一种检测汞离子的固态电化学发光传感器及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于汞离子检测的固态电化学发光传感器及其制备方法和应用，特点是该传感器为表面固载电聚合的ABEI，再依次组装有戊二醛、DNA1、通过T-Hg2+-T错配结合的DNA2以及生物素的玻碳电极；其制备方法包括固载有DNA1玻碳电极的制备步骤和固态电化学发光传感器的组装步骤，优点是具有灵敏度高、稳定性好、选择性强、重现性良好、易于操作、节约试剂等。
【专利说明】-种检测汞离子的固态电化学发光传感器及其制备方法和 应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及重金属检测【技术领域】，尤其是涉及一种检测汞离子的固态电化学发光 传感器及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 重金属污染是现在环境污染的重要组成部分之一。汞（Hg)，是常温下唯一的液态 金属，是重金属污染中的头号杀手。近年来，人类对重金属汞的开采、冶炼、加工及商业制造 活动日益增多，大量的汞进入大气、水、土壤中存留、积累和迁移。环境中的汞最后以食物链 的形式进入动物和人类的体内，对生物体的生命机能造成很大伤害，产生神经精神症状、震 颤、口腔炎及中毒性肾病等疾病。汞离子（Hg 2+)是汞在自然界中的主要存在形式之一，众多 卫生标准中要求不得检出，因此发展高灵敏度且高选择性的低浓度汞离子检测方法对环境 检测及食品安全监测具有重要的意义。
[0003] 目前检测汞离子的方法主要有：冷原子吸收光谱法、ICP-MS、荧光光谱法、紫外一 可见分光光度法、原子荧光法、电化学法、离子色谱法、毛细管电泳法、重金属快速测定仪 法、试纸条法等，但这些方法或需使用昂贵的仪器，操作繁琐，且要求检测人员具备一定的 专业知识，分析成本高，难以普及；或灵敏度不高、选择性差，样品预处理复杂，难以准确定 量检测低浓度Hg 2+。
[0004] 电化学发光（ECL)是将电化学与化学发光相结合的一种分析技术，不仅具有化学 发光分析法的灵敏度高、线性范围宽、观察方便、仪器简单等优点，而且具有电化学分析法 的电位可控性强、选择性高、试剂稳定、重现性好等优点，已受到科研工作者的极大关注，并 逐渐发展成为分析检测领域的重要分支。固态电化学发光是将电化学发光试剂通过化学方 法或物理方法固载到电极表面后再进行ECL检测的技术，与溶液中的ECL相比，将电化学发 光试剂固定到电极表面构建的固态ECL，还有以下优点：减少昂贵试剂的用量、简化实验操 作、提高ECL强度等。但是，目前，国内外还没有公开任何利用N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁 米诺（ABEI)的固态电化学发光检测水体中汞离子含量相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、稳定性好、选择性强、重现性 好、易于操作的用于汞离子检测的固态电化学发光传感器及其制备方法和检测方法。
[0006] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用于检测汞离子的固态电化 学发光传感器，所述的传感器为表面固载电聚合的ABEI，再依次组装有戊二醛、DNA1、通过 T-Hg2+-T错配结合的DNA2以及生物素的玻碳电极。
[0007] 上述用于检测汞离子的固态电化学发光传感器的制备方法，具体步骤如下： (1)固载有DNA1玻碳电极的制备 a.将直径为3?5 mm的玻碳电极依次用1. 0 μ m、0. 3 μ m、0. 05 μ m的三氧化二错 抛光处理，然后依次用乙醇、水超声清洗，水冲洗干净后，氮气吹干备用； b. 将步骤（a)所得玻碳电极置于含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)的&504 溶液中，进行循环伏安扫描，电压范围为-0.2?1.5 V，以0.01?0.1 V/s的扫速循环扫 描20?30圈，使ABEI在玻碳电极表面电聚合；所述的含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米 诺（ABEI) WH2S04溶液中N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)浓度为0.01?0.0001 mol/L，H2S04 浓度为 0· 1 ?1 mol/L ; c. 将步骤（b)所得玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净后， 在玻碳电极表面滴加1?3 wt%戊二醛溶液10?20 μ L，静置20?40分钟； d. 将步骤（c)所得玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净后， 在玻碳电极表面滴加含10 μ mol/L DNA1的pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液10? 20 μ L，静置20?40 min，使DNA1结合到电极表面； e. 将步骤（d)所得玻碳电极浸泡在10?20 μ L质量百分浓度为2%的牛血清白蛋白 溶液中，封闭1?2 h(封闭非活性位点），即得固载有DNA1的玻碳电极； (2)固态电化学发光传感器的组装 a. 