专利名称：用于检测对治疗性抗IgE抗体特异性的抗体的测定法及其在过敏反应中的用途的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及用于检测针对治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法和试剂，及用于评估过敏性风险的方法领域。
背景技术：
IgE是免疫球蛋白家族的一个成员，介导变态反应，诸如哮喘、食物过敏、I型超敏感性和熟悉的窦炎(影响广泛)。IgE由B细胞或B淋巴细胞分泌且在B细胞或B淋巴细胞的表面上表达。IgE经由其Fe区结合称作Fe ε RH的低亲和カIgE受体而结合B细胞(以及单核细胞、嗜曙红细胞和血小板)。在哺乳动物暴露于过敏原时，携帯表面结合的对抗原特异性的IgE抗体的B细胞“活化”并发展成IgE分泌性浆细胞。所得过敏原特异性IgE然后经由血流循环并经由也称作Fe ε RI的高亲和カ受体变得结合组织中肥大细胞和血液中嗜碱性细胞的表面。肥大细胞和嗜碱性细胞由此变得对过敏原敏化。随后对过敏原的暴露引起嗜碱性细胞和肥大细胞Fe ε RI的交联，导致这些细胞的脱粒和组胺、白三烯和血小板活化因子、嗜曙红细胞和嗜中性细胞趋化因子和细胞因子IL-3、IL-4、IL-5和GM-CSF (它们对临床超敏感性和过敏性负有责任)的释放。阻断IgE-受体复合物形成的拮抗剂作为用于预防变态反应的治疗剂是有用的。已经开发了几种治疗性抗IgE抗体。这些抗IgE抗体阻断IgE去结合在嗜碱性细胞和肥大细胞上找到的高亲和カ受体Fe ε RI，并由此阻止组胺和其它导致病理状况的过敏性因子的释放。已经报告了在接受抗IgE抗体,诸如omalizumab (例如Xolair 1)之后在患者中发生过敏性。过敏性是ー种急性系统性(多系统)且很严重的I型超敏感性变态反应。它是由肥大细胞和嗜碱性细胞脱粒引起的且由IgE介导。在2006年，57，269名哮喘患者中124人(约O. 2%)在omalizumab施用之后具有过敏性。虽然没有omalizumab所致致命过敏性的报告，但是一些病例是严重的，而且潜在危及生命的。因为这个原因，FDA推荐在omalizumab施用之后在内科医师的办公室中对接受omalizumab的患者监测一段时间，而且施用omalizumab的健康护理提供者应当准备好控制可能危及生命的过敏性。报告的病例(124)中百分之六十是在头两剂omalizumab之后。因此，可能该反应来自患者中预先存在的识别omalizumab上表位的抗体,而非药物施用后发展的抗药物反应。因为过敏性与属于IgE同种型的抗体有关，所以需要开发用于检测和量化患者中对治疗性抗IgE抗体特异性的IgE的量的測定法以评估过敏性风险(优选在此类抗IgE抗体处理之前)及鉴定高风险患者。通过述及完整收录本文中引用的所有參考文献，包括专利申请和出版物。
发明概述在ー个方面，本发明提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤a)使可能含有该抗药物抗体的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对IgE (诸如人IgE)的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对该IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并13)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体的相对结合亲和カ是治疗性抗IgE抗体的相对结合亲和カ的约7. 5%或更少、约5%或更少、约2. 5%或更少、约2. 0%或更少、约I. 5%或更少、约1%或更少、约O. 9%或更少、约O. 8%或更少、约O. 7%或更少、约O. 5%或更少、约 O. 25%或更少、约O. 1%或更少。在另ー个方面，本发明提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤a)使可能含有该抗药物抗体的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体具有至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对IgE (诸如人IgE)的效カ是该治疗性抗IgE抗体对该IgE的效カ的约10%或更少；并幻检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体的效カ是治疗性抗IgE抗体的效カ的约7. 5%或更少、约5%或更少、约2. 5%或更少、约2. 0%或更少、约I. 5%或更少、约1%或更少、约O. 9%或更少、约O. 8%或更少、约O. 7%或更少、约O. 5%或更少、约O. 25%或更少、约O. 1%或更少。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体包含治疗性抗IgE抗体的重和/或轻链的⑶R序列中的ー处、两处、三处、四处、五处、或六处氨基酸突变。在一些实施方案中，治疗性抗IgE抗体是omalizumab，而且突变型治疗性抗体包含omalizumab的轻链的第一⑶R中的ー处、两处、或三处氨基酸突变。在一些实施方案中，治疗性抗IgE抗体是omalizumab,而且突变型治疗性抗体包含omalizumab的轻链(SEQ ID NO :1)中第34位(Asp)处的氨基酸替代。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQ ID NO :2和轻链氨基酸序列SEQID NO :1，其中轻链中第30位(Asp)和第34位(Asp)或第32位(Asp)和第34位(Asp)处的氨基酸被替代。在ー些实施方案中，突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQ ID NO :2和轻链氨基酸序列SEQ IDNO :1，其中轻链中第30位、第32位、和第34位处的氨基酸D (Asp)被替代。在一些实施方案中，氨基酸Asp被Ala替代。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQ ID NO: 2和轻链氨基酸序列SEQ ID NO : I及轻链中第30位、第32位、和第34位处Asp变成Ala的氨基酸替代。在一些实施方案中，治疗性抗IgE抗体是omalizumab，而且突变型治疗性抗体包含omalizumab的重链的第三⑶R中的ー处、两处、或三处氨基酸突变。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQ ID NO 2和轻链氨基酸序列SEQID NO :1，其中重链(SEQ ID NO :2)中第 101 位(His)、第 105 位(His)和第 107 位(His)处的氨基酸被替代。在一些实施方案中，氨基酸His被Ala替代。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQ IDNO 2及重链中第101位、第105位、和第107位处His变成Ala的氨基酸替代和轻链氨基酸序列SEQ ID NO :1。在一些实施方案中，将突变型治疗性抗体固定化或捕捉至表面。在一些实施方案中，将突变型治疗性抗体直接固定化至表面。在一些实施方案中，将突变型治疗性抗体与标记物缀合并经由特异性结合该标记物的捕捉剂固定化或捕捉至表面，其中将该捕捉剂固定化至表面。在一些实施方案中，标记物是生物素且捕捉剂是链霉亲合素。在一些实施方案中，标记物是洋地黄毒苷(digoxigenin)且捕捉剂是抗洋地黄毒苷抗体。在一些实施方案中，使样品与固定化或捕捉至表面的突变型治疗性抗体接触。在一些实施方案中，在将突变型治疗性抗体捕捉至表面之前，使样品与突变型治疗性抗体接触。在一些实施方案中，在将样品与突变型治疗性抗体接触之后及在检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合之前，将突变型治疗性抗体捕捉至表面。在一些实施方案中，用检测剂来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，检测剂是结合IgE Fe区的Fe eRIa多肽。可以使用本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含Fe ε RI α亚基胞外域。在ー些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含与IgG恒定区融合的Fe ε RI α亚基胞外域。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过标记的。在一些实施方案中，标记物选自下组生物素，洋地黄毒 苷，钌，放射性标记物，光致发光标记物，化学发光标记物，突光标记物，电化学发光标记物，和酶标记物。在一些实施方案中，FceRIa多肽是经过生物素标记的，而且通过链霉亲合素-HRP来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过洋地黄毒苷标记的，而且通过HRP缀合的抗洋地黄毒苷抗体来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过钌标记的，而且通过电化学发光测定法来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中,样品含有人血清或血衆。在一些实施方案中，样品含有治疗性抗IgE抗体。在一些实施方案中，样品不含治疗性抗IgE抗体。在一些实施方案中，血清或血衆含有omalizumab。在其它实施方案中，血清或血衆不含omalizumab。在一些实施方案中，本发明的方法进ー步包括将抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合与參照比较的步骤。在一些实施方案中，參照是在突变型治疗性抗体和对照抗体之间检测到的结合。在一些实施方案中，对照抗体是以相似亲和カ结合治疗性抗IgE抗体和突变型治疗性抗体二者的阳性对照抗体。在一些实施方案中，阳性对照抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQID NO :8所示氨基酸序列。