专利名称：快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片及其制备方法
技术领域：
本发明涉及植物保护领域，主要是针对西瓜果斑病菌(Acidovorax avenae subsp. citrulli (Schaad) Willems et al. 1992，Aac)快速定量检测的蛋白芯片。
背景技术：
西瓜果斑病(Bacterial fruit blotch of watermelon)是严重危害西瓜、甜瓜等葫芦科植物生产的病害。西瓜果斑病菌学名燕麦噬酸菌西瓜亚种，是引起果斑病的特异性病原，该病菌是植物保护领域一种重要的检疫性病害。西瓜果斑病最早于1965年由狗油和Goth首先报道，但一直未引起重视，直至 1989年，该病害在美国佛罗里达州、印第安纳州等地区普遍发生，使发病区高达80%的西瓜不能上市销售，导致当地西瓜经济损失惨重，才引起人们对该病的高度重视。我国自1986 年开始，就不断有疑似西瓜果斑病爆发的报道，但一直没有确定的病原菌鉴定报告，直到 1998年，张荣意对海南乐东、东方两县采集的3个菌株进行鉴定，首次确认了西瓜果斑病菌。近些年，该病在我国新疆、内蒙古等哈密瓜、西瓜的主产地发病严重，记录发病率最高达 70%-90%，给当地果农造成巨大损失。西瓜果斑病菌在分类学上属假单胞菌科噬酸菌属，西瓜感染该菌后，主要在子叶、 真叶和果实期发病。西瓜子叶感染该病后，先出现暗棕色病斑，并沿主脉逐渐发展为黑褐色坏死斑。病菌侵染真叶后，形成周围有黄色晕圈的暗棕色病斑。植株生长中期，病征通常不显著，当田间湿度较大时，沿叶脉可观察到水浸状的斑点，病叶很少脱落。果实期，开花后 2-3周的果实最容易感染，果实染病后，首先在果皮上出现几毫米大小的水渍状病斑，随后迅速扩展成几厘米的橄榄色大型斑块，斑块边缘不规则，并不断扩展，一周左右便可布满接触地面的整个果实表面。该病发病初期病变只限于果皮，内部果肉组织依然正常。发病中期后，病菌蔓延到果肉，使果肉呈水渍状。发病后期，由于早期在果皮形成的病斑老化导致表皮龟裂，使果实因同时感染杂菌而迅速腐烂。西瓜果斑病菌可在种子和土壤表面的病残体上越冬，进而成为来年的初浸染源。病害主要依靠带菌种子进行远距离传播。带菌种子萌发后病菌又可感染子叶和真叶，引起幼苗发病。故而，在种子进出口贸易中，及时发现和清除带菌种子，对遏制病害的传播显得尤为重要。目前，对西瓜果斑病菌的检测主要有种子培养、分离培养、ELISA和基于PCR技术的分子生物学方法(Direct-PCR、免疫-PCR、Bio-PCR等)。种子培养法需在温室中进行，全过程约需3周时间，耗时费力且易漏检无明显病征的带菌种子。分离培养和ELISA法也都具有与种子培养法类似的缺陷。基于PCR的分子生物学方法可比较快速的检测病菌，但检测结果易受种子成分的抑制而出现假阴性结果。蛋白芯片是近些年新发展起来的一项新技术，主要是利用抗原/抗体等可特异性结合的原理制备而成。蛋白芯片诞生初期主要被用于蛋白质组学研究，随后被逐渐推广至生物医学相关领域，而将蛋白芯片用于植物病原的快速检测，国内外目前仍未见相关报道。蛋白芯片用于植物病原的快速检测，具有节约时间、节省抗体、灵敏度高、重复性好等众多优点，检测结果既可用肉眼直接判定，也可通过分析灰度后作定量检测，应用前景极其广泛。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的缺陷与不足，提供一种可快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片方法。本发明可有效弥补现行植物病原检测方法普遍存在的周期长、不能作定量检测的缺点，为西瓜果斑病菌的定量检测提供一种快速、灵敏、经济的新方法，为植物病原检测开创一种新思路。本发明还提供了一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的制备方法和检测方法。为实现上述目的，本发明采取的技术方案为一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，其主要特点在于是在芯片基片上固定至少一种西瓜果斑病菌捕获抗体的生物 芯片。所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，所述基片上还固定有酶标记的 IgG抗体作为阳性对照、点样缓冲液作为阴性对照；所述基片为硝酸纤维素膜(NC)。所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，所述酶标记的IgG是碱性磷酸酶标记的IgG或辣根过氧化物酶标记的IgG，作为蛋白芯片质量控制的阳性对照固定于芯片
基上ο一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的制备方法，其主要特点在于包括以下步骤
a.基片预处理基片使用前需以ddH20浸泡，并晾干恒定；所述的浸泡时间至少 15min，优选30min ；所述的晾干温度为15-37° C，优选25° C ；