配制一系列不同浓度的含汞离子的标准溶液，将标准溶液与含10 μ mol/L DNA2的 pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液按体积比1:1混合； b. 取步骤（a)所得的混合溶液10?20 μ L，滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面，室 温下孵育20?30 min后，用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液清洗； c. 取适量pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液配制0· 01?0· 1 mg/mL的亲和素 溶液，将10?20 μ L亲和素溶液滴加到步骤（b)所得玻碳电极表面，孵育5 min后； d. 将步骤（c)所得的玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液清洗后，即 得到用于汞离子检测的固态电化学发光传感器。
[0008] 所述的 DNA1 的结构式为：5' -NH2-(CH2)6-GACTGTCTCGTTCGCTTAG-3' ；所述的 DNA2 的结构式为：5' -biotin-CTATGCGTACGTGACTGTC-3'。
[0009] 上述固态电化学发光传感器的用于检测汞离子的方法，具体步骤如下： (1) 标准曲线建立 a. 将权利要求3所述的固载有DNA1的玻碳电极用0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净 后，在pH = 9?10的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液中，启动电化学反应，测试电化学发光强 度1〇; b. 将权利要求3所述的用于汞离子检测的固态电化学发光传感器放入pH = 9?10 的0. 05?0. 2 Μ碳酸盐缓冲液，启动电化学反应，测量电化学发光强度，获得一系列不同浓 度的Hg2+溶液对应的电化学发光强度值L，计算一系列不同浓度的Hg 2+溶液电化学发光强 度的改变值Λ 1= L-Ii，建立电化学发光强度的改变值Λ I与Hg2+溶液浓度之间的定量关 系； (2) 待测样品测定 a. 将含汞离子的待测样品溶液与含10 ymol/LDNA2的pH7?8的0.01?0. 1MPBS 缓冲液按体积比1:1混合； b. 取步骤（a)所得的混合溶液10?20 μ L，滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面，室 温下孵育20?30 min后，用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液清洗； C.将10?20 μ L用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液配制的0· 01?0· 1 mg/ mL的亲和素溶液滴加到步骤（b)所得玻碳电极表面，孵育5 min后； d.将步骤（c)所得的玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液清洗后，作 为工作电极，饱和甘汞电极或者Ag/AgCl电极为参比电极，钼丝电极为对电极，构建三电极 系统，置入pH = 9?10的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液中，启动电化学反应，测试电化学发 光强度值，利用电化学发光强度的改变值△ I与Hg2+溶液浓度之间的定量关系，计算得到待 测样品溶液中Hg2+的准确浓度C Hg。
[0010] 所述的碳酸盐缓冲液中含1 mM的过氧化氢，采用的电化学方法为电位阶跃计时电 流法；电位阶跃：〇 V阶跃至1 V ;脉冲宽度：0. 25 S ;测量时间间隔：30 S。
[0011] 发明原理：电化学发光试剂为电聚合的ABEI，ABEI在玻碳电极表面电聚合后，原 来的两步电化学发光反应变为一步，且从不可逆变为可逆，电化学发光信号非常稳定。ABEI 中的氨基仍然保留，非常方便后续的偶联DNA。在戊二醛交联作用下，DNA1的氨基与电极 表面ABEI聚合物中的氨基偶联，从而被固定到电极表面，此时测得的电化学发光强度I。很 大。当待测溶液中有Hg 2+时，DNA1与DNA2通过T-Hg2+-T错配结合，亲和素与DNA2末端的 生物素结合，生物素是生物大分子，分子量约60kD，其在电极表面可有效阻碍电子与光的传 递，使电化学发光减弱为L。待测溶液中Hg 2+含量越高，发光强度的改变值Λ 1=、- L也 就越大，这就是本固态电化学发光传感器定量检测Hg2+的机理。固态电化学发光传感器检 测Hg 2+的原理图如图1所示。
[0012] 与现有技术相比，本发明的优点在于： (1)高灵敏度，借助于电化学发光技术本身极高的灵敏度，本固态电化学发光传感器能 定量检测0. 01 nM Hg2+。
[0013] (2)高选择性，常见金属离子如？132+^112+、(：〇 2+、附2+、(：112+、2112+、〇(12+、1% 2+对检测均 无干扰。原因在于：T-Hg2+-T错配对汞离子具有高特异性的识别能力，其它金属离子的干扰 可忽略。
[0014] (3)成本低廉。所需试剂量极少。
[0015] (4)精密度高。采用固态电化学发光，信号稳定，结果精密度高。