在一些实施方案中，阳性对照抗体进ー步包含来自人IgE的重链和轻链恒定区。在另ー个方面，本发明还提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含(a)相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体对IgE (诸如人IgE)的相对结合亲和力是该治疗性抗IgE抗体对该IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；和b)结合IgE Fe区的检测剂。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。在一些实施方案中，检测剂是Fe ε RI α多肽。试剂盒中可以包括本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含Fe ε RI α亚基胞外域。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含与IgG恒定区融合的Fe ε RI α亚基胞外域。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过标记的(诸如用生物素，洋地黄毒苷，钌，等标记的)。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含链霉亲合素-HRP或Amdex SA-HRP0在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含HRP缀合的抗洋地黄毒苷抗体，其用于检测洋地黄毒苷标记的Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中,试剂盒进ー步包含以相似亲和カ结合治疗性抗IgE抗体和突变型治疗性抗体二者的阳性对照抗体。在一些实施方案中，阳性对照抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ IDNO 7所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。在一些实施方案中，阳性对照抗体进ー步包含来自人IgE的重链和轻链恒定区。在另ー个方面，本发明还提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含a)相对于该治疗性抗 IgE抗体具有至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体对IgEa者如人IgE)的效カ是该治疗性抗IgE抗体对该IgE的效カ的约10%或更少；和b)结合IgE Fe区的检测剂。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。在一些实施方案中，检测剂是Fe ε RIa多肽。试剂盒中可以包括本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含Fe ε RI a亚基胞外域。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含与IgG恒定区融合的Fe ε RI α亚基胞外域。在一些实施方案中，Fee RI α多肽是经过标记的(诸如用生物素、洋地黄毒苷、钌、等标记的)。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含链霉亲合素-HRP或Amdex SA-HRP。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含HRP缀合的抗洋地黄毒苷抗体，其用于检测洋地黄毒苷标记的Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含以相似亲和カ结合治疗性抗IgE抗体和突变型治疗性抗体二者的阳性对照抗体。在一些实施方案中，阳性对照抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。在一些实施方案中，阳性对照抗体进ー步包含来自人IgE的重链和轻链恒定区。在另ー个方面，本发明还提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤(a)使可能含有该抗药物抗体的样品与(i)突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽接触，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；(b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并(c)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，在步骤(a)中使过量的Fe ε RI α多肽与样品接触。在ー些实施方案中,在步骤(a)中使过量至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、或至少约10倍的Fe ε RI α多肽与样品接触。可以使用本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽包含Fe ε RI α亚基胞外域。Fe ε RI α多肽可以标记或不标记。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体是经过标记的且通过特异性结合标记物的捕捉剂捕捉至表面。在一些实施方案中，标记物是生物素且用链霉亲合素包被表面。在一些实施方案中，通过经过标记的抗人IgE抗体来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，Fe ε RIa多肽是经过标记的且通过特异性结合Fe ε RI α多肽上的标记物的检测剂来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，FceRIa多肽是经过洋地黄毒苷标记的，而且通过HRP缀合的抗洋地黄毒苷抗体来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过钌标记的，而且通过电化学发光测定法来检测抗药物抗体对突变型治疗性抗体的结合。在另ー个方面，本发明还提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含(a)相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；和(b)结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。可以使用本文中描述的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，试剂盒中提供过量的Fe ε RI α多肽。在ー些实施方案中，Fe eRIa多肽是经过标记的。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含特异性结合Fe ε RI α多肽上的标记物的检测剂。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含抗人IgE抗体。在一些实施方案中,抗人IgE抗体是经过标记的。在另ー个方面，本发明还提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤(a)将可能含有该抗药物抗体的样品与过量的结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽一起预温育；(b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并(c)检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。在一些实施方案中，突变型治疗性抗体相对于治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变,而且突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少。在一些实施方案中，在步骤(a)中将样品将过量至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、或至少约10倍的Fe ε RI α多肽与样品一起预温育。可以使用本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，在步骤(b)中与样品一起温育之前或之后将治疗性抗IgE抗体或突变型治疗性抗体捕捉至表面。在一些实施方案中，在步骤(b)中与样品一起温育之前将治疗性抗IgE抗体或突变型治疗性抗体直接固定化至表面。在一些实施方案中，治疗性抗IgE抗体或突变型治疗性抗体是经过标记的,而且经由固定化的特异性结合标记物的捕捉剂捕捉至表面。在一些实施方案中，治疗性抗IgE抗体或突变型治疗性抗体是经过生物素标记的，而且捕捉至链霉亲合素包被的表面。在一些实施方案中，通过HRP缀合的抗人IgE抗体来检测抗药物抗体对治疗性抗体或突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，FceRIa多肽是经过标记的，而且通过检测标记物来检测抗药物抗体对治疗性抗IgE抗体或突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过洋地黄毒苷标记的，而且通过HRP缀合的抗洋地黄毒苷抗体来检测抗药物抗体对治疗性抗体或突变型治疗性抗体的结合。在一些实施方案中，Fe ε RI α多肽是经过钌标记的，而且通过电化学发光测定法来检测抗药物抗体对治疗性抗IgE抗体或突变型治疗性抗体的结合。
