专利名称：分析装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用质量分析来分析血液等生物体样品的分析装置，并特别涉及一种具有进行固相提取等前处理的前处理装置的分析装置。
背景技术：
在临床检查中普及的检查方法之一是免疫法。免疫法，应用可特异性识别样品中测定对象成分的抗体(抗原)，例如，使用抗体(第一抗体)捕捉液体中的测定对象成分， 然后利用选择性捕捉该第一抗体的第二抗体进行检测。此时的检测，为了实现高感度化，对第二抗体添加标记物。标记物，例如有时为荧光物质，有时为酶化学发光所需的物质等。由于免疫法是能够简便地以高感度进行检测的技术，因此适合于检测物中微量成分的定量测定。另一方面，在免疫法中，交叉反应性很成问题。交叉反应性是第一抗体不仅捕捉了原本所要识别的测定对象成分，而且还捕捉了例如测定对象成分代谢物这种具有类似结构的分子的现象。这种情况意味着定量结果高于真实值，无法准确地定量测定对象成分。特别是在低分子化合物时，存在有交叉反应性显著增加的倾向，其原因之一是由于在制作抗体时， 需要通过对测定对象成分添加载体蛋白质而使其高分子化，因此只能在该添加位置以外的部位上可以形成表位，从而导致无法根据位置来识别与代谢物的结构差异。为了抑制该交叉反应，要求制作一种可以识别各种类似结构分子差异的第一抗体，然而制作是困难的，同时还需要耗费成本和人力，因此效率不高。相对于免疫法，质量分析法是基于测定对象成分的质量来进行测定的，因此它是一种能够识别例如代谢物等类似结构分子的测定技术。特别是MS/MS分析和MSn分析方法， 是通过将测定对象成分进行片段信号化，从而能够对类似结构成分彼此进行高精度识别的技术。这种质量分析法与免疫法相比，其选择性和准确性优异，因此将其应用于临床的趋势不断扩大。例如，在专利文献1中，以滤纸血为检测物，通过液/液提取来提取测定对象成分， 然后用质谱仪测定，由此定量丙氨酸或缬氨酸的氨基酸或酰基肉碱类，进行检查生物体内对象物质的代谢反应程度的代谢异常筛选。MS方式是使用选择性高的三重四极杆质谱仪的 MRM(Multiple Reaction Monitoring，多反应监测)方式。MRM是在第一段的四重极中仅通过前体信号，并使该信号在接下来的碰撞室中分裂，然后在第二段的四重极中仅对生成的化合物监控特异性产品信号的方法。该方法能够由化合物的特异性质量信息进行鉴定。此外，利用该质量信息，还能够通过质量数从实际试料的混杂成分中分离测定对象成分。定量方法，如以往所述，首先以几种浓度分析标准物质。然后，相对于来自该标准物质的m/z (质量/电荷)的信号，取得信号强度的时间变化(质量色谱图)，并求出质量色谱图的峰面积。 由该面积与标准物质浓度的关系，制作校准曲线。接着，分析浓度不明确的同一物质，求出质量色谱图的峰面积。然后，基于制作出的校准曲线，确定对应于质量色谱图的峰面积的物质浓度。测定整体的校正使用内部标准物质，内部标准物质对于每种测定对象成分采用稳定同位素标记物质。该内部标准物质，添加至对滤纸血进行液/液提取时的溶出溶液中。在非专利文献1中，向试样检测物中添加有机溶剂，进行蛋白质沉淀后，一边使用液相色谱 /质量分析装置(LC/MQ进行分离，一边将其导入质谱仪，同时检测在生物体中仅以低浓度含有的雌二醇和睾酮等12种激素类。内部标准物质使用每个测定对象成分的稳定同位素标记物质。该内部标准物质，添加在进行蛋白质沉淀时的缓冲溶液中。在专利文献2中，用 96孔的固相提取板处理血清或尿等生物体试料，并用质量分析仪进行测定，由此对氨基酸、 肉碱类、糖和免疫抑制剂等进行定量。内部标准物质，除了稳定同位素标记物质以外，还使用化学结构相似的拟化合物。该内部标准物质，添加在进行蛋白质沉淀时的缓冲溶液中。但是，质量分析法进行临床应用时，质量分析法所固有的离子抑制很成问题。质量分析法，需要将成分信号化，由于该信号化效率阻碍(离子抑制)控制定量的精度，因此通常使用可以产生相同离子抑制的稳定同位素标记物质。此外，质量分析法，能够对每个测定对象成分以几ms的间隔进行测定，因此其能够以高产率进行多成分的定量，但是其需要与该成分数相同数量的稳定同位素标记物质。然而，稳定同位素标记物质的合成不仅要花费成本，而且对于无法合成的成分来说，存在有无法制作稳定同位素标记物质的问题。