[0016] 综上所述，本发明拟制备一种用于汞离子检测的固态电化学发光传感器，具有灵 敏度高、稳定性好、选择性强、重现性良好、易于操作的优点，可以实现对超低浓度汞离子的 检测目的。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1为本发明固态电化学发光传感器检测汞离子的原理图； 图2为不同浓度汞离子对应的电化学发光信号； 图3为发光强度的改变值△ I与汞离子浓度对数之间的线性关系图； 图4为本发明固态电化学发光传感器检测汞离子的选择性检测结果图。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0019] 具体实施例一 一种用于检测汞离子的固态电化学发光传感器，该传感器为表面固载电聚合的ABEI， 再依次组装有戊二醛、DNA1、通过T-Hg2+-T错配结合的DNA2以及生物素的玻碳电极，具体制 备步骤如下： (1) 固载有DNA1玻碳电极的制备 a. 将直径为3?5 mm的玻碳电极依次用1. Ο μ m、0. 3 μ m、0. 05 μ m的三氧化二错 抛光处理，然后依次用乙醇、水超声清洗，水冲洗干净后，氮气吹干备用； b. 将步骤（a)所得玻碳电极置于含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)的&504 溶液中，进行循环伏安扫描，电压范围为-0.2?1.5 V，以0.05 V/s的扫速循环扫描20圈， 使ABEI在玻碳电极表面电聚合；上述含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)的&50 4 溶液中N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)浓度为0. 001 mol/L，H2S04浓度为0. 1? 1 mol/L ； c. 将步骤（b)所得玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净后， 在玻碳电极表面滴加1?3 wt%戊二醛溶液10?20 μ L，静置20?40分钟； d. 将步骤（c)所得玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净后， 在玻碳电极表面滴加含10 μ mol/L DNA1的pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液10? 20 μ L，静置20?40 min，使DNA1结合到电极表面；其中DNA1的结构式为：5'-NH2-(CH2) 6 -GACTGTCTCGTTCGCTTAG-3,； e. 将步骤（d)所得玻碳电极浸泡在10?20 μ L质量百分浓度为2%的牛血清白蛋白 溶液中，封闭1?2 h(封闭非活性位点），即得固载有DNA1的玻碳电极； (2) 固态电化学发光传感器的组装 a. 配制一系列不同浓度的含汞离子的标准溶液，将标准溶液与含10 μ mol/L DNA2的 pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液按体积比1:1混合；其中DNA2的结构式为：5'-bi otin-CTATGCGTACGTGACTGTC-3' ； b. 取步骤（a)所得的混合溶液10?20 μ L，滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面，室 温下孵育20?30 min后，用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液清洗； c. 取适量pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液配制0· 01?0· 1 mg/mL的亲和素 溶液，将10?20 μ L亲和素溶液滴加到步骤（b)所得玻碳电极表面，孵育5 min后； d. 将步骤（c)所得的玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液清洗后，即 得到用于汞离子检测的固态电化学发光传感器。
[0020] 除上述具体实施例外，上述固态电化学发光传感器制备的步骤中： 循环伏安扫描的扫速还可以为〇.〇1?0.1 v/s内的任一值，圈数还可以为20?30 圈内的任一值，含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)的H2S04溶液中N-(4-氨丁 基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)浓度还可以为0.01?0.0001 mol/L内的任一值，H2S04& 度可以为〇. 1?1 mol/L内的任一值； 戊二醛溶液的浓度可以为1?3 wt%内的任一值，滴加体积可以为10?20 μ L内的 任一值，静置时间为20?40分钟内的任一值； 含10 μ mol/L DNA1的pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液的滴加体积可以为 10?20 μ L内的任一值，静置时间可以为20?40分钟内的任一值； 牛血清白蛋白（BSA)溶液滴加体积可以为10?20 μ L内的任一值，静置时间可以为 1?2 h内的任一值； 标准溶液与含10 μ mol/L DNA2的pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液按体积比 1:1混合所得混合溶液滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面的滴加体积可以为10?20 μ L 的任一值，孵育时间可以为20?30 min内的任一值； 亲和素溶液的浓度可以为0.01?0.1 mg/mL内的任一值，滴加体积可以为10?20 yL 内的任一值； PBS缓冲液的浓度可以为0. 01?0. 1 Μ内的任一值，pH可以为7?8内的任一值。