在另ー个方面，本发明还提供用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含(a)该治疗性抗IgE抗体或其突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和力相比降低；和(b)结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽。可以使用本文中提供的任何突变型治疗性抗体。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含抗人IgE抗体。在一些实施方案中，抗人IgE抗体是经过标记的。可以使用本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些实施方案中，Fe eRIa多肽是经过标记的。在一些实施方案中，试剂盒进ー步包含特异性结合Fe ε RI α多肽上的标记物的检测剂。在另ー个方面，本发明提供鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法，包括下述步骤(a)使来自该患者的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少一处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并(b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。 在另ー个方面，本发明提供鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法，包括下述步骤(a)使来自该患者的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少一处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的效カ的约10%或更少；并(b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明提供鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法，包括下述步骤(a)使来自患者的样品与(i)突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgE Fe区接触的Fe eRIa多肽，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；(b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并(c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明提供鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法，包括下述步骤(a)将来自患者的样品与过量的结合人IgE Fe区的Fee RIa多肽一起预温育；(b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并(c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明提供治疗具有IgE介导的病症的患者的方法，包括下述步骤(a)測定来自该患者的样品中针对治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的水平；(b)如果该样品中该抗药物抗体的水平没有指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的话，对该患者施用有效量的该治疗性抗IgE抗体。可以通过本文中提供的任何方法来测定抗药物抗体的水平。在另ー个方面，本发明提供相对于治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体在制备用于检测样品中结合该治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒中的用途，其中该检测包括下述步骤(a)使可能含有该抗药物抗体的样品与该突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并(b)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。在另ー个方面，本发明提供相对于治疗性 抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体在制备用于检测样品中结合该治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒中的用途，其中该检测包括下述步骤(a)使可能含有该抗药物抗体的样品与该突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的效カ的约10%或更少；并(b)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。在另ー个方面，本发明提供⑴突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽在制备用于检测样品中结合该治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒中的用途，其中该检测包括下述步骤(a)使可能含有该抗药物抗体的样品与(i)该突变型治疗性抗体和(ii)该Fe eRIa多肽接触，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；(b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并(c)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结
ム
ロ ο在另ー个方面，本发明提供(i)治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgE Fe区的Fe eRI α多肽在制备用于检测样品中结合该治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒中的用途，其中该检测包括下述步骤(a)将可能含有该抗药物抗体的样品与过量的该Fe ε RI α多肽一起预温育；(b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并(C)检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。在另ー个方面，本发明提供相对于治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体在制备用于鉴定具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的试剂盒中的用途，其中该鉴定包括下述步骤(a)使来自该患者的样品与该突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并(b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明提供相对于治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体在制备用于鉴定具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的试剂盒中的用途，其中该鉴定包括下述步骤(a)使来自该患者的样品与该突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的效カ的约10%或更少；并(b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明提供⑴突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽在制备用于鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的试剂盒中的用途，其中该鉴定包括下述步骤(a)使来自患者的样品与(i)该突变型治疗性抗体和(ii)该Fe eRIa多肽接触，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；(b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并(c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。 在另ー个方面，本发明提供⑴结合人IgE Fe区的Fe ε RI α多肽和(ii)治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体在制备用于鉴定具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的试剂盒中的用途，其中该鉴定包括下述步骤(a)将来自患者的样品与过量的该Fe ε RI α多肽一起预温育；(b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并(c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明还提供包含治疗性抗IgE抗体的组合物，其用于治疗具有IgE介导的病症的患者，其中已经測定来自该患者的样品中针对该治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的水平，而且该样品中该抗药物抗体的水平没有指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。在另ー个方面，本发明提供治疗性抗IgE抗体，其用于治疗具有IgE介导的病症的患者，其中已经測定来自该患者的样品中针对该治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的水平，而且该样品中该抗药物抗体的水平没有指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。要理解，可以组合本文中描述的各个实施方案的ー个、ー些、或所有特征以形成本发明的其它实施方案。本发明的这些和其它方面对本领域技术人员会变得显而易见。附图简述图IA显示了抗体E25的轻链氨基酸序列(SEQ ID NO :1)。图IB显示了抗体E25的重链氨基酸序列(SEQ ID NO 2)0 Chothia所定义的CDR区以粗体显示，而Kabat所定义的CDR区以方括号勾划出来。图2A是比较E25和E25-AAA突变型对纯化的人IgE的结合亲和力的ELISA测定法的图示。图2B是显示E25-AAA突变型对人IgE的结合相较于E25对人IgE的结合的图。E25-AAA突变型对IgE具有比E25小约100倍的亲和力。