如专利文献2所述，虽然有时也使用拟化合物作为内部标准物质，但这时，基质成分(杂质)的影响，在测定对象物质和内部标准物质间是不等价的，即使进行校正，也无法保证获得准确的数值。因此，在使用拟化合物作为内部标准物质时，为了分离基质成分和测定对象物质，进行例如LC或固相提取处理的前处理，以减轻基质的影响。此外，在非专利文献2中，通过柱后灌流向质谱仪中导入基质，同时通过灌流由其它通路输送测定对象成分，从而事先取得在哪一时间段基质效果大的数据，进而找出在该时间段不将测定对象成分导入质量分析的 LC条件。但是，这些方法，增加了时间、成本，并且操作也很复杂。此外，在将质量分析法应用于临床时，每个设备以及使用者的数据不能有变动。换句话说，提供一种使用尽可能简便的良好的质谱仪是很重要的。也就是说，希望一种在前处理工序、MS测定以及数据分析的各工序中，尽可能地排除手工操作，而进行全自动检查的质谱仪。这时，和离子抑制一样，前处理工序的稳定性以及回收率也对数据精度产生较大的影响。专利文献1 :US2006/0008922A1专利文献2 :US2007/0004044A1非专禾Ij文 ^ 1 :T. Guo, R. L. Taylor, R. J. Singh, S. J. Soldin, Simultaneous determination of 12 steroids by isotope dilution liquid chromatography-photospray ionization tandem mass spectrometry,Clinica. Chemica. Acta.(临床化学学报)，372，76-82，2006非专利文献 2 :Τ· Μ· Annesley, Ion Suppression in Mass Spectrometry, Clin. Chem. 49 :7，1041-1044，200
发明内容
发明要解决的课题在使用这种质谱仪进行定量分析时，使用内部标准法。内部标准物质，理想的是使用物性与测定对象物质相同的稳定同位素物质进行校正。在和分光光度计或UV检测器不同，使用质谱仪时，由基质中的杂质引起的离子抑制显著地对数据精度产生影响。因此，在没有使用稳定同位素物质，而是使用拟化合物作为内部标准物质时，用LC或GC等进行充分分离、精制，以使不会因基质中的杂质而产生离子抑制。此外，由于杂质的影响，除了离子抑制，试料的前处理也对数据精度产生影响，因此数据重现性比其它测定体系低。所以，在使用质谱仪进行定量分析时，以往的方法是对每次测定制作校准曲线，并使用内部标准法算出试料中的测定对象物质的浓度。因此，当测定对象物质使用稳定同位素物质时，成本方面存在问题。另一方面，当测定对象物质使用拟化合物时，需要耗费人力和时间进行分离、 精制，并且在分离溶剂的成本和产率方面存在问题。此外，由于每次测定都需要制作校准曲线，因此在试剂成本和产率方面存在问题。解决课题的手段本发明鉴于人力和时间、成本以及产率方面的问题，着眼于在质谱仪中基质中的杂质对数据精度产生影响这一点，设计了简易并且耐用的数据校正方法。具体来说，其特征在于，对于多成分的测定对象物质混在一起的样品，能够不使用各自的内部标准物质，而是使用一个以上拟化合物进行准确校正。并且，通过提供前处理装置、从前述前处理装置运送前处理试料的前处理试料传送装置109、能够全自动分析测定的质量分析部111和数据处理部112，从而能够同时平行处理多个检测物，并且得到检测结果，其中所述前处理装置具有使被检测液通过并选择性分离特定成分的固相提取试剂筒101、在内部保持分离剂的试剂筒保持容器102、能够保持多个收容部的具有履带的试剂筒传送装置103、能够向收容部内连续并且随机存取地负载压力的压力负载部107、从收容部内收容的分离剂中选择性接受提取溶液的提取溶液接受机构108。通过内部标准物质进行的校正，是预先向物性不同的基质中添加已知浓度的测定对象物质和内部标准物质，并在数据处理部112中存储基质的物性和感度的相关数据。此处所谓的感度，是指信号强度除以浓度所得的值。此外，对于前处理、例如固相提取的回收率，是存储基质物性中的测定对象物质回收率的数据。接着，测定添加了已知浓度的内部标准物质和测定对象物质的检测物，并由内部标准物质的信号强度的实测值算出基质的物性值。