b.芯片的点样制备以点样缓冲液稀释捕获抗体，同时取酶标记的IgG和点样缓冲液分别作为阳性对照，阴性对照，点样并固定；所述的点样缓冲液为0. 001-0. 5mol/L、pH值为7. 0-10. 0的碳酸盐缓冲液，优选0. 05 mol/L, pH为9. 6的碳酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液为 Na2CO3 1. 59 g, NaHCO3 2. 93 g, NaN3 0. 2 g, ddH20 1000 mL ；所述的捕获抗体浓度为 20-80mg/L，优选80 mg/L ；所述的点样体积为0. 01-0. !3uL，优选0. 2 uL ；所述的固定条件为 15-37° C，干燥固定 15-60min，优选 37° C，20min。一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，其主要特点在于包括以下步骤
(1)绘制定量标准曲线液体培养西瓜果斑病菌，无菌CldH2O梯度稀释后，以平板计数法获取菌悬液浓度；将梯度菌悬液分别与蛋白芯片杂交，洗涤液洗涤后，加入检测抗体反应，再与相应显色底物反应，最后以ddH20洗涤终止显色；平板扫描仪获取芯片结果进行灰度分析，利用阳性对照点灰度值校正各芯片检测信号，绘制检测信号灰度值与菌液浓度间的散点图，拟合线性方程，得到定量测定标准曲线；
(2)检测实际样品将待检植物样品研磨后与提取缓冲液配制样品液，蛋白芯片孵育杂交，再与检测抗体、相应显色底物分别反应，利用肉眼判定或扫描仪扫描分析灰度，将检测灰度值带入标准曲线方程，便可定量得出样品中目标菌量。所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，所述步骤(1)中检测抗体的稀释液为含0. 01-2. 0% BSA和0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，优选含0. 2% BSA和0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，优选含0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述显色底物为，与碱性磷酸酶相对应的 5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物。所述步骤(1)中的本发明提供的西瓜果斑病菌蛋白芯片检测方法，主要原理是将可特异性结合西瓜果斑病菌的捕获抗体按阵列排布固定于芯片基片表面，芯片与样品液孵育杂交后，样品中的西瓜果斑病菌被芯片表面的特异性抗体捕获结合，进一步与酶标记的检测抗体反应，芯片表面将形成特异性的捕获抗体-病原菌-检测抗体的复合体，最后检测抗体标记物相应的显色底物反应，芯片表面便呈现特定的检测信号。所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的试剂盒，其主要特点在于包括有权利要求1至3所述的蛋白芯片；还包括有检测抗体原液，抗体稀释液，洗涤液和显色试剂所述抗体稀释液为含0. 01-2. 0% BSA和0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，优选含 0. 2% BSA和0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，优选含0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述显色底物为，与碱性磷酸酶相对应的5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物。本发明的有益效果本发明将西瓜果斑病菌特异性捕获抗体固定于蛋白芯片基片上，与被检测样品反应后，样品中可能存在的西瓜果斑病菌被相应的特异性抗体捕获结合至芯片表面，进一步结合检测抗体后，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”双抗体夹心结构的复合物，最后利用检测抗体上标记物相应的显色底物显色，实现对西瓜果斑病菌的快速定量检测。本发明具有特异性好、经济、快速、操作简便等优点。相对传统ELISA法，本发明以1/12的捕获抗体用量，1/8的检测时间，达到与ELISA同等的检测能力。本发明操作简便，检测结果可长期保存，经简化后的可视化检测芯片可用于种植一线的快速自检，具良好的推广前景。
图1蛋白芯片点样示意图2蛋白芯片特异性验证结果； 图3蛋白芯片重复性测试结果；
图4蛋白芯片和ELISA对连续稀释的种子样品液检测结果对比； 图5蛋白芯片对种子样品筛查的阳性结果。