图3是治疗性抗IgE抗体的效カ测定法的图示。图4A是显示AME2对E25之结合相较于AME2对E25-AAA突变型之结合的图。图4B是显示AMElO对E25之结合相较于AMElO对E25-AAA突变型之结合的图。图4C是显示AMEl对E25之结合相较于AMEl对E25-AAA突变型之结合的图。图4D是显示AME7对E25之结合相较于AME7对E25-AAA突变型之结合的图。图4E是显示AME9对E25之结合相较于AME9对E25-AAA突变型之结合的图。图4F是显示AME13对E25之结合相较于AME13对E25-AAA突变型之结合的图。图4G是显示AME4对E25之结合相较于AME4对E25-AAA突变型之结合的图。图4H是显示AME5对E25之结合相较于AME5对E25-AAA突变型之结合的图。图5显示了工程化改造为作为測定系统之阳性对照抗体的E25特异性IgE嵌合抗体。嵌合抗体的可变区来自特异性结合E25之Fab片段的抗体AME2,而嵌合抗体的恒定区来自人IgE抗体。 图6A是用于测试嵌合E25特异性IgE阳性对照抗体对E25抗体或E25-AAA突变型抗体之结合的測定系统的图示。图6B是显示嵌合的E25特异性IgE阳性对照抗体以相似亲和カ结合E25和25-AAA突变型的图。图7是使用E25-AAA突变型抗体检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之测定法的图示。图8显示用于测定使用E25-AAA突变型抗体检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之測定法之灵敏度的E25特异性IgE标准曲线。此图显示了利用图7中所述之测定形式的結果。图9显示了在浓度逐渐增加之E25存在下使用E25-AAA突变型抗体检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之测定法的药物耐受度。
图10是用半均质ELISA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之測定法的图示。图11是用半均质MSD-ECLA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之测定法的图示。图12是用“阻断”均质ELISA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之測定法的图示。图13是用“阻断”均质ELISA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之測定法的图示。图14是用均质MSD-ECLA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之测定法的图示。图15是用半均质ELISA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之測定法的图示。图15左分图显示了使用生物素标记的E25 (或生物素标记的E25突变型)的测定法。图15右分图显示了使用E25 (或E25突变型)的測定法。图16是用半均质ELISA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之測定法的图示。图16左分图显示了使用生物素标记的E25 (或生物素标记的E25突变型)的测定法。图16右分图显示了使用E25 (或E25突变型)的測定法。图17是用半均质MSD-ECLA形式检测属于IgE同种型的E25特异性抗体之测定法的图示。图17左分图显示了使用生物素标记的E25 (或生物素标记的E25突变型)的測定法。图17右分图显示了使用E25 (或E25突变型)的測定法。发明详述本发明提供可用于检测对治疗性抗IgE抗体(诸如omalizumab，XOLAIRて)特异性的IgE同种型抗药物抗体的方法和试剂。开发此类测定法的挑战包括区分内源IgE (Fe区可被抗IgE治疗性抗体结合的IgE)和对治疗性抗IgE抗体特异性的IgE的困难，因为内源IgE干扰对治疗性抗IgE抗体特异性的IgE的检测。本发明提供能区分内源IgE和对治疗性抗IgE抗体特异性的IgE，且特异性检测对治疗性抗IgE抗体特异性的IgE的方法和试齐 。Α.通用技术除非另有说明，本发明的实践会采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细 胞生物学、生物化学、和免疫学的常规技术，它们在本领域的技术范围之内。文献中完整解释了此类技术，诸如“Molecular Cloning:ALaboratory Manual”，第 2 版(Sambrooket al. , 1989) ; “Oligonucleotide Synthesis”(M. J. Gait, ed.，1984) ; “AnimalCell Culture” (R. I. Freshney, ed. , 1987) ; “Methods in Enzymology(AcademicPress, Inc. ) ; “Current Protocols in Molecular Biology(F. M. Ausubel etal. , eds. , 1987,及定期更新)；iiPCR: The Polymerase Chain Reaction”(Mullis etal. , eds. , 1994)。除非另有定义，本文中使用的技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员的共同理解相同的含义。Singleton et al. , Dictionary of Microbiology andMolecular Biology,第 2版，J. Wiley & Sons (New York, N. Y. 1994),及 March, AdvancedOrganic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure,第 4 版,John Wiley &Sons (New York, N. Y. 1992),给本领域技术人员提供了本申请中使用的许多术语的一般指导。B.定义如本文中使用的，“抗药物抗体”指如下的抗体，其中该抗体的可变区结合治疗性抗IgE抗体。例如,本文中描述的可变区结合治疗性抗体omalizumab的抗体(E25)是抗药物抗体。术语“抗体”以最广义使用，具体涵盖单克隆抗体(包括全长的单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性或功能。“抗体片段”包含全长抗体的一部分，通常是抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab' )2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。“Fab”片段包含轻链的可变域和恒定域及重链的可变域和第一恒定域(CH1)。F (ab’)2抗体片段包含ー对Fab片段，它们一般在它们羧基末端附近通过铰链半胱氨酸共价连接。还知道抗体片段的其它化学偶联形式。“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密、非共价联合的一个重链可变区和一个轻链可变区的ニ聚体组成。从这两个结构域的折叠中散发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，贡献出抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变区(或只包含对抗原特异性的三个CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同和/或结合相同表位，除了生产单克隆抗体的过程中可能产生的可能变体外，此类变体一般以极小量存在。此类单克隆抗体典型地包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一靶物结合多肽序列在内的过程得到的。例如，选择过程可以是从众多克隆诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的集合中选择独特克隆。应当理解，选定的靶物结合序列可进ー步改变，例如为了提高对靶物的亲和力、将靶物结合序列人源化、提高其在细胞培养物中的产量、降低其在体内的免疫原性、创建多特异性抗体等，而且包含改变后的靶物结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型地包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不 同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的単一决定簇。在它们的特异性以外，单克隆抗体制备物的优势在于它们一般未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，有待依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如 Kohler et al. , Nature 256:495(1975);Harlow et al. , Antibodies: A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,果 2 版,1988;Hammerling et al.,于:Monoclonal Antibodies and T-CelIHybridomas, 563-681, Elsevier, N. Y. , 1981)>重组DNA法(參见例如美国专利No. 4,816, 567)、噬菌体展示技术(參见例如Clackson etal. ,Nature 352:624-628 (1991);Marks et al.