内部标准物质是在即将由前处理试料传送装置109传送至质量分析部111之前，通过旋转臂105添加到提取溶液接受机构108中。换句话说，在由质量分析部111对浓度已知的内部标准物质进行信号强度实测时，进入到数据处理部112中，由存储的数据算出基质的各物性值。接着，在由质量分析部111对测定对象物质进行实测并得到信号强度后，进入数据处理部112，由根据存储数据所算出的基质的各物性值和测定对象物质的信号强度算出测定对象物质的浓度。此处，检测物的物性参数，例如为磷脂浓度、粘度(浓度、稀释率)、 PH和总蛋白质量。最后，通过反映基质物性中的测定对象物质的前处理回收率，算出测定对象物质的浓度。这样，使用浓度已知的内部标准物质，可以由数据处理部112中存储的相关数据使用测定对象物质的浓度。通过使用该校正方法，可以不制作校准曲线，而由原理上仅仅一种内部标准物质来校正多个测定对象成分。发明效果根据本发明，可以简便并且准确地对以往方法中成问题的离子抑制和前处理、例如固相提取的回收率进行校正。对于多成分的测定对象物质混在一起的样品，即使不使用各个测定对象物质的内部标准物质，也可以校正。此外，不需要像以往方法那样，调制几种稳定同位素标记物质作为已知浓度的测定对象物质和内部标准物质，并制作校准曲线，因此在时间和成本上有效率。由此，能够省略操作复杂的前处理，因而可以使装置结构更加简单化，并且可以实现简便且高精度的临床检查装置。
图1是装置结构的概略图。
图2是测定流程的概略图。
图3是校正方法的概略图。
图4是相对于基质物性值的信号强度依存性(感度)的概念图。
图5是相对于基质物性值的信号强度依存性(感度)的概念图。
图6是测定流程的概略图。
图7是校正方法的概略图。
图8是数据处理部的输入值和输出值的概图。
图9是相对于基质物性值的信号强度依存性(感度)的概念图。
图10是相对于基质物性值的信号强度依存性(感度)的概念图。
具体实施例方式使用附图对本发明的实施例进行详细说明。但是，本发明并不仅仅限定于以下的实施例。实施例1使用质量分析的临床应用的目的是血药浓度监测(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)。作为TDM的一个例子，可以列举药物体内动态观察。在医疗现场对患者给药时，结合适用患者的症状分别进行给药计划，在保障有效性·安全性方面是很重要的。 即使服用同一剂量的药物，治疗效果也是因人而异，其原因是由于每个人药物体内动态的差别而导致血药浓度产生不同。因此，通过测定各个患者的血药浓度，进行在治疗范围中使剂量·用法最优化的技术，即TDM。例如，用于抑制对移植脏器的免疫排斥反应的免疫抑制剂是必须进行TDM的药剂。免疫抑制剂的治疗范围是从几ng/ml到几百ng/ml的低浓度。 此外，如果血药浓度超过治疗范围，则有时会引起高血压、血脂异常、高血糖、消化性溃疡、 肝和肾的功能损害等重大副作用。因此，为了减轻副作用，通常进行鸡尾酒疗法，将多种免疫抑制剂和类固醇联合给药。此外，由于免疫抑制剂很难化学合成，因此不存在构成内部标准物质的稳定同位素标记物质，所以通常使用拟化合物作为内部标准物质。本实施例是在前处理中使用固相提取，在检测部使用质量分析的自动分析装置的实例。对于装置结构，使用图1来说明。该装置由前处理装置、从前述前处理装置运送前处理试料的前处理试料传送装置109、将试料离子化并导入质量分析部的离子化部110、能够进行分析测定的质量分析部111和数据处理部112形成，并且所述前处理装置具有可以使被检测液通过并选择性分离特定成分的固相提取试剂筒101、在内部保持分离剂的试剂筒保持容器102、能够保持多个收容部的具有履带的试剂筒传送装置103、能够进行全血精制处理的全血处理部113、能够保管多个试剂的试剂槽104、能够将试剂从试剂槽传送到固相提取试剂筒的旋转臂105、能够将试剂从试剂槽传送到全血处理部的旋转臂106、能够向收容部内连续并且随机存取地负载压力的压力负载部107、从收容部内收容的分离剂中选择性接受提取溶液的提取溶液接受机构108。在本实施例中，质量分析部111使用三重四极杆质谱仪(Triple QMQ，除此之外，还可以使用单重四极杆质谱仪(QMQ、飞行时间质谱仪 (TOFMS)、离子阱质谱仪(ITMS)和傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS)。