一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，包括底板，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，硝酸纤维素膜位于底板的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜的端部及对应的底板上，样品垫由底板的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫的端部，吸水垫由底板的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜的另一端部；金标垫端部与吸水垫端部之间外露的硝酸纤维素膜上依次设有与底板端面平行的检测线和质控线；所述金标垫是在玻璃纤维素膜材料上设有胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体涂层，临近金标垫的检测线上设有间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物涂层，临近吸水垫的质控线上设有羊抗鼠多克隆抗体涂层。
【专利说明】一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸
【技术领域】
[0001]本实用新型属于胶体金免疫检测领域，特别是一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，用于水体及尿液中间苯氧基苯甲酸的快速筛选检测。
【背景技术】
[0002]间苯氧基苯甲酸是多种常用拟除虫菊酯农药的共性代谢产物，常被用于人体对拟除虫菊酯农药混合暴露评估的生物标志物使用，由于间苯氧基苯甲酸比其母体化合物拟除虫菊酯农药具有更好的稳定性和迁移性，故实践中可以通过检测水体等环境样品中的间苯氧基苯甲酸来反应拟除虫菊酯农药的残留状况。
[0003]目前公开报道的间苯氧基苯甲酸检测方法，主要包括色谱方法、ELISA检测和其他生物分析方法。这些方法虽具有较高的检测灵敏度和选择性，但是均为实验室方法，必须借助复杂的仪器设备进行读数和专业的操作人员。并不适合野外样品的现场快速抽检或家庭自测使用。
[0004]免疫层析是出现于80年代初期的一种免疫分析方式，其以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上的受体发生高特异、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测带)，通过酶反应或直接运用可目测的标记物(如胶体金)而得到直观的实验现象，而游离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。目前，将免疫层析技术用于间苯氧基苯甲酸检测未见报道。
实用新型内容
[0005]针对上述问题，提供一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，适合野外样品快速抽检或家庭自测使用，检测结果溶液显现，本实用新型的目的是这样实现的:
[0006]一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，包括底板，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，硝酸纤维素膜位于底板的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜的端部及对应的底板上，样品垫由底板的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫的端部，吸水垫由底板的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜的另一端部；金标垫端部与吸水垫端部之间外露的硝酸纤维素膜上依次设有与底板端面平行的检测线和质控线；所述金标垫是在玻璃纤维素膜材料上设有胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体涂层，临近金标垫的检测线上设有间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物涂层，临近吸水垫的质控线上设有羊抗鼠多克隆抗体涂层。
[0007]本实用新型中，所述样品垫为亲水材料,其长1.5 cm,宽0.3 cm ;所述金标垫的长
0.8cm,宽0.3cm ;所述硝酸纤维素膜长2.5 cm宽0.3 cm ;所述吸水垫的长1.5cm,宽0.3cm,样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫的各交叠区域的长度为0.1cm0
[0008]本实用新型中，所述检测线与质控线间的距离为0.6cm。
[0009]本实用新型中，当水体或尿液等样本中不含间苯氧基苯甲酸，或含有小于试纸最低检测限的间苯氧基苯甲酸时，样品中的水分将溶解金标垫上的胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体层，胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体由于毛细作用向上迁移到达检测线后，与检测线上包被的间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物结合，金标抗体在检测线上不断沉积，逐渐形成肉眼可见的红线，过量的胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体沿硝酸纤维素膜继续迁移到质控线，与包被在质控线上的羊抗鼠多克隆抗体结合，也形成肉眼可见的红线。此时检测线的颜色将等于或深于质控线，检测结果为阴性。
[0010]当水体或尿液等样本中含有大于等于试纸最低检测限的间苯氧基苯甲酸时，样品中的间苯氧基苯甲酸将与胶体金标记的抗体特异性结合，从而抑制金标抗体与检测线上的间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白的偶联物结合，样品中的间苯氧基苯甲酸的含量越高，检测线的颜色越浅或完全抑制检测线出现，过量的金标抗体将继续迁移到质控线，形成肉眼可见的红线。此时检测线应为无色或浅于质控线，检测结果为阳性。
[0011]当质控线没有红线出现时，无论检测线是否出现红线，均判断为检测结果无效。
[0012]本实用新型提供的间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，具有快速灵敏、简单便携，可用肉眼直接观察检测结果，无需任何仪器读数和专业化操作等优点，适用于水体及尿液中间苯氧基苯甲酸的现场筛查检测。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸结构示意图。
