专利名称：一种油茶籽中多糖含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种多糖含量的测定方法，特别涉及一种油茶籽中多糖含量的测定方法。
背景技术：
油茶，俗称苦茶、建茶、白花茶，因能从其籽中榨取不饱和脂肪酸含量高达93%的茶油而成为优秀的食用植物油之一。同时，研究表明，油茶籽中还含有多糖、茶皂素、黄酮甙及咖啡碱等具有生物活性的有效成分，有很高的研究和应用价值。植物水溶性多糖是从天然产物中分离出的天然有效成分，具有多种多样的生物活性及药理作用，主要包括增强免疫、抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖、抗衰老、增强骨髓造血机能、抗辐射、对肝肾等主要脏器的保护作用等，已在保健、疾病治疗等领域广泛使用。因 此，植物中的水溶性多糖的含量常用来作为评价一些药用植物质量的指标之一，其含量的测定可以为天然生物资源的开发利用和研究提供有效参考数据，因此如何定量判断油茶籽中茶多糖的含量是人们所关注的。目前油茶籽多糖含量的测定尚无国家标准，有关油茶籽多糖含量的测定方法鲜有报道，植物水溶性多糖的测定都是沿用粗多糖的测定方法。硫酸-苯酚法是测定多糖含量的经典方法，其原理为用水提取植物中的多糖类组分，在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长测定其多糖含量。在油茶籽多糖含量测定中，油茶籽多糖在浓硫酸作用下转化为单糖，进而可测定单糖含量。然而由于油茶籽中还含有茶油、茶皂素、黄酮类化合物等其他多种活性成分，因此加大了从油茶籽中有效提取纯度较高的多糖的难度，并且影响了多糖含量测定的精确度。而油茶籽中多糖含量的定量测定成为多糖产品开发、生产以及质量控制中的关键技术问题，因此鉴于现有方法的不足，找到一种如何能精确测定油茶籽中多糖含量的方法成为目前亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是针对目前油茶籽中多糖含量测定方法所存在的不足，提供一种精确定量测定油茶籽中多糖含量的方法，该方法具有可操作性强、测定结果准确、重现性高、在一般常规实验室即可进行测量的优点，并为其他天然产物的多糖含量的精确测定提供了可靠参考依据。本发明的目的通过以下技术方案实现—种油茶籽中多糖含量的测定方法，包括以下步骤(I)称取烘干磨碎的待测油茶籽，用低极性溶剂对所述油茶籽进行提取，得油茶籽I和低极性溶剂提取液；(2)用质量百分含量为70 85%的乙醇溶液对油茶籽I进行提取，得油茶籽II和乙醇溶液提取液；
(3)用水对油茶籽II进行提取，得水提取液，将所得水提取液定容，作为多糖待测溶液；(4)采用硫酸-苯酚法测定上述待测溶液中多糖的含量，具体步骤如下吸取多糖样品溶液，用蒸馏水稀释，得多糖待测溶液，吸取2. Oml多糖待测溶液于试管中，加入5% 10%苯酚试剂I. 0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5. 0ml，迅速摇匀，静置后，置于沸水浴中加热，取出后迅速冷却，另以2ml蒸馏水做空白对照，按紫外分光光度法在490nm处测定吸光度，根据标准曲线得出待测液中多糖的质量。本发明步骤(I)的目的是去除油茶籽中脂溶性成分，如茶油，步骤(2)的目的是去除油茶籽中可溶性甙类物质，如油茶籽皂素、黄酮甙等化合物，由于油茶籽中一些可溶性甙类组分在硫酸作用下也会水解产生单糖，因此采用传统方法测定多糖含量时，这些被水解的单糖也会被当成多糖来定量，因此测定的多糖含量远高于实际值，从而影响定量测定的准确性，所以本发明采用提取的方法先去除油茶籽中脂溶性物质和可溶性甙类物质，不仅能保证有效地提取纯度较高的多糖，而且避免了这些物质对多糖含量测定精确度的影响。优选地，步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)中的提取方法为索氏提取或多次浸提的方法。优选地，所述低极性溶剂为石油醚、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种混合。优选地，在步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)中，提取时间为2 6h。优选地，步骤(I)中的提取温度为60 80°C，步骤(2)中的提取温度为80 100°C，步骤(3)中的提取温度为100 120°C。优选地，步骤(3)中水提取液的定容体积为100 250ml。优选地，步骤(4)中多糖样品溶液的吸取量为O. I 15ml。优选地，步骤(4)中置于沸水浴中的加热时间为12 18min。优选地，在步骤(4)中，所述多糖样品溶液用蒸馏水稀释的体积倍数为10 1000。本发明与现有技术相比具有以下优点本发明的方法，具有可操作性强、测定结果准确、重现性高、在一般常规实验室即可进行测量的优点，为其他天然产物的多糖含量的精确测定提供了可靠参考依据。另外，本发明为油茶籽多糖产品开发、生产以及质量控制提供了有效的保证。