，J. Mol. Biol. 222:581-597(1991);Sidhuet al.，J. Mol. Biol. 338(2) :299-310(2004) ;Lee et al. , J. Mol. Biol. 340(5) :1073-1093(2004) ;Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 101 (34) : 12467-12472(2004);及Lee et al. , J. Immunol. Methods 284 (1-2) : 119-132 (2004))、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(參见例如 WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; W01991/10741; Jakobovits et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551(1993);Jakobovits et al. , Nature362:255-258 (1993);Bruggemann et al. , Year in Tmmuno. 7:33(1993);美国专利No. 5，545，806; 5, 569，825; 5, 591，669(都属于 GenPharm) ; 5, 545，807; WO 1997/17852;美国专利 No. 5，545，807; 5，545，806; 5, 569，825; 5, 625，126; 5, 633，425;及 5，661，016; Marks etal. , Bio/TechnologylO:779-783(1992);Lonberg et al. , Nature 368:856-859(1994);Morrison,Nature368:812-813(1994);Fishwild et al. , Nature Biotechnology 14:845-851 (1996);Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996);及 Lonberg andHuszar, Intern. Rev. Tmmunol · 13:65-93(1995)X单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体。“嵌合”抗体(免疫球蛋白)中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剰余部分与衍生自另一物种或属于另ー抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利No. 4，816，567;及 Morrison et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855(1984))。本文中所使用的人源化抗体是嵌合抗体的ー个子集。非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望特异性、亲和カ和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类动物的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰是为了进ー步改进抗体的性能诸如结合亲和力。一般而言，人源化抗体会包含至少ー个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR，尽管FR区可包含一处或多处提高结合亲和カ的氨基酸替代。FR中这些氨基酸替代的数目通常在重链中不超过6处，在轻链中不超过3处。人源化抗体任选还会包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节參见Jones et al. , Nature321:522-525 (1986);Riechmann et al. , Nature 332:323-329(1988);和 Presta,Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596(1992)。“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用用于生成人抗体的任何已知技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR:三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(LI、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多祥性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。參见例如Xu et al. , Immunity 13:37-45(2000);Johnson and Wu,于:Methods in MolecularBiology 248:1-25 (Lo, ed. , Human Press, Totowa, NJ, 2003) 事实上，仅由重链组成的天然存在骆驼(camelid)抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。參见例如Hamers-Casterman et al. , Nature 363:446-448(1993);Sheriff et al. , Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区(⑶R)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat et al. , Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD. (1991))。Chothia 改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J. Mol.Biol. 196:901-917(1987) )。AbM HVR 代表 Kabat HVR 与 Chothia 结构环之间的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触”HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每ー个的残基。
环 KabatAbMChothia 接融
LI L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 LI L50-L56 L50-L56 し50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
Hl H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat编号方式)
Hl H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia编号方式)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101HVR 可包括如下“延伸的 HVR”:VL 中的 24-36 或 24-34 (LI),46-56 或 50-56 (L2)和 89-97 或 89-96 (L3)及 VH 中的 26-35 (Hl)、50_65 或 49-65 (H2)和 93-102、94_102 或95-102 (H3)。对于这些定义中的每ー个，可变域残基是依照Kabat等，见上文编号的。“框架”或“FR”残基指可变域中除本文中所定义的HVR残基外的那些残基。术语“如Kabat中的可变域残基编号方式”或“如Kabat中的氨基酸位置编号方式”及其变化形式指Kabat等，见上文中用于抗体重链可变域或轻链可变域编辑的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可以包含较少的或另外的氨基酸，对应于可变域FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变域可以包含H2残基52后的单ー氨基酸插入(依照Kabat的残基52a)和重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat的残基82a、82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号可以通过将抗体序列与“标准” Kabat编号序列对比同源区来确定。Kabat编号系统一般在提及可变域中的残基(大约是轻链残基1-107和重链残基 1-113)时使用(例如 Kabat et al. , Sequences of Immunological Interest. 5thEd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)Χ‘ υ编号系统”或“EU索引”一般在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如Kabat etal.,见上文中报道的EU索引)。“Kabat中的EU索引”指人IgGlEU抗体的残基编号方式。除非本文中另有说明，提及抗体可变域中的残基编号指根据Kabat编号系统的残基编号方式。除非本文中另有说明，提及抗体恒定域中的残基编号指根据EU编号系统的残基编号方式(例如參见美国临时申请No. 60/640, 323，EU编号方式的图)。术语“Fe区”用于定义免疫球蛋白重链的C-端区域，其可以通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体而产生。Fe区可以是天然序列Fe区或变异Fe区。虽然免疫球蛋白重链Fe区的边界可以变化，但是人IgG重链Fe区通常定义为自Fe区的大约Cys226位置或大约Pro230位置的氨基酸残基至羧基末端的区段。免疫球蛋白的Fe区一般包含两个恒定域，即CH2结构域和CH3结构域，而且任选包含CH4结构域。“Fe区链”在本文中指Fe区的两条多肽链之一 O“结合”或“特异性结合”一般指两个分子之间(诸如抗体和ー种或多种靶物，抗IgE抗体和IgE，和抗药物抗体和药物之间)具有足够亲和カ的结合。优选地，抗体对无关分子的结合程度小于抗体对靶物的结合的约10%，如例如通过放射免疫測定法(RIA)测量的。在一些实施方案中，结合其靶物的抗体具有彡ΙμΜ、彡ΙΟΟηΜ、彡10nM、彡InM、或彡0. InM的解离常数(Kd)。