对于测定流程，使用图2来说明。向全血处理部113中分注施用了免疫抑制剂的 100 μ L患者检测物，并通过旋转臂106向全血处理部113的各个室中分注试剂槽104中存储的200 μ L包含0.2Μ硫酸锌的甲醇溶液。在全血处理装置113中搭载有超声波发生装置，通过施加1分钟左右的超声波，使红血球的细胞膜崩溃(溶血)。这时，通过在70°C 80°C的高温下施加超声波，溶血效率飞跃性提高，并且能够在10秒钟左右的短时间内进行处理。添加硫酸锌，具有除蛋白质的作用。接着，进行离心分离，通过旋转臂106将大约 200 μ L的上清液分注到固相提取试剂筒101中。免疫抑制剂具有血球转移性，必须进行该溶血操作。另一方面，对于例如抗颠痫药或抗菌药等不具有血球转移性的药剂，不需要进行溶血操作，它们是将分注到全血处理部113中的100 μ L患者检测物离心分离，通过旋转臂 106将作为上清液的血清或血浆成分分注到固相提取试剂筒101中。固相提取试剂筒101，在分注前述溶血操作后的处理液之前，进行活化和平衡化处理。具体来说，通过旋转臂105向固相提取试剂筒101中分注试剂槽104中存储的200 μ L 的100%甲醇溶液，并通过试剂筒传送装置103将其传送到存在的至少一处压力负载部107 的位置，通过施加压力，使液体通过试剂筒，从而进行填充剂的活化。同样，通过旋转臂105 向固相提取试剂筒101中分注试剂槽104中存储的200 μ L的100%水溶液，并通过试剂筒传送装置103将其传送到压力负载部107的位置，通过施加压力，使液体通过试剂筒，从而进行填充剂的平衡化。然后，通过旋转臂106将溶血操作后的处理液分注到固相提取试剂筒101中，并同样施加压力，由此使测定对象物质和内部标准物质被填充剂捕捉。接着，流通浸渍200 μ L的100%水溶液进行洗涤。最后，流通100 μ L的100%甲醇溶液，使固相提取后的处理液溶出到提取溶液接受机构108中。通过前处理试料传送装置109传送处理液， 并在离子化部110中离子化，从而将其导入到质量分析部111中，进行测定。在由前处理试料传送装置109传送之前，通过旋转臂105将试剂槽104中存储的内部标准物质分注到提取溶液接受机构108中，并添加到处理液中。此外，洗涤工序和溶出工序中所用的溶剂的组成，根据内部标准物质和测定对象物质的组合而变化。也就是说，为了在固相提取工序中尽可能地精制杂质，例如，有时在洗涤工序中使用40%的甲醇，在溶出工序中使用90%的甲醇。精制方法，除了固相提取外，还可以使用液/液提取、除蛋白质、超滤膜和抗体磁珠。此处，对校正方法进行说明。就在前处理中使用固相提取，并导入至MS的该自动分析装置而言，其前处理的回收率和离子抑制对数据再现性和精度有较大的影响。通常，通过将几种已知浓度的内部标准物质和测定对象物质添加到前处理前的检测物中，进行MS测定，从而制作横轴绘制测定对象物质浓度，纵轴绘制对应于内部标准物质和测定对象物质的m/z各信号的信号强度比的校准曲线。然后，实测患者检测物，由对应于内部标准物质和测定对象物质的m/z各信号的信号强度比以及制作出的校准曲线算出浓度。在该方法中，试剂材料成本、制作校准曲线的时间和操作复杂。此外，内部标准物质和测定对象物质的离子抑制必须是同等的，并且内部标准物质必须为测定对象物质的稳定同位素标记物质。对于本发明的校正方法，使用图3来说明。预先向物性不同的基质中添加已知浓度的测定对象物质和内部标准物质，并将横轴上的基质物性相关值，以及纵轴上的对应于基质物性值的测定对象物质和内部标准物质的m/z各信号的信号强度依存性(感度)的相关数据存储在数据处理部112中(图4)。此处所谓的感度，是m/z各信号所对应的信号强度除以浓度所得的值，基质物性相关值是磷脂浓度。磷脂有甘油磷脂类和鞘磷脂类，但本实施例中，是向基质中添加作为甘油磷脂类的卵磷脂(磷脂酰胆碱， phosphatidylcholine)。作为其它磷脂，甘油磷脂可以考虑溶血卵磷脂和脑磷脂(磷脂酰乙醇胺，phosphatidyleethanolamine)，在甘油磷脂中可以考虑神经鞘磷脂。基质物性相关值，除此以外，还可以使用粘度、总蛋白质量和PH。具体来说，预先将以基质物性相关值、此处是作为磷脂的卵磷脂的浓度P为变量的测定对象物质和内部标准物质的感度函数Stl (ρ)、 Sis(P)存储到数据处理部112中。