具体实施例方式本发明所使用的索氏提取或多次浸提的方法均按照本领域常规的实验操作步骤进行。下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例I一种油茶籽中多糖含量的测定方法，包括以下步骤(I)准确称量油茶籽样品5g，用双层滤纸包好，置于索氏提取器中，在圆底烧瓶加入80ml石油醚，在温度为70°C的油浴锅中加热回流，抽提4小时，得油茶籽I和石油醚提取液，保留油茶籽I，弃去石油醚提取液；(2)向装有上述油茶籽I的圆底烧瓶中加入70%乙醇80ml，在温度为90°C的油浴锅中加热回流，抽提4小时，得油茶籽II和乙醇提取液，弃去乙醇提取液，将所述油茶籽II取出，在避光通风处自然晾干；(3)将步骤(2)中干燥后的油茶籽II用双层滤纸包好，置于索氏提取器中，在圆底烧瓶加入80ml蒸馏水，在温度为110°C的油浴锅中加热回流，抽提4小时，待冷却后移入250ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至 250ml，得到多糖样品溶液。(4)采用硫酸-苯酚法测定上述待测溶液中多糖的含量4. I标准曲线的绘制4. I. I苯酚溶液的配制称取IOg苯酹,加水150ml充分溶解后转移至棕色瓶中，置于冰箱备用。4. I. 2葡萄糖储备液的配制准确称取105°C干燥至恒重的标准葡萄糖lOOmg，加适量水使之溶解，置于IOOml容量瓶中，加水定容至IOOml,均匀混合后置于冰箱备用。4. I. 3葡萄糖使用液的配制准确吸取葡萄糖储备液10ml，置于IOOml容量瓶中，用水稀释至100ml，得到
O.lmg/ml的葡萄糖使用液。均勻混合后置于冰箱备用。4. I. 4标准曲线的绘制准确吸取葡萄糖使用液O. Iml,O. 2ml,O. 3ml,O. 4ml,O. 5ml,O. 6ml,0. 7ml,0. 8ml,分别置于IOml试管中，向每支试管中补加蒸馏水至2. 0ml，再分别向每支试管中加入所配置的苯酚试剂I. Oml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5. Oml，摇匀，放置5min，置于沸水浴中加热15min,取出，用冷水迅速冷却至室温；另以2. Oml蒸懼水重复上述操作,做空白对照。在Icm比色皿中按紫外分光光度法在490nm波长处测定吸光光度值，如表I所示。表I葡萄糖浓度在490nm波长处的吸光光度值
权利要求
1.一种油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤(1)称取烘干磨碎的待测油茶籽，用低极性溶剂对所述油茶籽进行提取，得油茶籽I和低极性溶剂提取液；(2)用质量百分含量为70 85%的乙醇溶液对油茶籽I进行提取，得油茶籽II和乙醇溶液提取液；(3)用水对油茶籽II进行提取，得水提取液，将所得水提取液定容，作为多糖样品溶液；(4)采用硫酸-苯酚法测定上述待测溶液中多糖的含量，具体步骤如下吸取多糖样品溶液，用蒸馏水稀释，得多糖待测溶液，吸取2ml多糖待测溶液于试管中，加入5 10重量％的苯酚试剂I. 0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5. 0ml，迅速摇匀，静置后，置于沸水浴中加热，取出后迅速冷却，另以2ml蒸馏水做空白对照，按紫外分光光度法在490nm处测定吸光度，根据标准曲线得出待测液中多糖的质量。
2.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)中的提取方法为索氏提取或多次浸提的方法。
3.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，所述低极性溶剂为石油醚、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种混合。
4.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，在步骤(I)、步骤(2)和步骤(3)中，提取时间为2 6h。
5.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤(I)中的提取温度为60 80°C，步骤(2)中的提取温度为80 100°C，步骤(3)中的提取温度为100 120。。。
6.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤(3)中水提取液的定容体积为100 250ml。
7.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中多糖样品溶液的吸取量为O. I 15ml。
8.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中置于沸水浴中的加热时间为12 18min。
9.如权利要求I所述的油茶籽中多糖含量的测定方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述多糖样品溶液用蒸馏水稀释的体积倍数为10 1000。
全文摘要
本发明提供了一种油茶籽中多糖含量的测定方法，包括以下步骤，先依次用低极性溶剂和乙醇提取油茶籽，去除油茶籽中含有的脂溶性物质和可溶性甙类物质，再用水提取油茶籽中的多糖，而后采用硫酸-苯酚法测定油茶籽中多糖的含量。本发明的方法，具有可操作性强、测定结果准确、重现性高、在一般常规实验室即可进行测量的优点，为多糖产品开发、生产以及质量控制提供了有效的保证。
文档编号G01N21/31GK102914508SQ20121040166
公开日2013年2月6日 申请日期2012年10月19日 优先权日2012年10月19日
发明者伊国群, 孟庆华 申请人:伊国群