“结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单ー结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部单价相互作用总和的強度。除非另有说明，在用于本文吋，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间I:I相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和カ通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和カ可通过本领域知道的常用方法来測量，包括本文中所描述的那些。低亲和カ抗体通常缓慢的结合抗原且趋于容易解离，而高亲和カ抗体通常更快速的结合抗原且趋于保持更长时间的结合。本领域知道測量结合亲和力的多种方法，其中任ー种都可用于本发明的目的。下文描述了测量结合亲和力的具体的示例性和例示性实施方案。在一个实施方案中，依照本发明的“ Kd”或“ Kd值”是通过如下測定法所述使用Fab型式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来測量Fab对抗原的溶液结合亲和力(參见例如Chen, et al. , J Mol Biol 293:865-881(1999))。为了确定测定条件，用 50mM 碳酸钠(pH9. 6)中的 5 μ g/ml 捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被MICROTITER 多孔板(ThermoScientific)过夜，随后用PBS中的2% (w/v)牛血清清蛋白在室温(约23° C)封闭2-5小 时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的目的Fab混合(例如与 Presta et al. , Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)中抗 VEGF 抗体，Fab-12 的评估一致)。然后将目的Fab温育过夜；不过，温育可持续更长时间(例如约65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温温育(例如I小吋)。然后除去溶液，并用含O. l%Tween-20 的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔闪烁液(MICR0SCINT-20 ；Packard)，然后在T0PC0UNT 伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另ー实施方案，Kd或Kd值可以通过表面等离振子共振測定法使用BIACORE -2000 或BIACORE -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在 25。C 使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应単位(RU)測量。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-こ基-N’ -(3-ニ甲基氨基丙基)-碳化ニ亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIACORE, Inc.)。用IOmMこ酸钠pH 4. 8将抗原稀释至5 μ g/ml (约O. 2 μ M)，然后以5 μ I/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IMこ醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学測量，在25。C以约25 μ I/分钟的流速注入在含O. 05%TWEEN-20 表面活性剂的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (O. 78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIACORE Evaluation Software version 3· 2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(km)和解离速率(k0ff)o平衡解离常数(Kd)以比率kof f/kon计算。參见例如Chenet al. , J Mol Biol 293:865-881 (1999)。如果根据上文表面等离振子共振測定法，结合速率超过106M-1 s-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来測定，即根据分光计诸如配备了断、/I装Sc白勺分光光度>十(a stop-flow equipped spectrophometer； (Aviv Instruments；或8000系列SLM-AMINC0 分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25° C的突光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。
依照本发明的“结合速率，，(on-rate,rate of association, association rate)或“kon”也可如上所述使用BIACORE -2000 或BIACORE_ -3000 系统(BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)来測定。短语“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文时表示两个数值(例如，一个涉及本发明的抗体而另ー个涉及參照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员会认为在用所述数值(例如相对结合亲和カ值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为參照/比较值的函数，所述两个数值之间的差异例如小于约50%、小于约40%、小于约30%、小于约20%、和/或小于约10%。如本文中使用的，术语“样品”指自感兴趣受试者获得或衍生的组合物。样品包括但不限于来自个体的全血、血清、或血浆。“总IgE”指样品中存在的IgE的总量，包括游离的、未结合的IgE和与结合配偶复合的IgE。“游离IgE”指未与结合配偶结合的IgE。本文中使用的“受试者”、“个体”、或“患者”指哺乳动物，更优选人。哺乳动物包括但不限于人、灵长类动物、牲畜、运动用动物(例如马)、啮齿类动物、和宠物(例如犬和猫)。如本文中使用的，用于“帮助评估”的方法指帮助做出临床决策(例如过敏性风险)的方法，而且可以在确定性评估方面是或不是决定性的。如本文中使用的，“參照值”可以是绝对值；相对值；具有上和/或下限的值；值的范围；平均值；中值；均值；或与特定对照或基线值比较的值。术语“检测”以最广义使用来包括特定分子的定性和定量測量，本文中測量特定分析物分子诸如IgE或抗药物抗体。在ー个方面，利用本文所描述的检测方法仅仅来鉴定样品中感兴趣分析物分子的存在。在另ー个方面，可利用检测方法来量化样品中分析物分子的量。在又ー个方面，可利用所述方法来測定感兴趣分析物分子对靶分子的相对结合亲和力。术语“检测剂”和“检测试剂”可互換使用，指检测分析物分子的药剂，或是直接经由可连接至检测剂的标记物，诸如荧光、酶、放射性、或化学发光标记物，或是间接经由经过标记的结合配偶，诸如特异性结合检测剂的抗体或受体。检测剂的例子包括但不限于抗体、抗体片段、可溶性受体、受体片段、等等。“关联”或“联系”指以任何方式将第一分析或方案的性能和/或结果与第二分析或方案的性能和/或结果进行比较。例如，可以将第一分析或方案的结果用于实施第二分析或方案，和/或，可以使用第一分析或方案的结果来决定是否应当实施第二分析或方案。术语“測定表面”或“表面”表示如下的基片，在它上面可固定化捕捉剂供免疫测定法使用。合适的测定表面包括聚合物测定板、芯片、流动卡(fluidity card),磁珠、树脂、纤维素聚合物海绵、等等。术语“结合域”指多肽中结合另一分子的区。在Fe受体多肽或FcR的情况中，结合域可包含其多肽链(例如其α链)中负责结合免疫球蛋白或其它含有Fe区的分子的Fe区的部分。ー种有用的结合域是Fe受体α链多肽的胞外域(ECD)。如本文中描述的，Fe ε RIa 链的胞外域含有结合Ig，例如IgE Fe区的结合域。术语“捕捉剂”或“捕捉试剂”指能够结合和捕捉样品中靶分子或分析物分子的药齐U。典型地，捕捉剂或试剂是固定化的，例如在固体基片上，诸如微粒或珠、微量滴定板、柱树脂、芯片、流动卡、磁珠、纤维素聚合物海绵、等等。捕捉剂可以是抗原、可溶性受体、抗体、不同抗体的混合物、等等。“嵌合”多肽指如下的多肽，其中多肽序列的一部分衍生自一种物种，而至少一个其它部分对应于自一不同物种衍生的序列。术语“标记物”在用于本文时指与试剂诸如核酸探针、多肽或抗体直接或间接偶联或融合，以便于检测或捕捉它所偶联或融合的试剂的化合物或组合物。标记物可以是自身可检测的(例如放射性同位素、荧光、发光、化学发光、或电化学发光标记物)，结合另一分子后可检测的，或者在酶标记物的情况中，可催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。术语“靶分子”指分析物分子的特异性结合靶。靶分子可以是例如抗原，如果分析 物分子是抗体的话。靶分子可以是例如具有治疗活性的多肽或抗体。在一个实施方案中，靶分子是治疗性抗体，而分析物分子是结合该治疗性抗体的抗药物抗体。如本文中使用的，“分析物”和“分析物分子”指通过本发明的方法分析的分子，而且包括但不限于抗药物抗体。