专利名称：藏药唐古特乌头及其制剂中生物碱的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及ー种质量检测方法，具体涉及ー种藏药唐古特乌头及其制剂中生物碱的质量检测方法。该方法包括唐古特乌头中生物碱及其制剂八味獐牙菜丸中生物碱、i^一味金色丸中生物碱、十三味榜嘎散、安儿宁颗粒中生物碱的质量检测方法。
背景技术：
唐古特乌头(Herba Aconiti Tangutici),为毛茛科植物甘青乌头(唐古特乌头)Aconitum tanguticum (Maxim. ノ Stapf 和船蓝马头 Aconitum naviculare (BruhI.) Stapf 的干燥全草。夏末秋初开花期连根采挖，除去杂质，阴干。本品性凉，味苦，具有清热解毒，生肌收ロ，燥湿之功效。功能主治清热解毒，主要用于肝热、胆热、肺热、肝炎、肺炎、胃肠炎、流行性感冒、传染病引起的发烧、食物中毒、蛇蝎咬伤以及黄水病。乌头属药用植物大多以块根、根入药，多具有祛风除湿、温经止痛之功效，其中主要成分是双酯型生物碱，约占总重的7% 10%,具有显著的生理活性，一般需要进行炮制以降低药性。唐古特乌头以全草入药，草本高10 30cm，块根2，小形，其主要药效成分生物碱主要为内酯型ニ萜生物碱，含有少量的双酯型生物碱成分，不需进行炮制即可入药，但服用过量有可能带来健康隐患。唐古特乌头收载于《藏药部颁标准》，藏药名榜嘎，为藏药成方制剂中常用药材，同时是具有藏药特色的药材代表，部颁标准仅使用显微鉴别控制其药材质量，很难保证药材使用安全、有效，因此有必要建立ー种科学的质量检测方法对唐古特乌头及其制剂的质量进行评价。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种藏药唐古特乌头及其制剂中生物碱的质量检测方法。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案一种藏药唐古特乌头的质量检测方法，它包括鉴别、检查和含量测定项目，所述鉴别是以唐古特乌头对照药材为对照、以体积份数比为5:4:1.5:0.2的正己烷-こ酸こ酷-甲醇-氨水为展开剂在硅胶G薄层板上展开、以碘化铋钾溶液为显色剂的薄层色谱法；所述检查是对药材中所含双酯型生物碱的检查，其是以乌头碱对照品、次乌头碱对照品、新乌头碱对照品的等量混合溶液为对照，以体积份数比为25:15的こ臆-四氢呋喃为流动相A，以每IOOOmlO. lmol/1醋酸铵水溶液加O. 5ml冰醋酸为流动相B进行梯度洗脱的高效液相色谱法；所述含量測定包括对药材中所含大麦芽碱的含量測定和总生物碱的含量測定，所述大麦芽碱含量測定是以大麦芽碱对照品为对照，以体积份数比为10:90的こ腈-O. 025mol/l磷酸ニ氢钾水溶液并用三こ胺调节PH至7. 2为流动相的高效液相色谱法；所述总生物碱含量測定是采用体积份数比100:1氯仿-氨水的混合溶液提取，合并洗液及滤液，低温减压(50°C以下)蒸干，加入活性炭脱色，振摇，脱色，加入硫酸滴定液，使用氢氧化钠滴定液，以甲基红为指示液的反滴定法。
所述检查中梯度洗脱的过程如下
_时间(分钟)_流动相A(%) _流动相B(%)_
O 25 18—22 82—78[_8] 25—55 22—25 78—7555-55.1 25—18 75—82_55.1 65 _18 _82_
权利要求
1.一种藏药唐古特乌头的质量检测方法，其特征是，它包括鉴别、检查和含量测定项目，所述鉴别是以唐古特乌头对照药材为对照、以体积份数比为5:4:1. 5:0. 2的正己烷-こ酸こ酷-甲醇-氨水为展开剂在硅胶G薄层板上展开、以碘化铋钾溶液为显色剂的薄层色谱法；所述检查是对药材中所含双酯型生物碱的检查，其是以乌头碱对照品、次乌头碱对照品、新乌头碱对照品的等量混合溶液为对照，以体积份数比为25:15的こ臆-四氢呋喃为流动相A，以每IOOOml 0. lmol/1醋酸铵水溶液加0. 5ml冰醋酸为流动相B进行梯度洗脱的高效液相色谱法；所述含量測定包括对药材中所含大麦芽碱的含量測定和总生物碱的含量測定，所述大麦芽碱含量測定是以大麦芽碱对照品为对照，以体积份数比为10:90的こ腈-0. 025mol/l磷酸ニ氢钾水溶液并用三こ胺调节PH至7. 2为流动相的高效液相色谱法；所述总生物碱含量測定是采用体积份数比100:1氯仿-氨水的混合溶液提取，合并洗液及滤液，50 0C以下低温减压蒸干，加入活性炭脱色，振摇，脱色，加入硫酸滴定液，使用氢氧化钠滴定液，以甲基红为指示液的反滴定法。
2.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述检查中梯度洗脱的过程如下
3.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述鉴别具体为 取待检测药材粉末lg，加氨水5ml，加ニ氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；取唐古特乌头对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为5:4:1. 5:0. 2的正己烷-こ酸こ酷-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
4.如权利要求2所述的质量检测方法，其特征是，所述检查具体为 取待检测药材粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比为1:100盐酸-甲醇的混合溶液50ml，称定重量，超声处理40分钟，温度不超过25°C，放冷，称定重量，用体积份数比为1:100盐酸-甲醇的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，在40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入0. 05mol/l硫酸溶液25ml，振摇使溶解，转速为8000转/分钟离心20分钟，精密量取上清液20ml，置分液漏斗中，用ニ氯甲烷洗涤4次，弃去ニ氯甲烷液，待上层澄清后，用氨试液调PH至8-9，再用こ醚振摇提取5次，毎次20ml，合并こ醚液，挥干，残渣用0. 05mol/l硫酸溶解，转移至5ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取乌头碱对照品、次乌头碱对照品、新乌头碱对照品适量，精密称定，加0. 05mol/l硫酸制成每Iml含乌头碱、次乌头碱、新乌头碱各50 y g的混合溶液，作对照品溶液，照高效液相色谱法试验；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为25:15的こ腈-四氢呋喃为流动相A，以0. lmol/1醋酸铵水溶液且每IOOOml加冰醋酸·0. 5ml为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为235nm ;理论板数按新乌头碱峰计算应不低于2000 ;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 u 1，注入液相色谱仪，測定，即得。