具体实施例方式以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例1 如图1所示，一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，是在芯片基片上固定至少一种西瓜果斑病菌捕获抗体D的生物芯片。上述基片上还固定有酶标记的 IgG抗体作为阳性对照P、点样缓冲液作为阴性对照N;所述基片为硝酸纤维素膜(NC)。所述酶标记的IgG是碱性磷酸酶标记的IgG，作为蛋白芯片质量控制的阳性对照固定于芯片基上。见图1，在基片上自左向右按阳性对照P、阴性对照N、捕获抗体D的顺序，每点0. 2 μ L依次点样，其中阳性对照、阴性对照各4个重复，捕获抗体8个重复。实施例2 —种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的制备方法，包括以下步骤
a.基片预处理基片使用前需以ddH20浸泡，并晾干恒定；所述的浸泡时间至少 15min，优选30min ；所述的晾干温度为15-37° C，优选25° C ；
b.芯片的点样制备以点样缓冲液稀释捕获抗体，同时取酶标记的IgG和点样缓冲液分别作为阳性对照，阴性对照，按设计图点样并固定；所述的点样缓冲液为0. 001-0. 5mol/ L、pH值为7. 0-10. 0的碳酸盐缓冲液，优选0. 05 mol/L，pH为9. 6的碳酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液为 Na2CO3 1. 59 g, NaHCO3 2. 93 g, NaN3 0. 2 g, ddH20 1000 mL ；所述的捕获抗体浓度为20-80mg/L，优选80 mg/L ；所述的点样体积为0. 01-0. ;3uL，优选0. 2 uL ；所述的固定条件为 15-37° C，干燥固定 15-60min，优选 37° C，20min。实施例3 西瓜果斑病菌蛋白芯片的制备
将硝酸纤维素膜基片用ddH20浸泡30 min, 25° C干燥30 min。以0. 05mol/L的碳酸盐缓冲液稀释捕获抗体至80mg/L，同时以碱性磷酸酶标记的IgG为阳性对照，碳酸盐缓冲液为阴性对照。见图1，在基片上自左向右按阳性对照P、阴性对照N、捕获抗体D的顺序，每点0. 2 μ L依次点样，其中阳性对照、阴性对照各4个重复，捕获抗体8个重复。点样后将基片置于湿盒中，37°C固定20 min，4°C保存备用。所用的捕获抗体和检测抗体购自Agdia公司，货号 SRA 14800。实施例4:一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，包括以下步骤
(1)绘制定量标准曲线液体培养西瓜果斑病菌，无菌ddH20梯度稀释后，以平板计数法获取菌悬液浓度；将梯度菌悬液分别与蛋白芯片杂交，洗涤液洗涤后，加入检测抗体反应，再与相应显色底物反应，最后以ddH20洗涤终止显色；平板扫描仪获取芯片结果进行灰度分析，利用阳性对照点灰度值校正各芯片检测信号，即利用阳性对照点灰度值对各芯片信号进行“片间校正”处理，绘制检测信号灰度值与菌液浓度间的散点图，拟合线性方程，得到定量测定标准曲线；所述“片间校正”，默认各蛋白芯片阳性对照点最终灰度值一致，检测点灰度校正值=检测点灰度实测值X(阳性对照点灰度值/一定值)；
(2)检测实际样品将待检植物样品研磨后与提取缓冲液配制样品液，蛋白芯片孵育杂交，再与检测抗体、相应显色底物分别反应，利用肉眼判定或扫描仪扫描分析灰度，将检测灰度值带入标准曲线方程，便可定量得出样品中目标菌量。所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，所述步骤(1)中的 “片间校正”，默认各蛋白芯片阳性对照点最终灰度值一致，检测点灰度校正值=检测点灰度实测值X(阳性对照点灰度值/某一定值)。所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，所述步骤(1)中检测抗体的稀释液为含0. 01-2. 0% BSA和0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，优选含0. 2% BSA和0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，优选含0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述显色底物为，与碱性磷酸酶相对应的 5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物。5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物，购自天根生化科技有限公司，货号PA111。
所述步骤(1)中的本发明提供的西瓜果斑病菌蛋白芯片检测方法，主要原理是将可特异性结合西瓜果斑病菌的捕获抗体按阵列排布固定于芯片基片表面，芯片与样品液孵育杂交后，样品中的西瓜果斑病菌被芯片表面的特异性抗体捕获结合，进一步与酶标记的检测抗体反应，芯片表面将形成特异性的捕获抗体-病原菌-检测抗体的复合体，最后检测抗体标记物相应的显色底物反应，芯片表面便呈现特定的检测信号。实施例5 所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的试剂盒，在盒体内包括有实施例1至3所述的蛋白芯片，3片；可特异性结合西瓜果斑病菌的碱性磷酸酶标记的检测抗体原液，1管；抗体稀释液为含0. 01-2. 0% BSA, 0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，1管；洗涤液为含0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液，1管；所述显色底物为，与碱性磷酸酶相对应的5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物，1管。实施例6 蛋白芯片检测特异性验证