[0014]图中，1、样品垫；2、金标垫；3、硝酸纤维素膜；4、吸水垫；5、检测线；6、质控线；7、底板。
【具体实施方式】
[0015]为了能够更清楚了解本实用新型的技术方案，以下结合附图与【具体实施方式】对本实用新型作进一步的详细说明。
[0016]实施例1制备间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸
[0017]间苯氧基苯甲酸、卵清蛋白、羊抗鼠多克隆抗体:均为美国Sigma公司商品化试剂。
[0018]间苯氧基苯甲酸单克隆抗体以及间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物的具体制备过程已在由文孟棠，刘媛，闻帅，张霄，王恒，刘贤金撰写的名称为“抗拟出虫菊酯农药广谱单克隆抗体的研制及鉴定”的论文在分析化学，2014，42 (9):1245 一 1252上公开发表。
[0019]胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体按照实验室按照常规方法制备。
[0020]由图1可见，本实用新型包括底板7，样品垫1、金标垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4，硝酸纤维素膜3位于底板7的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜3的端部及对应的底板7上，样品垫I由底板7的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫2的端部，吸水垫4由底板7的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜3的另一端部；金标垫2端部与吸水垫4端部之间外露的硝酸纤维素膜3上依次设有与底板端面平行的检测线5和质控线6。所述金标垫2是在玻璃纤维素膜材料上设有胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体涂层，临近金标垫2的检测线5上设有间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物涂层，临近吸水垫4的质控线6上设有羊抗鼠多克隆抗体涂层。
[0021]本实施例中，底板7为不吸水介质制成的一整块固态平板，可以是PVC胶板，吸水垫4和样品垫I均为亲水材料。
[0022]本实施例中，样品垫I长1.5 cm，宽0.3 cm。金标垫2长0.8 cm，宽0.3 cm。硝酸纤维素膜3长2.5 cm,宽0.3 cm。吸水垫4长1.5cm,宽0.3 cm。相邻各垫的交叠长度为0.1 cm。检测线5和质控线6分别与硝酸纤维素膜3端部的距离为1.0 cm和1.6 cm,检测线5和质控线6之间的距离为0.6 cm。
[0023]实施例2
[0024]用含有10%甲醇的PBS溶液配制浓度分别为8、4、2、1、0.5、0.25μ8/ιΛ浓度的间苯氧基苯甲酸溶液，同时设立含有10%甲醇的PBS溶液作为对照组，向96孔板的微孔中随机加入不同浓度的间苯氧基苯甲酸溶液和含10%甲醇的PBS溶液，200 μ L/孔，将实施例1制备的间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸的吸水垫端插入微孔，水样不得接触金标垫，室温静置10分钟。观察检测线和质控线显色结果。
[0025]结果判断标准:
[0026]当质控线6和检测线5均呈现红线，以及检测线5颜色等于或深于质控线6颜色时，均表示样品不含间苯氧基苯甲酸，或含有浓度小于胶体金试纸最低检测限的间苯氧基苯甲酸，判断结果为阴性。
[0027]当质控线6呈现红线，以及检测线5无色或颜色比质控线浅时，均表示样品中含有大于或等于胶体金试纸最低检测限的间苯氧基苯甲酸，判断结果为阳性。
[0028]当质控线6无色时，无论检测线5有无红线出现，均判断结果为无效，说明试纸失效，需要更换试纸重新测试。
[0029]在本实施例中，含有10%甲醇的PBS溶液配制浓度分别为8、4、2、1、0.5μ g/mL浓度的间苯氧基苯甲酸溶液样品的检查结果均为阳性，含有10%甲醇的PBS溶液配制浓度分别为0.25 μ g/mL浓度的间苯氧基苯甲酸溶液样品和含有10%甲醇的PBS溶液配制浓度对照组样品的检查结果均为阴性。
[0030]以上所述，仅是本实用新型的较佳实施例，并非对本实用新型作任何形式上的限制，在实际应用过程中，可以根据具体需要，对试纸中各垫的长、宽以及交叠长度等具体数值作出修改、变化，这些变化均落在本实用新型的保护范围内。
【权利要求】
1.一种间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，包括底板，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，硝酸纤维素膜位于底板的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜的端部及对应的底板上，样品垫由底板的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫的端部，吸水垫由底板的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜的另一端部；金标垫端部与吸水垫端部之间外露的硝酸纤维素膜上依次设有与底板端面平行的检测线和质控线；所述金标垫是在玻璃纤维素膜材料上设有胶体金标记的间苯氧基苯甲酸单克隆抗体涂层，临近金标垫的检测线上设有间苯氧基苯甲酸与卵清蛋白偶联物涂层，临近吸水垫的质控线上设有羊抗鼠多克隆抗体涂层。
2.根据权利要求1所述间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，其特征在于，所述样品垫为亲水材料，其长1.5 Cm,宽0.3 Cm ;所述金标垫的长0.8cm,宽0.3cm ;所述硝酸纤维素膜长2.5 cm宽0.3 cm ;所述吸水垫的长1.5cm,宽0.3cm,样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫的各交叠区域的长度为0.1cm0
3.根据权利要求1或2所述间苯氧基苯甲酸免疫胶体金检测试纸，其特征在于，所述检测线与质控线间的距离为0.6cm。
【文档编号】G01N33/558GK204228718SQ201420700215
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月20日 优先权日:2014年11月20日
【发明者】刘媛, 胡静, 林曼曼, 文孟棠, 刘贤金 申请人:江苏省农业科学院