一种食品中小分子化合物胶体金检测试纸条的评价方法
【专利摘要】本发明公布一种食品中农兽药残留、添加剂等小分子化合物胶体金检测试纸条的评价方法。其特征在于：通过灵敏度验证、交叉反应验证、准确度试验、耐变性评价、批间变异性评价，进行实验室内实验；通过准确度验证，进行实验室间协同实验。该方法结合室内验证与室间协同实验两个单元，能对商品化胶体金检测试纸条进行较为准确的评价。
【专利说明】一种食品中小分子化合物胶体金检测试纸条的评价方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种胶体金检测试纸条的评价技术，尤其涉及一种食品中农兽药残 留、添加剂等小分子化合物胶体金试纸条质量评价方法。
【背景技术】
[0002] 试剂盒是能完成一个特定实验的必需的试剂/器材的集合，是应用最为广泛的快 速检测关键材料，随着国内、国际社会对食品安全的重视，相关的检测技术也得到了迅猛发 展。商品化试剂盒以其方便快捷、对环境设备及检测人员要求低、检测速度快、样品处理相 对简单、价格低和适于开发成携带方便等特点，特别适于现场监控、大量样本筛查和基层实 验室使用，是食品安全检测领域中具有发展前景和产业化的检测方法之一，在食品检测中 涵盖了农残、兽残、添加剂、重金属、生物毒素、过敏源、微生物、转基因等几乎所有领域。
[0003] 目前用于食品检测领域的商品化试剂盒从用途上区分，主要包括有用于化学类物 质检测的试剂盒与用于生物类物质检测的试剂盒。前者主要如甲醛快速检测试剂盒、二氧 化硫快速检测试剂盒以及如阿维菌素检测试剂盒、组胺检测试剂盒等，在包括农药、兽药、 过敏源、生物毒素、食品添加剂等检测领域越来越多地被使用；后者如微生物及病毒检测试 剂盒、大肠杆菌0157快速检测试剂盒、金葡SEB肠毒素快速检测试剂盒、霍乱弧菌快速检测 试剂盒等，用于转基因检测的如玉米转基因检测试剂盒等，发展前景广阔。
[0004] 从试剂盒种类上来分，胶体金快速检测试纸条是一种结合免疫技术和色谱层析技 术的检测方法，主要原理是将特异性的抗原或抗体以条带状包在NC膜的检测线上，胶体金 标记的抗原或着抗体吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的加样孔上后，通过毛 细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记的抗原或抗体，在移动至包被的抗原或抗体 的检测线处，如果样品中航油相应的抗原或抗体，包被在检测线上的抗原或抗体和胶体金 标记物与样品中的对应抗体或抗原结合，形成免疫复合物，胶体金府记载检测线处形成一 条可见的紫红色条带。它不需要加样、洗涤的步骤，5-10分钟便可得到直观实验结果，无需 仪器，非常适用于食品的现场快速检测。
[0005] 但鉴于包括胶体金快速检测试纸条在内的商品化试剂盒质量良莠不齐、评价技术 缺失、监管疏漏都阻碍了试剂盒产业的发展和试剂盒评价技术的应用。试剂盒的使用者、生 产者、监管者对评价技术都有急迫需求。
[0006] 目前国内外对可供借鉴的成熟的评价制度方案不多，而试剂盒本身的性质也使其 不能直接照搬其他产品的评价方案和技术，同时，各种复杂的食品基质会引起诸多干扰因 素，因此如何准确评价食品中小分子化合物胶体金检测试纸条的评价有较大的技术难度。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种食品中农兽药残留、添加剂等小分子化合物胶体金检测 试纸条的评价方法，以对待评价的商品化胶体金试纸条作出更为准确的评价。
[0008] 本发明的评价方法，其特征在于包括：通过结合室内验证与室间协同实验两个评 价单元，根据待评价试剂盒说明书提取特征参数设计评价指标，构架评价单元内各评价指 标的计算模型，对食品中小分子化合物的商品化胶体金检测试纸条进行较为准确的评价。
[0009] 实验室内测试实验，包括：
[0010] 灵敏度验证，以检出阳性结果次数占所有测试结果的比例进行测定；
[0011] 交叉反应验证，用于评价同类药物的交叉反应以及不同基体的交叉反应；
[0012] 准确度试验，用于评价对于不同食品基质，待评价试剂盒检测限的相对准确度；
[0013] 耐变性试验，包括确定测试样品和数量，选择需要评价的耐变因素。用于评价可能 影响检测结果的因素；
[0014] 批间变异与稳定性，用于评价待评价试剂盒的产品稳定性。
[0015] 实验室间协同实验，包括：
[0016] 准确度验证，用于评价在不同实验室、不同操作人员情况下，待评价试剂盒的准确 度。
[0017] 采用该评价方法，能够对待评价的商品化胶体金检测试纸条作出较为准确的评 价。
【具体实施方式】
[0018] 本发明的评价步骤如下：
[0019] (一）室内验证单元
[0020] 1、灵敏度验证
[0021] 用试剂盒提供的样品稀释液分别配制包括〇μg/L在内的6个浓度水平的标准溶 液，每个浓度水平分3天、每天2平行共检测6平行，以响应信号对浓度作图，列出回归方 程，并进行回归分析。
[0022] 配制标准溶液（购置的标准品）添加到经确证的空白样品（目标物含量 < 0.01μg/L)中，添加3个水平浓度；对照组为经确证的空白样品。采用目测方法进行测 试，对照组作5次平行测试，其他添加水平做20次平行测试，记录每次测试结果。
[0023] 计算每种测试样品的POD值，POD值为检出阳性结果次数占所有测试结果的比率。 = $，其中X为检出阳性结果次数，N为测定总次数。合格产品应满足下表规定的检 出概率要求：
[0024]
【权利要求】
1. 一种食品中农兽药残留、添加剂等小分子化合物胶体金检测试纸条的评价方法，其 特征在于：通过灵敏度验证、交叉反应验证、准确度验证、耐变性考察、批间变异考察，进行 实验室内测试实验；通过准确度验证，进行实验室间协同实验，以评价试剂盒的技术性能。 所述实验室内测试实验主要包括以下具体步骤： (1) 以检出阳性结果次数所占所有测试结果的比率即检出概率（POD)确定灵敏度； (2) 选择类似物或相同用途的小分子化合物添加至限量水平和10倍限量水平进行交 叉反应验证； (3) 按以下公式计算相对准确度（AC)进行准确度验证：
PA:胶体金检测试纸条方法与参考标准测试方法结果同为阳性的测试数，NA:胶体金 检测试纸条方法与参考标准测试方法结果同为阴性的测试数，N:所有样品的总测试数； (4) 对每一种影响检测结果的因素稍作改变进行耐变性检验，对发现可显著影响检测 结果的因素，进一步实验以确定该因素可接受的水平。
2. 如权利要求1所述的检出概率，其特征在于：基于经确证的阴性样品，根据胶体金 检测试纸条产品标示的检出限值，采用标准添加法制备三个浓度水平（检出限、1. 5倍检出 限、0. 5倍检出限）的试样，每个浓度水平试样平行测试20次，合格产品应满足下表规定的 检出概率要求：
【文档编号】G01N33/53GK104483474SQ201410717387
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月1日 优先权日:2014年12月1日
【发明者】邹明强, 王燕飞, 薛强, 刘彩虹, 马吉湘 申请人:中国检验检疫科学研究院