当以质量分析部111中实测的测定对象物质和内部标准物质的信号强度为Io、IIS，以测定对象物质中所含的基质物性相关值为X，以内部标准物质的浓度为Cis，以所得的测定对象物质的浓度为Ctl时，标准化合物的感度Sis (X)由(数1)表不。Sis (X) = IIS/CIS……(1)由(数1)所求出的结果和数据库中预先存储的函数(P)，可以算出基质物性相关值X。接着，由基质物性相关值X和预先存储在数据处理部112中的函，求出测定对象物质的感度S0(X)。由和质量分析部111中实测的测定对象物质的信号强度Itl, 可以根据(数幻求出测定对象物质的浓度Q。C0 = I0/S0 (X)...... (2)通过以上操作，可以校正离子抑制。另外，就数据处理部112中存储的以基质物性相关值为变量的测定对象物质和内部标准物质的感度函数而言，作为提高校正精度的措施，还可以采用以认为对离子抑制有影响的多个基质物性相关值为变量的测定对象物质和内部标准物质的多元感度函数。接着，对前处理的回收率的校正进行说明。预先将以磷脂浓度P为变量的测定对象物质的回收率R(P)存储在数据处理部112中。此处所谓的回收率R(P)是前处理后向磷脂浓度成为P的基质中添加测定对象物质并进行MS测定的信号强度，除以向磷脂浓度为ρ 的基质中添加测定对象物质并进行MS测定的信号强度所得的值。前处理前的测定对象物质的浓度Ccitl可以由(数3)求出。基质物性相关值X，可以由(数1)所求出的结果和数据库中预先存储的函数Sis (ρ)算出。C00 = C0/R(X)……(3)另外，回收率R(p)，除了磷脂浓度外，还会因基质物性相关值，例如卵磷脂以外的其它磷脂、粘度、总蛋白质量和PH而变化。此外，由于还会因固相提取试剂筒101的填充剂种类而变化，因此这些情况下的回收率I^x(P)的函数都存储在数据处理部112中。使用这种在检测物中添加的浓度已知的内部标准物质，可以由数据处理部112中存储的相关数据使用测定对象物质的浓度。通过使用该校正方法，可以不制作校准曲线，而由原理上仅仅一种内部标准物质来校正多个测定对象成分。实施例2对于校正方法，一边通过实时实测基质物性不同的物质，一边对实施校正反馈的方法进行说明。装置结构和测定流程与实施例相同。对于和实施例1不同的校正方法进行说明。在实施例1中，向物性不同的基质中添加已知浓度的测定对象物质和内部标准物质， 并将横轴上的基质物性相关值，以及纵轴上的对应于基质物性相关值的测定对象物质和内部标准物质的m/z各信号的信号强度依存性(感度)的相关数据存储在数据处理部112中， 由添加在检测物中的已知浓度的内部标准物质在质量分析部111中的实测信号强度求出基质物性相关值。接着，由测定对象物质的实测信号强度和基质物性相关值求出测定对象物质的浓度。然后，由以预先存储在数据处理部112中的基质物性相关值为变量的前处理工序中的测定对象物质的回收率，求出前处理工序前的测定对象物质的浓度。在实施例2中，预先将测定对象物质相对于基质物性物质的m/z信号强度的m/z 各信号所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据和前处理工序中测定对象物质的回收率存储在数据处理部112中。在本实施例中，将以作为与基质物性相关的物质的卵磷脂的信号强度为变量的信号强度依存性(感度)和回收率存储在数据处理部112中(图8)， 并由质量分析部111以几msec 几百msec的间隔交替实测基质物性相关物质和测定对象物质。例如，当测定对象物质为免疫抑制剂的他克莫司时，质量分析部111使用三重四极杆质谱仪，因此m/z的值设定为他克莫司Oll Q3 = 821.5/768. 5)、卵磷脂Oll Q3 = 787/184)，并且离子化是通过正离子进行实测。然后，由基质中的卵磷脂的信号强度算出他克莫司的感度。然后，由他克莫司的实测信号强度算出他克莫司的浓度。如此所述，由基质中对离子抑制有影响的物质(此处为卵磷脂)和测定对象物质(此处为他克莫司)的信号强度以及存储在数据处理部112中的相关数据算出测定对象物质的浓度。通过使用该方法，在理论上即使不使用内部标准物质，也可以进行离子抑制的校正，此外，不需要对每次测定制作校准曲线，可以很容易地进行校正。实施例3对添加2种内部标准物质，并更准确地算出测定对象物质浓度的方法进行说明。