂盒，包括固相载体和包被层；固相载体为设置有多个微孔的微孔板； 包被层，包括小鼠抗人载脂蛋白Al单克隆抗体和牛血清白蛋白两层，附着在所述固相载体 微孔的表面。本实用新型由于在检测过程中使用了针对Apo-Al不同抗原表位的特异性抗 体，极大的提高了检测的精密度，同时由于引用了亲和素-生物素放大系统，灵敏度也得 到了有效的提高。经实验表明，本实用新型在检测人血清及血浆标本时其最低检测限为 1. 499ng/ml，而传统的全自动生化比浊的方法则为lug/ml，极大地提高了灵敏度，同时由于 在该试剂盒中使用了针对Apo-Al不同抗原位点的两种抗体，相对于免疫比浊方法中单一 抗体识别抗原，可以减小非特异性反应，提高检测结果的准确性，从而对临床上患者的脂质 代谢异常提供更为可靠的检测手段。另外，本实用新型不需投资大型自动生化分析仪，所需仪器设备容易获得，且操作方法简单。
图1为本实用新型一具体实施例酶标板结构示意图。1固相载体，2微孔。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使本领域的技术人员 可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。试剂盒包括固相载体和包被层。如图1所示，固相载体1采用的是96孔聚苯乙烯 试剂板(PS)，固相载体1上有微孔2，包被层附着在微孔2上。包被层包括小鼠抗人Apo-Al 单克隆抗体和牛血清白蛋白两层。该具体实施例的试剂盒制备方法是采用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)作为固相载 体；先将其置于紫外光下辐照2小时，使PS板活化；在试剂板微孔条上先包被一定浓度的 小鼠抗人Apo-Al单克隆抗体，4°C过夜，经洗板及牛血清白蛋白封闭处理后制成包被好的 酶标板，以备标本检测。依次以生物素化兔抗人载脂蛋白Al多克隆抗体，亲和素化辣根过 氧化物酶(HRP)作为检测试剂A及B，以3，3' ,5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作 为底物及终止液。本实用新型试剂盒各项指标检测结果1、标准曲线
权利要求一种人载脂蛋白A1酶联免疫吸附测定试剂盒，包括固相载体和包被层，其特征在于所述固相载体为设置有多个微孔的微孔板；所述包被层，包括小鼠抗人载脂蛋白A1单克隆抗体和牛血清白蛋白两层，附着在所述固相载体微孔的表面。
专利摘要本实用新型涉及检测人载脂蛋白A1的生物技术领域，具体提供了一种人载脂蛋白A1酶联免疫吸附测定试剂盒，包括固相载体和包被层；固相载体为设置有多个微孔的微孔板；包被层包括小鼠抗人载脂蛋白A1单克隆抗体和牛血清白蛋白两层，附着在固相载体的微孔表面。本实用新型操作简便，成本低，稳定性好，适合于检测血清、血浆或其他生物液体中的载脂蛋白A1的检测。
文档编号G01N33/68GK201707337SQ20102022738
公开日2011年1月12日 申请日期2010年6月17日 优先权日2010年6月17日
发明者丛旭霞, 何峰容, 李华渊, 汪景, 章秀波, 童晓玲, 马云芳 申请人:武汉优尔生科技股份有限公司