用于使流体样品成像的系统和方法与流程

相关领域

用于分析粒子的系统和方法(包括使流体样品中的粒子成像)，其使用完全或部分自动化装置以区分和定量样品中的粒子(诸如血细胞)。例如，本公开的系统和方法可用于对生物流体中的粒子(诸如红血细胞、网织红细胞、有核红血细胞、血小板)进行计数和/或表征，并可用于基于图像和形态的白血细胞分类计数、分类、次分类、表征和/或分析。

背景技术：

血细胞分析是更常执行的医学检验之一，以用于提供患者健康状态的概况。可从患者身体抽取血液样品并储存在装有防止凝血的抗凝血剂的试管中。全血样品通常包括三大类血细胞，包括红血细胞(红血球)、白血细胞(白血球)和血小板(凝血细胞)。每种类别可进一步划分为成员亚类。例如，五大类或亚类的白血细胞(wbc)-中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞–各自具有不同形状和功能。红血细胞(rbc)亚类可包括网织红细胞和有核红血细胞。样品中的血细胞或其他粒子的数量和外观可根据病理状况、细胞成熟度和其他因素而有所差异。

可手动地或使用自动化分析仪进行全血细胞计数(cbc)和其他血细胞计数，从而估计rbc、wbc或血小板的浓度并以其他方式表征rbc、wbc或血小板。当手动地进行血细胞计数时，在显微镜载片上滴加一滴血液，涂抹成薄涂片，然后即可在光学显微镜下手动地检查。可使用组织学染料和染液对细胞或细胞结构进行染色。例如，瑞氏染液是一种组织学染液，其已被用于对血涂片进行染色以便在光学显微镜下检查。

自动化cbc可采用仪器或方法对包括rbc、wbc和血小板在内的不同类型的细胞加以区分，这些细胞可以单独计数。例如，对最小粒度或体积有要求的计数技术仅可用于对大细胞进行计数。

一些自动化分析仪(包括采用流式细胞术的一些自动化分析仪)基于在各个粒子或细胞沿着窄流路(诸如小管)穿过感测区域时的阻抗或动态光散射，对血液样品中的不同粒子或细胞的数量进行计数。流式细胞术方法已经被用于检测悬浮于流体中的粒子，诸如血液样品中的细胞，并在粒子类型、尺寸和体积分布方面对粒子进行分析，以便推断血液样品中相应粒子类型的浓度或粒子体积。

采用动态光散射或阻抗的自动化系统已经被用于获得全血细胞计数，该计数在一些情况下可包括以下的一种或多种：总白血细胞计数、红血细胞的总细胞体积(rbc分布)、血红蛋白hgb(血液中的血红蛋白的量)、平均细胞体积(mcv)(红细胞的平均体积)、mpv(平均plt体积)、血细胞比容(hct)、mch(hgb/rbc)(每个红血细胞的血红蛋白平均量)以及mchc(hgb/hct)(细胞中的血红蛋白的平均浓度)。自动化或部分自动化处理已经被用于促进白血细胞五部分分类计数和其他血液样品分析。

一些自动化分析仪使用基于图像的技术对流过流通池的流体中的粒子进行计数或以其他方式分析。采用成像技术和流通池的系统的一些例子在授予turner等人的美国专利no.6,825,926、授予kasdan等人的美国专利no.6,184,978、授予kasdan等人的美国专利no.6,424,415以及授予kasdan等人的美国专利no.6,590,646中有所描述。

虽然当前已知的用于粒子计数(诸如血液流体中的细胞或流体中其他类型的粒子)的技术、系统和方法和其他诊断分析可为医生、临床医生和患者提供实际益处，但仍可实现进一步改进。

技术实现要素：

在一些实施例中，用于使多种血液流体成像的方法包括：在样品分析系统中接收第一血液流体部分；对所述第一部分进行处理，以便增强第一类型细胞的成像能力；在所述样品分析系统中接收第二血液流体部分；在流通池中使所述第一部分成像；以及在所述流通池中使所述第二部分成像，其中所述第二部分的成像在所述第一部分的处理之后进行或至少部分地与所述第一部分的处理同时进行。

在一些实施例中，所述血液流体部分中的每一者的成像具有相关联的成像时间；所述血液流体部分中的每一者的处理具有相关联的处理时间；并且所述相关联的处理时间长于所述相关联的成像时间。