“治疗”或“处理”指试图改变所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括预防疾病的发生或复发、缓解症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、减缓疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态、及免除或改善预后。在有些实施方案中，本文中描述的治疗性抗体用于延迟疾病或病症的发生或减缓疾病或病症的进展。“有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的治疗或预防效果的量。治疗剂的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和重量及该抗体在个体中引发期望应答的能力等因素而变化。治疗有效量还指该治疗剂的治疗有益效果胜过任何有毒或有害后果的量。“预防有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的预防效果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病发作之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量会低于治疗有效量。如本文中使用的，“保守替代”将选定氨基酸用特征实质性不同的另一种替换。依照特征分组的氨基酸包括带正电荷的氨基酸Lys, Arg, His ;带负电荷的氨基酸Asp, Glu ；酰胺氨基酸Asn, Gln ;芳香族氨基酸Phe, Tyr, Trp ;疏水性氨基酸Pro, Gly, Ala, Val,Leu, He,Met ;和不带电荷的亲水性氨基酸Ser,Thr。下文显示了优选的保守氨基酸替代保守氨基酸替代
权利要求
1.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤 (a)使可能含有该抗药物抗体的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并 (b)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
2.权利要求I的方法，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和カ的约5%或更少。
3.权利要求I或2的方法，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和カ的约2. 5%或更少。
4.权利要求1-3任ー项的方法，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和カ的约1%或更少。
5.权利要求1-4任ー项的方法，其中通过比较在ELISA测定法中对人IgE的结合来测量相对结合亲和力。
6.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤 (a)使可能含有该抗药物抗体的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的效カ的约10%或更少；并(b)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
7.权利要求1-6任ー项的方法，其中该突变型治疗性抗体包含该治疗性抗IgE抗体重和/或轻链CDR序列中的ー处、两处、三处、四处、五处、或六处氨基酸突变。
8.权利要求1-7任ー项的方法，其中该治疗性抗IgE抗体为omalizumab，且该突变型治疗性抗体包含轻链第一⑶R中的ー处、两处、或三处氨基酸突变。
9.权利要求8的方法，其中该突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQIDNO 2和轻链氨基酸序列SEQ ID NO :1，其中轻链中第30位、第32位、和第34位处的氨基酸Asp被替代。
10.权利要求9的方法，其中该突变型治疗性抗体包含重链氨基酸序列SEQIDN0:2和轻链氨基酸序列SEQ ID NO :1及第30位、第32位、和第34位处氨基酸Asp变成Ala的替代。
11.权利要求ι- ο任ー项的方法，其中该突变型治疗性抗体被捕捉至表面。
12.权利要求11的方法，其中该突变型治疗性抗体被直接固定化至该表面。
13.权利要求11的方法，其中该突变型治疗性抗体是经过标记的且经由特异性结合标记物的捕捉剂被捕捉至表面，其中该捕捉剂被固定化至表面。
14.权利要求13的方法,其中该标记物为生物素且该捕捉剂为链霉亲合素。
15.权利要求13的方法,其中该标记物为洋地黄毒苷且该捕捉剂为抗洋地黄毒苷抗体。
16.权利要求1-15任ー项的方法，其中使该样品与被捕捉至表面的该突变型治疗性抗体接触。
17.权利要求1-15任ー项的方法，其中在该突变型治疗性抗体被捕捉至表面之前使该样品与该突变型治疗性抗体接触。
18.权利要求1-17任ー项的方法，其中用检测剂来检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
19.权利要求18的方法，其中该检测剂为结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽。
20.权利要求19的方法，其中该Feε RI α多肽包含Fe ε RI α亚基胞外域。
21.权利要求20的方法，其中该Feε RI α多肽包含与IgG恒定区融合的Fe ε RI α亚基胞外域。
22.权利要求19-21任ー项的方法，其中该Feε RI α多肽是经过标记的。
23.权利要求22的方法，其中该Feε RI α多肽上的标记物选自下组生物素，洋地黄 毒苷，钌，放射性标记物，光致发光标记物，化学发光标记物，突光标记物，电化学发光标记物，和酶标记物。
24.权利要求22或23的方法，其中通过特异性结合该FeeRIa多肽上的标记物的第ニ检测剂来检测该Fe ε RI α多肽上的标记物。
25.权利要求1-7和11-24任ー项的方法，其中该治疗性抗IgE抗体为omalizumab。
26.权利要求1-25任ー项的方法，其中该样品含有人血清或血浆。
27.权利要求26的方法，其中该血清或血浆含有该治疗性抗体。
28.权利要求26的方法，其中该血清或血浆不含该治疗性抗体。
29.权利要求1-28任ー项的方法，进ー步包括将步骤b)中检测到的该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合与參照比较的步骤。
30.权利要求29的方法，其中该參照为在该突变型治疗性抗体和对照抗体之间检测到的结合。
31.权利要求30的方法，其中该对照抗体为以相似亲和カ结合该治疗性抗IgE抗体和该突变型治疗性抗体二者的阳性对照抗体。
32.权利要求31的方法，其中该阳性对照抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。
33.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含 (a)相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；和 (b)结合人IgEFe区的检测剂。
34.权利要求33的试剂盒，其中该检测剂为包含Feε RI α亚基胞外域的Fe ε RI α多肽。
35.权利要求34的试剂盒，其中该Feε RI α多肽包含与IgG恒定区融合的Fe ε RI α亚基胞外域。
36.权利要求33-35任ー项的试剂盒，进一歩包含以相似亲和カ结合该治疗性抗IgE抗体和该突变型治疗性抗体二者的阳性对照抗体。
37.权利要求36的试剂盒，其中该阳性对照抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。
38.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含 (a)相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的效カ的约10%或更少；和 (b)结合人IgEFe区的检测剂。
39.权利要求38的试剂盒，其中该检测剂为包含Feε RI α亚基胞外域的Fe ε RI α多肽。
40.权利要求39的试剂盒，其中该Feε RI α多肽包含与IgG恒定区融合的Fe ε RI α亚基胞外域。
41.权利要求38-40任ー项的试剂盒，进一歩包含以相似亲和カ结合该治疗性抗IgE抗体和该突变型治疗性抗体二者的阳性对照抗体。
42.权利要求41的试剂盒，其中该阳性对照抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。
43.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤 (a)使可能含有该抗药物抗体的样品与(i)突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽接触，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少； (b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并 (C)检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
44.权利要求43的方法，其中在步骤(a)中使过量的FeeRIa多肽与该样品接触。
45.权利要求44的方法，其中在步骤(a)中使过量至少约10倍的Feε RI α多肽与该样品接触。
46.权利要求43-45任ー项的方法，其中该Feε RI α多肽包含Fe ε RI α亚基胞外域。
47.权利要求43-46任ー项的方法，其中该突变型治疗性抗体是经过标记的且通过特异性结合标记物的捕捉剂被捕捉至表面。
48.权利要求47的方法，其中该标记物为生物素且该表面经链霉亲合素包被。
49.权利要求43-48任ー项的方法，其中通过经标记的抗人IgE抗体来检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
50.权利要求43-48任ー项的方法，其中该FeeRIa多肽是经过标记的且通过特异性结合该Fe ε RI α多肽上的标记物的检测剂来检测该抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的彡ロロ。