(1)以西瓜果斑病菌(^cit/orarar a阳subsp. citrulli, Aac)、黄瓜花叶病毒 (Cucumber mosaic virus, CMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)、小西葫声花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV)、南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus, SqMV)阳性标准液及 PBS (NaCl 8.0 g, Na2HPO4. 2H20 1. 15 g, KH2PO4 0.2 g, KCl 0.2 g, ddH20 1000 mL, pH 7.2-7.4)各 300 μ L，室温下与蛋白芯片振荡(60 r/min)反应 45 min ；
(2)以PBST (0. 01mol/L PBS + 0. 05% Tween-20)振荡(100 r/min)洗涤 1 min，重复 3次；
(3)用PBST(含0. BSA)按200:1稀释检测抗体，加于芯片表面，室温下继续振荡反应45 min，洗涤；
(4)加入适量的BCIP/NBT显色底物避光反应15min，SddH2O(蒸馏水或自来水)洗涤终止反应，晾干分析结果。结果如图2所示蛋白芯片对可感染西瓜等葫芦科植物的4种病原(CMV、WMV、 ZYMV、SqMV)及PBS的检测实验中，只有阳性对照点显色，阴性对照和检测点均无明显显色； 而在对西瓜果斑病菌阳性液的检测中，阳性对照显色、阴性对照不显色，检测点有明显的阳性结果，显示本发明提供的蛋白芯片对西瓜果斑病菌良好的检测特异性。实施例7 蛋白芯片检测重复性测试
(1)将一份西瓜果斑病菌阳性种子提取液分成3等份，分别与3组蛋白芯片振荡反应 45 min ；
(2)以PBST (0. 01mol/L PBS + 0. 05% Tween-20)振荡(100 r/min)洗涤 1 min，重复 3次；
(3)用PBST(含0. BSA)按200:1稀释检测抗体，加于芯片表面，室温下继续振荡反应45min，洗涤；
(4)加入适量的BCIP/NBT显色底物避光反应15min，SddH2O(蒸馏水或自来水)洗涤终止反应，晾干分析结果。结果如图3所示，蛋白芯片对西瓜果斑病菌阳性种子提取液的检测，3个重复实验检测结果基本一致，显示本发明提供的蛋白芯片具有较好的检测重复性。实施例8 蛋白芯片检测灵敏度测试取本实验室保存的西瓜果斑病菌阳性种子提取液，PBS 10倍梯度稀释，各取300 μ L， 参照实施例4操作步骤反应。同时按照ELISA检测试剂盒推荐流程，同步检测上述阳性种子梯度稀释液，对比两种方法对西瓜果斑病菌的检测灵敏度差异。结果如图4所示，以蛋白芯片检测点灰度值、ELISA反应OD值为纵坐标，与4个梯度的种子样品液(1(^10^10^10-3)绘制双Y轴直方图，对比本发明建立的蛋白芯片检测方法与ELISA法对样品的检测灵敏度差异。两种方法对100倍(10_2)稀释的种子提取液检测，都有明显的阳性结果，而在对1000倍(10_3)稀释的种子提取液检测，都无明显的阳性反应，说明本发明建立的蛋白芯片方法对西瓜果斑病菌的检测，与传统ELISA具有几乎等同的检测灵敏度。实施例9 进出口种子样品的蛋白芯片检测试验
收集本实验室保存的60批葫芦科植物种子样品(西瓜、甜瓜、南瓜、西葫芦等)，各随机挑取20粒，在已灭菌的研钵中研碎。种子粉末与提取缓冲液(聚乙烯吡咯烷酮漏 24000-40000 20. 0 g, Na2SO3 1.3 g, NaN3 0.2 g,卵清蛋白 2.0 g, Tween-20 20. 0 g, PBST IOOOmL, pH 7.4)按1:10 (1 g种子粉末10 mL提取缓冲液)配制种子样品液。以蛋白芯片和ELISA两种方法，同时检测此60份种子样品提取液，对比两种方法对西瓜果斑病菌带菌种子的筛查能力。结果如图5所示，蛋白芯片对60份种子样品共检出7个阳性，这与ELISA的筛查结果一致，并且两种方法所检出的7份阳性样品编号完全吻合，显示本发明提供的蛋白芯片检测方法对种子样品具有与传统ELISA同等的筛查能力。以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，其特征在于是在芯片基片上固定至少一种西瓜果斑病菌捕获抗体的生物芯片。