[0021] 具体实施例二 利用上述具体实施例二制备得到的固态电化学发光传感器检测汞离子的方法，检测汞 离子的原理如图1所示，具体步骤如下： a. 将上述具体实施例二制备得到的固载有DNA1的玻碳电极用0.01?0.1 M PBS缓冲 液冲洗干净后，在pH = 9?10的0. 05?0. 2 Μ碳酸盐缓冲液中，启动电化学反应，测试电 化学发光强度1〇 ; b. 将上述具体实施例二制备得到的用于汞离子检测的固态电化学发光传感器放入pH =9?10的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液，启动电化学反应，测量电化学发光强度，获得一系 列不同浓度的Hg2+溶液对应的电化学发光强度值L，计算一系列不同浓度的Hg 2+溶液电化 学发光强度的改变值Λ 1=、- Ip 电化学发光强度的改变值Λ 1= L-Ii，与汞离子浓度对数在0.01?10 nM浓度范 围内呈线性关系(不同浓度汞离子对应的电化学发光信号，如图2所示)，标准曲线为Λ 1= 2493. 25 + 843.63 log CHg (ηΜ)(发光强度的改变值Λ I与汞离子浓度对数之间的线性关 系图，如图3所75); (2)待测样品测定 a. 将含汞离子的待测样品溶液与含10 μ mol/L DNA2的ρΗ7?8的0. 01?0. 1 M PBS 缓冲液按体积比1:1混合； b. 取步骤（a)所得的混合溶液10?20 μ L，滴加到上述具体实施例一制备得到的固 载有DNA1的玻碳电极表面，室温下孵育20?30 min后，用pH = 7?8的0. 01?0. 1 Μ PBS缓冲液清洗； c. 将10?20 μ L用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液配制的0· 01?0· 1 mg/ mL的亲和素溶液滴加到步骤（b)所得玻碳电极表面，孵育5 min后； d. 将步骤（c)所得的玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液清洗后，作 为工作电极，饱和甘汞电极或者Ag/AgCl电极为参比电极，钼丝电极为对电极，构建三电极 系统，置入pH = 9?10的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液中，启动电化学反应，测试电化学发 光强度值，根据标准曲线Λ 1= 2493. 25 + 843.63 log (ηΜ)，计算得到待测样品溶液中 Hg2+的准确浓度CHg，单位为ηΜ。
[0022] 上述碳酸盐缓冲液中含1 mM的过氧化氢，采用的电化学方法为电位阶跃计时电流 法；电位阶跃：〇 V阶跃至1 V ;脉冲宽度：0. 25 s ;测量时间间隔：30 s。
[0023] 具体实施例三 1?选择性和1?灵敏性的检测试验 高灵敏性由具体实施例二体现，由于电化学发光强度的改变值Λ 1= ，与汞离子 浓度对数在0. 01?10 nM浓度范围内呈线性关系，因此，具体实施例一制备得到的检测汞 离子的固态电化学发光传感器对Hg2+的检测灵敏度达0. 01 nM。
[0024] 高选择性：以上述具体实施例二同样的实验条件，检测10 μ Μ的常见干扰离子： Pb2+，Mn2+，Co2+，Ni2+，Cu 2+，Zn2+，Cd2+，Mg2+，结果如图 4 所示。
[0025] 结果表明：0. 01 nM Hg2+造成传感器的Λ I为800左右，而10 μ M的常见干扰离 子造成传感器的Λ I均小于200,意味着1000000倍的常见干扰离子不影响检测，主要原因 为Hg2+与Τ碱基之间的T-Hg 2+-T错配、生物素和亲和素之间的特异性识别。
[0026] 具体实施例四 以上述具体实施例一制备得到的检测汞离子的固态电化学发光传感器为工作电极，以 上述具体实施例二同样的实验条件，检测高中低三种浓度的Hg2+标准溶液，结果如下表。
【权利要求】
1. 一种用于检测萊离子的固态电化学发光传感器，其特征在于：所述的工作电极表面 固载有电聚合的N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)，所述的N-(4-氨丁基）-N-乙基 异鲁米诺上依次组装有戊二醛、DNA1、通过T-Hg 2+-T错配结合的DNA2以及生物素。
2. 根据权利要求1所述的用于检测汞离子的固态电化学发光传感器，其特征在于：所 述的工作电极为玻碳电极。