2 种内部标准物质使用具有相同离子化效率的物质。通过使用2种离子化效率相同的内部标准物质，可以算出前处理部的实测回收率，并且通过把握其与数据库中存储的值的差异，可以把握前处理部的异常。对于测定流程，使用图6对与实施例1不同的地方，也就是说第一内部标准物质和第二内部标准无阻的添加方法进行说明。首先，在全血处理部113中存储由采血管分注的100 μ L患者检测物，并通过旋转臂106向全血处理部113的各个室中分注试剂槽104中存储的10 μ L第一内部标准物质。第二内部标准物质，如实施例1所述，在由前处理试料传送装置109传送前处理后的溶液之前，通过旋转臂105将试剂槽104中存储的内部标准物质分注到提取溶液接受机构108中，并添加到处理液中。其它工序和实施例 1相同。另外，第一内部标准物质，还可以考虑预先添加到在由患者采取检测物时所用的采血管中。这时，需要为每个内部标准物质准备采血管。对于校正方法，使用图7来说明。预先向物性不同的基质中添加已知浓度的第一内部标准物质、第二内部标准物质和测定对象物质，并将横轴上的基质物性相关值，以及纵轴上的测定对象物质和内部标准物质相对于基质物性相关值的m/z各信号所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据存储在数据处理部112中。此处所谓的感度，是m/z各信号所对应的信号强度除以浓度所得的值，基质物性相关值是磷脂浓度。基质物性相关值，除此以外，还可以使用粘度、总蛋白质量和PH。具体来说，预先将以磷脂浓度ρ为变量的第一内部标准物质、第二内部标准物质和测定对象物质的感度函数S1(P)、感度函数和感度函数存储到数据处理部112中。接着，向所含磷脂浓度未知的基质成分(实际试料)中添加已知浓度的第一内部标准物质和第二内部标准物质，并且在以由质量分析部111所实测的第一内部标准物质、 第二内部标准物质和测定对象物质的信号强度为I” I2和Itl,以基质物性相关值为X，以相同浓度的已知的第一内部标准物质和第二内部标准物质的浓度为Cp C2和Ctl时，第二内部标准物质感度由(数1’)表示。由于第一内部标准物质和第二内部标准物质具有相同的离子化效率，因此m/z所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据也相同(数2’)。S2 (X) = I2Zc2......(1，)S2(p) = S1 (ρ)……(2')接着，预先将以第一内部标准物质和测定对象物质的磷脂浓度ρ为变量的测定对象物质的回收率礼化)和Rtl(P)存储在数据处理部112中。此处所谓的回收率R1 (ρ)和Rtl(ρ) 是前处理后向磷脂浓度成为P的基质中添加内部标准物质和测定对象物质并进行MS测定的信号强度，除以向磷脂浓度为P的基质中添加第一内部标准物质和测定对象物质并进行 MS测定的信号强度所得的值。由(数1’)所求出的结果和数据库中预先存储的函数&(ρ)， 可以算出基质物性相关值X。接着，由基质物性相关值X和预先存储在数据处理部112中的函数Stl(P)，求出测定对象物质的感度S0(X)。由S0(X)和质量分析部111实测的测定对象物质的信号强度Itl,可以根据(数3’)求出测定对象物质的浓度Q。C0 = I0/S0(X)……(3，)通过以上操作，可以校正离子抑制。通过质量分析部111所实测的第一内部标准物质的信号强度I1，是反映前处理的回收率和离子化效率的值，并且由于已知浓度C1和(数2’)以及感度函数& (P)中横轴为基质物性相关值，纵轴为相对于基质物性相关值的第一内部标准物质的m/z各信号所对应的信号强度依存性(感度)，因此对于前处理的回收率R1 (P)，(数4’)成立。VS1(P)An=R1(P)……(4')(4’ )的左项是实测值，右项是存储在数据处理部112中的值。但是，前处理工序在全血的溶血工序中由搅拌、超声波处理、离心分离和分注等复杂操作构成，因此有可能产生误差。也就是说，(数4’)不成立，而是会像(数4”)和(数4”’ )那样。I1ZS1(P)ZCl > R1(P)...... (4")I1ZS1(P)ZCl < R1(P)...... (4'")在这些情况下，通过预先设定相对于和数据处理部112中存储值的差异的阈值， 并选择“数据处理部112中存储的值”、“根据实测值进行的校正”以及“再检查”，可以更准确地算出测定对象物质的浓度(图8)。