超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂盒，所述的9种脂溶性维生素分别为：维生素A、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素；所述试剂盒包括如下试剂：洗脱液A、洗脱液B、洗脱液C、标准品母液、稀释液1、稀释液2、萃取液、质控品QC(L)、QC(M)、QC(H)。本发明试剂盒与现有技术相比具有如下优势：本发明试剂盒适用于超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析方法；该方法可以节省样品、节约时间、节约成本。
【专利说明】超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试 剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法，属于 分析检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 脂溶性维生素泛指可溶于脂肪及脂溶剂的一类维生素。本发明主要针对其中对人 体正常生长代谢及机能调节至关重要的9种维生素进行分析，包括维生素 A、α -生育酚、 生育酚、生育酚、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素。
[0003] 其中，维生素 Α对于良好的视力、胚胎和婴儿的正常发育、免疫系统的功能、生长、 骨骼的形成、繁殖及伤口的愈合都是必不可少的；α-生育酚、 Y-生育酚、δ-生育酚是维 生素 Ε的三种常见形式，它们是高度活跃的自由基清除剂，保护脂质膜不被氧化，α -生育 酚阻抑了蛋白酶C的活性，Υ -生育酚作为活性氮氧化物，是一种对抗在体内引发疾病的 化合物的强大后卫；胡萝卜素中比较重要的β_胡萝卜素可以转换成维生素 Α，胡萝卜的摄 入有助于消除动脉硬化、癌症、眼疾等疾病的发生；蕃茄红素是目前被发现的最强抗氧化剂 之一，它可以有效防治因衰老、免疫力下降引起的各种疾病；辅酶Q10是一种强还原剂，能 防止脂质过氧化；叶黄素是一种性能优异的抗氧化剂，可抵御氧自由基在人体内造成细胞 与器官损伤，另外对于保护视力、降低白内障的发生率、延缓动脉硬化、抗癌等都有非常重 要的意义。
[0004] 上述这些脂溶性维生素与人体正常生长发育，代谢功能都息息相关，其在血清中 含量的检测对考察这些物质在体内的代谢途径、探查疾病机理以及考察某些药物的作用效 果等等都有着指导意义。目前尚未见同时检测这9种物质的方法及试剂盒的相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种能够利用超高效液相色谱技术同时测定 血清中9种脂溶性维生素的试剂盒。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0007] -种超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂盒，所述的9种 脂溶性维生素分别为：维生素 A、α -生育酚、Υ -生育酚、δ -生育酚、α -胡萝卜素 、β -胡 萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素；
[0008] 所述试剂盒包括如下试剂：
[0009] (1)洗脱液：
[0010] 洗脱液A :0· 1% ν/ν三氟乙酸水溶液；
[0011] 洗脱液Β:乙醇；
[0012] 洗脱液C :0· 1% ν/ν三氟乙酸甲醇溶液；
[0013] (2)标准品母液：含有维生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡萝卜 素、β-胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素标准品的乙醇溶液；
[0014] (3)稀释液：
[0015] 稀释液1 :空白血清基质溶液；
[0016] 稀释液2:乙醇；
[0017] ⑷萃取液：正己烷；
[0018] (5)质控品：含有维生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡萝卜素、 β-胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素标准品的空白血清基质溶液，分高中低三个浓 度分别为 QC (L)、QC (Μ)、QC (Η)。
[0019] 其中，标准品母液为含有7. 04μ g/mL维生素 Α、14. 58μ g/mLa -生育酚、8μ g/ mLY-生育酚、4yg/mLS-生育酚、4yg/mLa-胡萝卜素、6.85yg/mLP-胡萝卜素、 9. 8 μ g/mL辅酶Q10、3. 6 μ g/mL番爺红素和1. 96 μ g/mL叶黄素标准品的乙醇溶液。