2.如权利要求1所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，其特征在于所述基片上还固定有酶标记的IgG抗体作为阳性对照、点样缓冲液作为阴性对照；所述基片为硝酸纤维素膜。
3.如权利要求1或2所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，其特征在于所述酶标记的IgG是碱性磷酸酶标记的IgG，作为蛋白芯片质量控制的阳性对照固定于芯片基上ο
4.一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的制备方法，其特征在于包括以下步骤a.基片预处理基片使用前需以ddH20浸泡，并晾干恒定；所述的浸泡时间至少 15min，优选30min ；所述的晾干温度为15-37° C，优选25° C ；b.芯片的点样制备以点样缓冲液稀释捕获抗体，同时取酶标记的IgG和点样缓冲液分别作为阳性对照，阴性对照，点样并固定；所述的点样缓冲液为0. 001-0. 5mol/L、pH值为7. 0-10. 0的碳酸盐缓冲液，优选0. 05 mol/L, pH为9. 6的碳酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液为 Na2CO3 1. 59 g, NaHCO3 2. 93 g, NaN3 0. 2 g, ddH20 1000 mL ；所述的捕获抗体浓度为 20-80mg/L，优选80 mg/L ；所述的点样体积为0. 01-0. !3uL，优选0. 2 uL ；所述的固定条件为 15-37° C，干燥固定 15-60min，优选 37° C，20min。
5.一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)绘制定量标准曲线液体培养西瓜果斑病菌，无菌ddH20梯度稀释后，以平板计数法获取菌悬液浓度；将梯度菌悬液分别与蛋白芯片杂交，洗涤液洗涤后，加入检测抗体反应，再与相应显色底物反应，最后以ddH20洗涤终止显色；平板扫描仪获取芯片结果进行灰度分析，利用阳性对照点灰度值校正各芯片检测信号，绘制检测信号灰度值与菌液浓度间的散点图，拟合线性方程，得到定量测定标准曲线；(2)检测实际样品将待检植物样品研磨后与提取缓冲液配制样品液，蛋白芯片孵育杂交，再与检测抗体、相应显色底物分别反应，利用肉眼判定或扫描仪扫描分析灰度，将检测灰度值带入标准曲线方程，便可定量得出样品中目标菌量。
6.如权利要求5所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，其特征在于所述步骤(1)中检测抗体的稀释液为含0. 01-2. 0% BSA和0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述显色底物为，与碱性磷酸酶相对应的5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物。
7.如权利要求5所述的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的检测方法，其特征在于所述步骤(1)中检测抗体的稀释液为含0. 2% BSA和0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液； 所述洗涤液为含0. 05%吐温-20的磷酸盐缓冲液。
8.一种快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片的试剂盒，其特征在于包括有权利要求1至3所述的蛋白芯片；还包括有检测抗体原液，抗体稀释液，洗涤液和显色试剂 所述抗体稀释液为含0. 01-2. 0% BSA和0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含0. 01-2. 0%吐温-20的磷酸盐缓冲液；所述显色底物为，与碱性磷酸酶相对应的5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/四唑硝基蓝(BCIP/NBT)显色底物。
全文摘要
本发明公开了快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片及其制备使用方法。本发明提供的快速定量检测西瓜果斑病菌的蛋白芯片，是在芯片基片上固定至少一种西瓜果斑病菌捕获抗体的生物芯片。以硝酸纤维素膜为芯片载体，利用特异性抗体捕获西瓜果斑病菌，同时以碱性磷酸酶标记的IgG作为阳性对照、点样缓冲液作为阴性对照，检测结果既可用肉眼直接判定，也可通过灰度分析作定量检测。相对传统ELISA，本发明以1/12的捕获抗体用量，1/8的检测时间，达到与ELISA同等的检测能力；并且本发明操作简便，检测结果可长期保存，可用于种植一线对西瓜果斑病菌的快速自检，推广前景广阔。
文档编号G01N33/569GK102207503SQ201110061688
公开日2011年10月5日 申请日期2011年3月15日 优先权日2011年3月15日
发明者刘箐, 孔君, 熊亮斌 申请人:上海慧耘生物科技有限公司