3. -种根据权利要求1所述的用于检测汞离子的固态电化学发光传感器的制备方法， 其特征在于具体步骤如下： (1) 固载有DNA1玻碳电极的制备 a. 将直径为3?5 mm的玻碳电极依次用1. Ο μ m、0. 3 μ m、0. 05 μ m的三氧化二错 抛光处理，然后依次用乙醇、水超声清洗，水冲洗干净后，氮气吹干备用； b. 将步骤（a)所得玻碳电极置于含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)的&504 溶液中，进行循环伏安扫描，电压范围为-0.2?1.5 V，以0.01?0.1 V/s的扫速循环扫 描20?30圈，使ABEI在玻碳电极表面电聚合；所述的含N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米 诺（ABEI) WH2S04溶液中N-(4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺（ABEI)浓度为0.01?0.0001 mol/L，H2S04 浓度为 0· 1 ?1 mol/L ; c. 将步骤（b)所得玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净后， 在玻碳电极表面滴加1?3 wt%戊二醛溶液10?20 μ L，静置20?40分钟； d. 将步骤（c)所得玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净后， 在玻碳电极表面滴加含10 μ mol/L DNA1的pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液10? 20 μ L，静置20?40 min，使DNA1结合到电极表面； e. 将步骤（d)所得玻碳电极浸泡在10?20 μ L质量百分浓度为2%的牛血清白蛋白 溶液中，封闭1?2 h，即得固载有DNA1的玻碳电极； (2) 固态电化学发光传感器的组装 a. 配制一系列不同浓度的含汞离子的标准溶液，将标准溶液与含10 μ mol/L DNA2的 pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液按体积比1:1混合； b. 取步骤（a)所得的混合溶液10?20 μ L，滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面，室 温下孵育20?30 min后，用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液清洗； c. 取适量pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液配制0· 01?0· 1 mg/mL的亲和素 溶液，将10?20 μ L亲和素溶液滴加到步骤（b)所得玻碳电极表面，孵育5 min后； d. 将步骤（c)所得的玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液清洗后，即 得到用于汞离子检测的固态电化学发光传感器。
4. 根据权利要求3所述的一种用于检测汞离子的固态电化学发光传感器的制备方法， 其特征在于：所述的DNA1的结构式为：5' -NH2-(CH2)6-GACTGTCTCGTTCGCTTAG-3' ；所述的 DNA2 的结构式为：5' -biotin-CTATGCGTACGTGACTGTC-3'。
5. -种根据权利要求1-4中任一项所述的检测萊离子的固态电化学发光传感器的检 测方法，其特征在于具体步骤如下： (1)标准曲线建立 a.将权利要求3所述的固载有DNA1的玻碳电极用0. 01?0. 1 M PBS缓冲液冲洗干净 后，在pH = 9?10的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液中，启动电化学反应，测试电化学发光强 度I0; b.将权利要求3所述的用于汞离子检测的固态电化学发光传感器放入pH = 9?10 的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液，启动电化学反应，测量电化学发光强度，获得一系列不同浓 度的Hg2+溶液对应的电化学发光强度值L，计算一系列不同浓度的Hg 2+溶液电化学发光强 度的改变值Λ 1= L-Ii，建立电化学发光强度的改变值Λ I与Hg2+溶液浓度之间的定量关 系； (2)待测样品测定 a. 将含汞离子的待测样品溶液与含10 μ mol/L DNA2的pH7?8的0. 01?0. 1 M PBS 缓冲液按体积比1:1混合； b. 取步骤（a)所得的混合溶液10?20 μ L，滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面，室 温下孵育20?30 min后，用pH = 7?8的0· 01?0· 1 M PBS缓冲液清洗； c. 将10?20 μ L用pH = 7?8的0.01?0· 1 M PBS缓冲液配制的0.01?0· 1 mg/ mL的亲和素溶液滴加到步骤（b)所得玻碳电极表面，孵育5 min后； d. 将步骤（c)所得的玻碳电极用pH = 7?8的0. 01?0. 1 M PBS缓冲液清洗后，作 为工作电极，饱和甘汞电极或者Ag/AgCl电极为参比电极，钼丝电极为对电极，构建三电极 系统，置入pH = 9?10的0.05?0.2 Μ碳酸盐缓冲液中，启动电化学反应，测试电化学发 光强度值，根据电化学发光强度的改变值△ I与Hg2+溶液浓度之间的定量关系，计算得到待 测样品溶液中Hg2+的准确浓度C Hg。
6.根据权利要求5所述的一种检测汞离子的固态电化学发光传感器的检测方法，其特 征在于：所述的碳酸盐缓冲液中含1 mM的过氧化氢，采用的电化学方法为电位阶跃计时电 流法；电位阶跃：〇 V阶跃至1 V ;脉冲宽度：0. 25 s ;测量时间间隔：30 s。
【文档编号】G01N27/30GK104155289SQ201410289966
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年6月25日 优先权日:2014年6月25日
【发明者】郭智勇, 陈贝贝, 沙玉红, 徐成银, 郝婷婷 申请人:宁波大学