在一些实施例中，所述第一类型细胞包括白血细胞，并且所述第一部分的处理包括对所述第一部分的白血细胞进行染色和温育，以便增强所述白血细胞的成像能力。

在一些实施例中，每个成像步骤具有小于约40秒的持续时间。

在一些实施例中，用于所述第一部分的处理步骤具有大于约30秒的持续时间。

在一些实施例中，用于所述第一部分的处理步骤还包括在第一处理工位处使用加热元件对所述第一部分进行加热。

在一些实施例中，该方法还包括将第一血液流体样品输入到所述样品分析系统中；以及将所述第一血液流体样品分成所述第一和第二部分，其中所述第一部分的成像在第二部分的成像之后执行。

在一些实施例中，所述第二部分包含红血细胞，并且所述第二部分的处理包括获得足以使所述红血细胞成像的预定血液体积。

在一些实施例中，该方法还包括：在接收所述第一和第二部分之后，将第三血液流体部分和第四血液流体部分接收到所述样品分析系统中；对所述第三部分进行处理，以便增强所述第一类型细胞的成像能力；在所述流通池中使所述第三部分成像；在所述流通池中使所述第四部分成像；并且其中所述第二和第四部分两者的成像在所述第一和第三部分两者的成像之前发生。

在一些实施例中，该方法还包括：在输入所述第一血液流体样品之后，将第二血液流体样品输入到所述样品分析系统中；将所述第二血液流体样品分成第三血液流体部分和第四血液流体部分；以及对所述第三部分进行处理，以便增强所述第一类型细胞的成像能力；其中所述第一部分的处理的至少一部分在第一处理工位处发生，并且其中所述第三部分的处理的至少一部分在与所述第一处理工位分开的第二处理工位处发生。

在一些实施例中，该方法还包括：使所述第一部分与第一位置处的试剂进行接触，并随后将所述第一部分传送到所述第一处理工位；以及使所述第三部分与所述第一位置处的所述试剂进行接触，并随后将所述第三部分传送到所述第二处理工位。

在一些实施例中，该方法还包括将第一血液流体样品和第二血液流体样品输入到所述样品分析系统中，其中所述第一血液流体样品包括所述第一部分，并且所述第二血液流体样品包括所述第二部分；以及对所述第二部分进行处理，以便增强所述第一类型细胞的成像能力；其中所述第二部分的成像在所述第一部分的成像之后执行。

在一些实施例中，所述第二部分包含白血细胞，并且所述第二部分的处理包括对白血细胞进行染色和温育，以便增强所述白血细胞的成像能力。

在一些实施例中，所述第一部分的处理的至少部分与所述第二部分的处理的至少部分同时发生。

在一些实施例中，对所述第一部分进行处理包括在第一处理工位处对所述第一部分进行加热，并且对所述第二部分进行处理包括在与所述第一处理工位分开的第二处理工位处对所述第二部分进行加热。

在一些实施例中，对所述第一部分进行处理包括使所述第一部分与第一试剂位置处的试剂接触；并且其中对所述第二部分进行处理包括使所述第二部分与第一试剂位置处的试剂接触。

在一些实施例中，用于使多个血液流体部分成像的系统包括：样品流体系统，该样品流体系统具有：样品分离器阀系统、第一血液流体路径、与所述第一血液流体样品路径分开的第二血液流体路径、以及与所述第一和第二血液流体路径流体连通的公共血液流体路径，其中所述样品分离器阀系统与所述第一和第二血液流体路径流体连通，并且被配置成将包含第一类型细胞的第一血液流体部分递送到所述第一血液流体路径并将第二血液流体部分递送到所述第二血液流体路径，其中所述第一血液流体路径包括第一处理工位，该第一处理工位被配置成对所述第一血液流体部分进行处理，以便增强所述第一类型细胞的成像能力；以及流通池，该流通池具有进样口，该进样口与所述公共血液流体路径操作性地联接，使得当所述第一和第二血液流体部分处于所述样品流体系统中时，所述第一样品部分和所述第二样品部分分别沿着所述第一和第二血液流体路径被注射到通往所述进样口的所述公共路径中。

在一些实施例中，该系统还包括稀释室，该稀释室与所述阀系统和所述第二血液流体路径流体连通，使得所述阀系统先将所述第二血液流体部分递送到所述稀释室，再将其递送到所述第二血液流体路径