例如，预先在数据处理部112中存储算法，使得当实测值和数据处理部112中存储值的差异在士3%以内时，可以转移到“数据处理部112中存储的值”，当差异为士3 士 10%时，可以转移到“根据实测值进行校正”，当差异为士 10% 以上时，可以转移到“再检查”。具体来说，当差异在士 3%以内时，用数据处理部112中的存储值，也就是回收率Rtl (P)进行校正，并由(数5’)算出包含前处理工序的校正的测定对象成分浓度C,C00 = C0/R0(X)......(5，)当差异为士3 士 10%时，用实测值进行校正，并由(数5”)算出包含前处理工序的校正的测定对象成分浓度C,C00= (C0XR1(X)ViR0OO X (VS1(P)AnM……(5”)当差异为士 10%以上时，进行再检查。测定者可以通过面板操作来预先设定相对于和数据处理部112中存储值的差异的阈值。实施例4以下，对于用户向本自动分析装置所搭载的测定对象物质中，追加新的测定对象物质的方法进行说明。在临床现场时，给药设计根据每个患者的疾病、年龄、性别、症状发展程度和每种检查设备(地区、规模的大小)而有所不同，因此检查项目也不同。使用质谱仪 (MS)作为检测器的方法，与以往的免疫检测法对每种药剂需要专用试剂(抗体试剂)相比， 其通过m/z(质量/电荷)进行选择，因此在多项目测定中有优势。也就是说，能够灵活地应对测定对象物质的追加以及删减。特别是，本发明的校正方法，不需要像以往方法那样使用测定对象物质的稳定同位素标记物质作为内部标准物质，并且不需要对每次检查制作校准曲线，因此容易进行测定对象物质的追加以及删减。相对于基质各物性值的多个测定对象物质和至少一个内部标准物质的m/z各信号所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据以及相对于上述基质的测定对象物质的回收率存储在数据处理部201中，由测定对象物质和至少一个内部标准物质的信号强度，可以算出测定对象物质的浓度。当追加新的测定对象物质时，通过向已经登记在数据处理部201中的内部标准物质和测定对象物质的信息中，登记相对于基质各物性值的新追加的测定对象物质的m/z各信号所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据、相对于上述基质的新追加的测定对象物质的回收率以及新追加的测定对象物质的m/z这3种信息，可以进行测定对象物质的追加。从原理上来说，可以追加多个测定对象物质。这3种信息，可以通过在质量分析部202中自动测定而得到。预先在质量分析部202中对测定对象，具体来说是新追加的测定对象物质进行灌流测定，取得m/z 的数据。接着，在数据处理部201的屏幕上将测定对象物质的m/z输入到m/z输入部204 中，一边点击自动演算按钮205，改变参数，一边在质量分析部111中进行实测，基于该数据在数据处理部112中算出进行测定对象物质相关质量分析的必要条件(离子化条件和解裂电压等)，然后，在输出部206中输出相对于基质各物性值的新追加的测定对象物质的m/z 各信号所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据，并且算出相对于上述基质的新追加的测定对象物质的回收率，在输出部207中输出。该工序中所得到的全部信息(各时间检测到的全部m/z及其m/z信号强度数据)被保存，并且可以随时输出。也就是说，在产生某种检查不当时，可以重新检查设定条件的数据，并且修正该条件，从而减少了再次进行条件设定的时间、成本、人力的损耗。如上所述进行新的测定对象物质的追加，在原理上，对于任意的内部标准物质，都能够自动地追加多个测定对象物质。符号说明101固相提取试剂筒102试剂筒保持容器103试剂筒传送装置104试剂槽105、106 旋转臂
107压力负载部
108提取溶液接受机构
109前处理试料传送装置
110离子化部
111质量分析部
112数据处理部
113全血处理部
权利要求
1.一种分析装置，其特征在于，具有包含固相提取机构的前处理装置，以及在将用该前处理装置前处理后的样品离子化后进行质量分析的质量分析装置，并且该分析装置还具有存储前述样品中阻碍离子化的物质的浓度、和测定对象物质和内部标准物质的信号强度依存性、及回收率的相关数据的存储部，并且该分析装置还具有基于前述存储部中存储的前述数据对前述样品以及前述内部标准物质的测定结果进行校正的校正部。