[0020] 表1 9种脂溶性维生素质控品对应浓度（单位μ g/mL)
[0021]
【权利要求】
1. 超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂盒，其特征在于， 所述的9种脂溶性维生素分别为：维生素 A、α -生育酚、Y -生育酚、δ -生育酚、α -胡 萝卜素、β-胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素； 所述试剂盒包括如下试剂： ⑴洗脱液： 洗脱液A :0. 1 % ν/ν三氟乙酸水溶液； 洗脱液Β:乙醇； 洗脱液C :0. 1% ν/ν三氟乙酸甲醇溶液； (2) 标准品母液：含有维生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡萝卜素、 胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素标准品的乙醇溶液； (3) 稀释液： 稀释液1 :空白血清基质溶液； 稀释液2 :乙醇； ⑷萃取液：正己烷； (5)质控品：含有维生素 A、α-生育酚、Υ-生育酚、δ-生育酚、α-胡萝卜素、β-胡 萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素标准品的空白血清基质溶液，分高中低三个浓度分别 为 QC (L)、QC (Μ)、QC (Η)。
2. 根据权利要求1所述的超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析 试剂盒，其特征在于，标准品母液为含有7. 04 μ g/mL维生素 Α、14. 58 μ g/mL α -生育酚、 8 μ g/mL γ -生育酚、4 μ g/mL δ -生育酚、4 μ g/mL α -胡萝卜素、6· 85 μ g/mL β -胡萝卜素、 9. 8 μ g/mL辅酶Q10、3. 6 μ g/mL番爺红素和1. 96 μ g/mL叶黄素标准品的乙醇溶液。
3. 根据权利要求1所述的超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂 盒，其特征在于，所述的空白血清基质溶液为40mg/mL牛血清蛋白的水溶液。
4. 根据权利要求1所述的超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂 盒，其特征在于，QC(L)，QC(M)，QC(H)中9种脂溶性维生素的浓度见表1 ; 表1 9种脂溶性维生素质控品对应浓度（单位μ g/mL)
5. 根据权利要求1所述的超高效液相色谱法检测血清中9种脂溶性维生素的分析试剂 盒，其特征在于，所述的血清为人或动物的血清。
6. 权利要求1?5中任意一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于： (1) 洗脱液： 洗脱液A :配制0. 1% v/v三氟乙酸水溶液； 洗脱液B:乙醇； 洗脱液C :配制0. 1% v/v三氟乙酸甲醇溶液； (2) 标准品母液： 分别称取维生素 A 8. 8mg、δ -生育酚l〇mg、γ -生育酚10mg、α -生育酚9. llmg，分别 加入lmL含有0. 4g/L 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的乙醇溶液，另称取α -胡萝卜素 l〇mg、 β-胡萝卜素17. 12mg、蕃茄红素10mg、辅酶Q105mg、叶黄素20mg分别定容于2mL、10mL、 lmL、lmL、10mL正己烷中，分别得到各自标准品母液；分别从维生素 A、α -生育酚、γ -生育 酚、S -生育酚母液中移取40 μ L、80 μ L、40 μ L、20 μ L标准品母液用乙醇定容至1000 μ L 得到校正液Α，分别从α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、蕃茄红素、辅酶Q10、叶黄素母液中移取 40 μ L、200 μ L、20 μ L、100 μ L、50 μ L标准品母液用正己烷定容至1000 μ L得到校正液Β，分 别取A、Β各20 μ L用乙醇定容至1000 μ L，得到9种维生素标准品混合母液C，即得； (3) 稀释液： 稀释液1 :将4g牛血清蛋白用水定容至100mL制得； 稀释液2:乙醇； ⑷萃取液：正己烷； (5)质控品：取标准品母液40 μ L、100 μ L、400 μ L分别用空白血清基质溶液定容至 1000 μ L 得到。
7. 权利要求1?5中任意一项所述的试剂盒在利用超高效液相色谱技术测定血清中9 种脂溶性维生素中的应用。
【文档编号】G01N30/02GK104155385SQ201410440135
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】徐凤仙, 于嘉屏 申请人:上海迪安医学检验所有限公司