在一些实施例中，所述第一处理工位包括对所述第一血液流体部分进行温育的加热元件。

在一些实施例中，该系统还包括温度传感器和控制器，这些温度传感器联接到所述流通池或所述流体系统以便产生温度读数，并且所述控制器被配置成从所述温度传感器接收所述温度读数，并调节所述加热元件的操作，使得所述第一处理工位中的所述第一血液流体部分保持在所需温度。

在一些实施例中，该系统还包括稀释剂泵，该稀释剂泵被配置成将稀释剂注射到所述第二血液流体路径，以便将所述第二血液流体部分递送到所述公共路径。

在一些实施例中，该系统还包括进样泵，该进样泵被配置成将流体注射到所述公共路径，以便将所述第二血液流体部分从所述公共路径递送到所述流通池的所述进样口。

在某个实施例中，该系统还包括稀释剂泵和真空泵，该稀释剂泵被配置成将稀释剂注射到所述第二血液流体路径的相当大部分并注射到所述稀释室，并且该真空泵被配置成将所述稀释室和所述第二血液流体路径的相当大部分中的所述稀释剂排空。

在一些实施例中，所述第二血液流体部分包含所述第一类型细胞；所述第二血液流体路径包括第二处理工位，该第二处理工位被配置成对所述第二血液流体部分进行处理，以便增强所述第一类型细胞的成像能力；并且通过打开位于所述第一处理工位处的第一和第二控制阀且关闭位于所述第二处理工位处的第三和第四控制阀，而将所述第一血液流体部分导向至所述第一处理路径。

在一些实施例中，所述第二血液流体部分包含所述第一类型细胞；所述第二血液流体路径包括第二处理工位，该第二处理工位被配置成对所述第二血液流体部分进行处理，以便增强所述第一类型细胞的成像能力；并且通过关闭位于所述第一处理工位处的所述第一和第二控制阀且打开位于所述第二处理工位处的所述第三和第四控制阀，而将所述第二血液流体部分导向至所述第二血液流体路径。

在一些实施例中，该系统还包括绕过所述第一血液流体路径的旁路路径，其中通过所述旁路路径将所述第二血液流体部分导向至所述第二血液流体路径。

在一些实施例中，所述第二血液流体部分包含红血细胞，并且所述阀系统将所述流体系统分成所述第一血液流体路径和所述第二血液流体路径，该第二血液流体路径包括用于保持预定体积的所述第二血液流体部分的保持工位。

在一些实施例中，所述保持工位包括管道环路以及位于所述管道环路两端的一对保持工位阀。

在一些实施例中，用于使多个血液流体部分成像的方法包括：将第一样品的至少一部分接收到样品分析系统的内部流体系统中；在将所述第一样品的该部分接收到所述内部流体系统中之后，将第二样品的至少一部分接收到所述内部流体系统中；在将所述第一和第二样品接收到所述内部流体系统中之后，使所述第二样品的该部分流过流通池，并在其流过所述流通池时使所述第二样品的该部分成像；在使所述第二样品的该部分流过所述流通池之后，使所述第一样品的该部分流过所述流通池。

附图说明

图1是未按比例绘制的部分剖面示意图，示出了示例性流通池、自动对焦系统以及适于使用数字图像处理进行样品图像分析的高光学分辨率成像装置的操作方面。

图2是流通池的一个例子的透视图。

图3是沿着图2所示的流通池的线3-3截取的纵向中心剖面图。

图3(a)和图3(b)是流通池的其他例子的剖面图。

图4示出了成像系统的另一个例子的各方面。

图5和图6示出了流动料流应变速率的例子。

图7–图12示出了各种流体样品的处理和成像的时序或分段的例子。

图13(a)–图13(m)示出了自动化成像系统的流序不同的流体系统的例子。

具体实施方式

本公开涉及用于对包含粒子的流体样品进行分析的系统和方法。一些实施例涉及包括分析仪(其可为例如视觉分析仪)的自动化粒子成像系统，以及用于对流体样品或样品部分进行导向和分段以便成像的流体系统/子系统和方法。在一些实施例中，所述视觉分析仪还可包括促进图像自动化分析的处理器。