2.如权利要求1所述的分析装置，其特征在于，前述阻碍离子化的物质为磷脂。
3.如权利要求2所述的分析装置，其特征在于，前述磷脂是甘油磷脂或鞘磷脂的至少一种。
4.如权利要求3所述的分析装置，其特征在于，前述甘油磷脂是选自卵磷脂(磷脂酰胆碱)、溶血卵磷脂和脑磷脂(磷脂酰乙醇胺)中的至少一种。
5.如权利要求3所述的分析装置，其特征在于，前述鞘磷脂是神经鞘磷脂。
6.一种分析装置，其特征在于，具有包含固相提取机构的前处理装置，以及在将用该前处理装置前处理后的样品离子化后进行质量分析的质量分析装置，并且该分析装置还具有存储前述样品中的粘度、总蛋白质量、PH的至少一种、和测定对象物质和内部标准物质的信号强度依存性、及回收率的相关数据的存储部，并且该分析装置还具有基于前述存储部中存储的前述数据对前述样品以及前述内部标准物质的测定结果进行校正的校正部。
7.一种分析装置，其特征在于，具有前处理装置、从前述前处理装置运送前处理试料的前处理试料传送装置、将试料离子化并导入质量分析部的离子化部、能够进行分析测定的质量分析部和数据处理部，其中所述前处理装置具有固相提取试剂筒、在内部保持分离剂的试剂筒保持容器、能够保持多个收容部的具有履带的试剂筒传送装置、能够进行全血精制处理的全血处理部、能够保管多个试剂的试剂槽、能够将试剂从试剂槽传送到固相提取试剂筒的旋转臂、能够将试剂从试剂槽传送到全血处理部的旋转臂、能够向收容部内连续并且随机存取地负载压力的压力负载部、从收容部内收容的分离剂中选择性接受提取溶液的提取溶液接受机构，并且该分析装置使用至少一种内部标准物质，在上述数据处理部中，预先将相对于所含磷脂浓度不同的基质的测定对象物质和内部标准物质的m/z各信号所对应的信号强度依存性(感度)的相关数据、以及相对于上述基质的测定对象物质的回收率数据存储在数据处理部中，并由质量分析部中实测的测定对象物质和内部标准物质的信号强度，算出磷脂浓度和测定对象物质的浓度。
8.如权利要求7所述的分析装置，其特征在于，前述磷脂是选自卵磷脂(磷脂酰胆碱)、溶血卵磷脂和脑磷脂(磷脂酰乙醇胺)、神经鞘磷脂中的至少一种。
9.如权利要求7所述的分析装置，其特征在于，具有向传送至全血处理部的检测物中添加至少一种内部标准物质的第1内部标准物质添加机构，以及向分注至前述提取溶液接受机构的提取溶液中添加至少一种前述内部标准物质的第2内部标准物质添加机构。
10.如权利要求7所述的分析装置，其特征在于，前述内部标准物质是测定对象物质的稳定同位素标记物质或拟化合物。
11.如权利要求1所述的分析装置，其特征在于，前述前处理装置的固相提取机构是液/液提取机构。
12.如权利要求1所述的分析装置，其特征在于，前述前处理装置的固相提取机构是除蛋白质机构。
13.如权利要求1所述的分析装置，其特征在于，前述前处理装置的固相提取机构是超滤膜机构。
14.如权利要求1所述的分析装置，其特征在于，前述前处理装置的固相提取机构使用抗体磁珠。
15.如权利要求7所述的分析装置，其特征在于，前述全血处理部具有超声波发生机构、离心分离机构、搅拌机构和溶液分注机构，并且具有能够向前述固相提取试剂筒中分注处理液的机构。
16.如权利要求15所述的分析装置，其特征在于，前述超声波发生机构具有温度调节功能。
全文摘要
本发明提供一种使用多个拟化合物，并且不需要制作校准曲线就能够准确校正的技术。此外，还提供一种对于多成分的测定对象物质混在一起的样品，不使用各自的稳定同位素标记物质作为内部标准物质也能够校正的技术。一种分析装置，其具有包含固相提取机构的前处理装置，以及在将用该前处理装置前处理后的样品离子化后进行质量分析的质量分析装置，并且该分析装置还具有存储前述样品中阻碍离子化的物质的浓度、测定对象物质和内部标准物质的信号强度依存性、以及回收率相关数据的存储部，和基于前述存储部中存储的前述数据对前述样品以及前述内部标准物质的测定结果进行校正的校正部。
文档编号G01N27/62GK102326073SQ20108000837
公开日2012年1月18日 申请日期2010年1月18日 优先权日2009年3月5日
发明者和气泉, 桥本雄一郎, 神田胜弘, 野上真 申请人:株式会社日立高新技术