51.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含 (a)相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；和 (b)结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽。
52.权利要求51的试剂盒,进ー步包含抗人IgE抗体。
53.权利要求52的试剂盒,其中该抗人IgE抗体是经过标记的。
54.权利要求51-53任ー项的试剂盒，其中该Feε RI α多肽是经过标记的。
55.权利要求51-54任一项的试剂盒，进ー步包含特异性结合该Feε RI α多肽上的标记物的检测剂。
56.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的方法，包括下述步骤 (a)将可能含有该抗药物抗体的样品与过量的结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽一起预温育； (b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并 (c)检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。
57.权利要求56的方法，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少。
58.权利要求56或57的方法，其中在步骤(a)中将过量至少约10倍的Feε RI α多肽与该样品一起预温育。
59.权利要求56-58任ー项的方法，其中在步骤(b)中在与该样品一起温育之前或之后将该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体捕捉至表面。
60.权利要求56-59任ー项的方法，其中在步骤(b)中在与该样品一起温育之前将该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体直接固定化至表面。
61.权利要求56-59任ー项的方法，其中该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体是经过标记的且经由特异性结合标记物的固定化捕捉剂被捕捉至表面。
62.权利要求61的方法，其中该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体是经过生物素标记的且被捕捉至经链霉亲合素包被的表面。
63.权利要求56-62任ー项的方法，其中通过HRP缀合的抗人IgE抗体来检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。
64.权利要求56-62任ー项的方法，其中该FeeRIa多肽是经过标记的，且通过检测标记物来检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。
65.权利要求64的方法，其中该FeeRIa多肽是经过洋地黄毒苷标记的，且通过HRP缀合的抗洋地黄毒苷抗体来检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。、
66.权利要求64的方法，其中该FeeRIa多肽是经过钌标记的，且经由电化学发光来检测该抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。
67.一种用于检测样品中结合治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的试剂盒，包含 (a)该治疗性抗IgE抗体或其突变型治疗性抗体，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对人IgE的 相对结合亲和カ相比降低；和 (b)结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽。
68.权利要求67的试剂盒,进ー步包含抗人IgE抗体。
69.权利要求68的试剂盒,其中该抗人IgE抗体是经过标记的。
70.权利要求67-69任ー项的试剂盒，其中该Feε RI α多肽是经过标记的。
71.权利要求70的试剂盒，进一歩包含特异性结合该Feε RIa多肽上的标记物的检测齐 。
72.—种鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法,包括下述步骤 (a)使来自该患者的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并 (b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。
73.—种鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法,包括下述步骤 (a)使来自该患者的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的效カ的约10%或更少；并 (b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。
74.—种鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法,包括下述步骤 (a)使来自患者的样品与⑴突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽接触，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少； (b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并 (c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。
75.—种鉴定具有针对治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的患者的方法,包括下述步骤 (a)将来自患者的样品与过量的结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽一起预温育； (b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并 (c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合，其中该样品中该抗药物抗体的存在和/或水平指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险。
76.一种治疗具有IgE介导的病症的患者的方法，包括下述步骤 (a)測定来自该患者的样品中针对治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体的水平； (b)如果该样品中该抗药物抗体的水平没有指示该患者具有针对该治疗性抗IgE抗体的过敏反应风险的话，对该患者施用有效量的该治疗性抗IgE抗体以治疗该IgE介导的病症。
77.权利要求76的方法，其中通过包括下述步骤的方法来測定该样品中该抗药物抗体的水平 (a)使来自该患者的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少；并 (b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
78.权利要求76的方法，其中通过包括下述步骤的方法来測定该样品中该抗药物抗体的水平 (a)使来自该患者的样品与相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体接触，其中该突变型治疗性抗体对人IgE的效カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的效カ的约10%或更少；并 (b)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
79.权利要求76的方法，其中通过包括下述步骤的方法来測定该样品中该抗药物抗体的水平 (a)使来自患者的样品与⑴突变型治疗性抗体和(ii)结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽接触，其中该突变型治疗性抗体相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变，且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ是该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ的约10%或更少； (b)将该突变型治疗性抗体捕捉至表面；并 (c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该突变型治疗性抗体的结合。
80.权利要求76的方法，其中通过包括下述步骤的方法来測定该样品中该抗药物抗体的水平 (a)将来自患者的样品与过量的结合人IgEFe区的Fe ε RI α多肽一起预温育； (b)将来自步骤(a)的经过预温育的样品与该治疗性抗IgE抗体或相对于该治疗性抗IgE抗体包含至少ー处氨基酸突变的突变型治疗性抗体一起温育，而且该突变型治疗性抗体对人IgE的相对结合亲和カ与该治疗性抗IgE抗体对所述人IgE的相对结合亲和カ相比降低；并 (c)检测属于IgE同种型的抗药物抗体对该治疗性抗IgE抗体或该突变型治疗性抗体的结合。
全文摘要
本发明提供对检测针对治疗性抗IgE抗体的属于IgE同种型的抗药物抗体有用的方法和试剂，及用于评估针对治疗性抗IgE抗体施用的过敏性的风险的方法。
文档编号G01N33/53GK102695956SQ201080059348
公开日2012年9月26日 申请日期2010年10月26日 优先权日2009年10月26日
发明者D.L.贝克, G.R.纳卡穆拉, H.B.洛曼, S.菲舍尔 申请人:基因泰克公司