5.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述大麦芽碱含量測定具体为 照高效液相色谱法測定； 色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为10:90的こ腈-0. 025mol/l的磷酸ニ氢钾水溶液并用三こ胺调节PH至7. 2为流动相；检测波长225nm ;理论板数按大麦芽碱峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备精密称取大麦芽碱对照品适量，加甲醇制成每Iml中含大麦芽碱20 Ug的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测药材粉末lg，精密称定，置锥形瓶中，加入体积份数比为 100:1氯仿-氨水的混合溶液50ml，称定重量,超声30分钟,放置过夜,称定重量,用体积份数比为100:1氯仿-氨水的混合溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液25ml，减压低温蒸干，残渣精密加入0. 05mol/l硫酸溶液25ml，使溶解，转速为8000转/分钟离心20分钟，取上清液，置分液漏斗中，用氨试液调PH至8-9，再用こ酸こ酯振摇提取5次，毎次20ml，合并萃取液，挥干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
6.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述总生物碱含量測定具体为 取待检测药材粉末5g，精密称定，置锥形瓶中，加入体积份数比100:1氯仿-氨水的混合溶液50ml,称定重量,超声30min,放置过夜,滤过,残洛加入体积份数比100:1氯仿-氨水的混合溶液50ml，振摇I小时,滤过,残洛使用体积份数比100:1氯仿-氨水的混合溶液洗涤3次，毎次15m ;合并洗液及滤液，低温减压蒸干，残渣加入こ醇IOml使溶解，加入活性炭lg，振摇，使脱色，再精密量取续滤液5ml，精密加入0. Olmol/1硫酸滴定液15ml、水15ml与甲基红指示液3滴，使用0. 02mol/l氢氧化钠滴定液滴定至黄色；每Iml硫酸滴定液相当于I. 65mg的大麦芽碱。
7.一种药物制剂中唐古特乌头生物碱的质量检测方法，其特征是，采用权利要求I或2所述的方法对制剂中唐古特乌头生物碱进行质量检测。
8.如权利要求7所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法具体为 薄层色谱鉴别 取待检测制剂粉末5-8g，加氨水5ml，加ニ氯甲烷50ml，功率250W、频率40kHz超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；取唐古特乌头对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为5:4:1. 5:0. 2的正己烷-こ酸こ酯-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点； 双酯型生物碱检查 取待检测制剂粉末8-15g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比为I 100盐酸-甲醇的混合溶液50ml，称定重量，超声处理40分钟，温度不超过25°C，放冷，称定重量，用体积份数比为1:100盐酸-甲醇的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，在40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入0. 05mol/l硫酸溶液25ml，振摇使溶解，转速为8000转/分钟离心20分钟，精密量取上清液20ml，置分液漏斗中，用ニ氯甲烷洗涤4次，弃去ニ氯甲烷液，待上层澄清后，用氨试液调PH至8-9，再用こ醚振摇提取5次，毎次20ml，合并こ醚液，挥干，残渣用0. 05mol/l硫酸溶解，转移至5ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取乌头碱对照品、次乌头碱对照品、新乌头碱对照品适量，精密称定，加0. 05mol/l硫酸制成每Iml含乌头碱、次乌头碱、新乌头碱各50 y g的混合溶液，作对照品溶液；照高效液相色谱法试验； 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为25:15的こ臆-四氢呋喃为流动相A，以0. lmol/1醋酸铵水溶液且每IOOOml加冰醋酸0.5ml为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，检测波长为235nm ;理论板数按新乌头碱峰计算应不低于2000 ;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 yl，注入液相色谱仪，測定，即得；
9.如权利要求7或8所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂为八味獐牙菜丸、十一味金色丸、十三味榜 嘎散或安儿宁颗粒。
全文摘要
本发明公开了一种藏药唐古特乌头及其制剂中生物碱的质量检测方法，包括鉴别、检查和含量测定项目，鉴别是以唐古特乌头对照药材为对照、以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水为展开剂的薄层色谱法；检查是以乌头碱对照品、次乌头碱对照品、新乌头碱对照品的混合溶液为对照，以乙腈-四氢呋喃为流动相A，以醋酸铵水溶液加冰醋酸为流动相B进行梯度洗脱的高效液相色谱法；大麦芽碱含量测定是以大麦芽碱对照品为对照，以乙腈-磷酸二氢钾水溶液为流动相的高效液相色谱法；总生物碱含量测定采用反滴定法。本发明稳定可靠，专一性强，能够确保藏药唐古特乌头及其制剂中生物碱的安全、有效、质量可控，有较大的科学性和应用价值。
文档编号G01N30/90GK102735789SQ20121024174
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月12日 优先权日2012年7月12日
发明者任松鹏, 刘玉芹, 单玉刚, 李丽, 王海苹, 邵成雷, 郑亭亭 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司