所述分析系统可用于例如表征生物流体中的粒子，诸如检测和定量红血球、网织红细胞、有核红血细胞、血小板和白血细胞，包括白血细胞分类计数、分类和次分类及分析。本发明的实施例还涵盖其他类似用途，诸如表征血细胞或来自其他流体的其他粒子。

(1)流通池、成像和分析

为了促进对粒子(诸如血细胞)进行分类和/或次分类的能力、速度和有效性，可能有利的是，提供血细胞的清晰高质量图像以供数据处理系统进行自动化分析。在一些实施例中，将血液流体样品或样品部分引入流动鞘流体中，并在变窄流路过渡区内压缩合并的鞘流体和样品流体，从而减小样品带流体流的厚度。因此，可以通过周围的粘性鞘流体，例如与变窄过渡区所提供的几何聚焦作用相结合，使粒子(诸如细胞)在血液流体样品内取向和/或压缩。类似地，在一些非限制性实施例中，可能因样品流体与鞘流体之间的粘度差异，例如与变窄过渡区所提供的几何聚焦作用相结合，而使得血细胞内的内部特征配向和取向。血细胞(诸如这些血细胞)的排布方式可有利于获得血细胞的高质量图像以供数据处理系统进行分析。

现在转到附图，图1示意性地示出了流通池22，该流通池用于将样品流体或流体部分传输经过高光学分辨率成像装置24的观察区23，该高光学分辨率成像装置采取适于使用数字图像处理使样品流动料流32中的微观粒子成像的构型。流通池22联接到样品流体或样品部分的源25，一些或所有样品流体或样品部分可能已经受处理，诸如与粒子造影剂组合物接触并加热。流通池22还联接到粒子和/或细胞内细胞器配向液体(pioal)或其他类型鞘流体(其在一些情况下可为粘度大于样品流体的粘度的透明甘油溶液)的一个或多个源27。

在图1中，样品流体被注射通过样品进料管29的远端28的变平开口，并在一定的点进入流通池22的内部，在所述点已基本上确立了pioal流，从而在带形样品料流的上方和下方(或在其相对侧上)产生稳定和对称的pioal层流。样品和pioal料流可由注射器或其他类型的精密计量泵提供，该注射器或精密计量泵使pioal与注射的样品流体一起沿着大幅变窄的流路移动。pioal在流路变窄的区21中包围并压缩样品流体。因此，在区21处的流路厚度降低可有助于样品料流32的几何聚焦。样品流体带32被包围并与pioal一起被携带到变窄区21的下游，从而在高光学分辨率成像装置24的观察区23前经过或以其他方式穿过该观察区，在该成像装置中例如使用ccd48采集图像。处理器18可接收来自ccd48的像素数据作为输入。样品流体带与pioal一起流向排放口或废料口33。

如图1所示，变窄区21可包括具有近侧厚度pt的近侧流路部分21a和具有远侧厚度dt的远侧流路部分21b，以使得远侧厚度dt小于近侧厚度pt。样品流体可因此在位于近侧部分21a远侧和远侧部分21b近侧的位置注射通过样品管29的远端28。因此，样品流体可在pioal料流被区21压缩时进入pioal包层。

根据一些实施例，可以操作系统以对样品流体带32进行流体聚焦。术语流体聚焦可指在一些情况下(但不限于此)受鞘流体与样品流体之间的粘度差、流通池的几何变窄过渡区以及鞘流体与样品流体之间的速度差影响的聚焦作用。流体动力流可因样品流体料流与鞘流体料流之间的速度差而产生，该速度差影响流带厚度和形状。

图5和图6示出了根据本发明实施例的对于流通池中某些流动条件的剪切应变速率值的各方面。在这些附图的每一个中，均使用了30％甘油鞘流体。在一些情况下，粘度可具有2.45×10^-3的值。剪切应力值可等于粘度值乘以应变速率值得到的乘积。参照图5，样品可具有0.3μl/s的流速，而鞘流体可具有21μl/s的流速。参照图6，样品可具有1μl/s的流速，而鞘流体可具有70μl/s的流速。在这些图的每一个中，可以看出，流动展示出朝向中心(c)的更低的应变值和朝向周边(p)的更高的应变值。此类应变值在一些实施例中可对应于不对称流通池构型。

如图5所示，根据一些实施例，朝向流动料流的中心(c)部分的更低的应变速率可具有约500(1/s)或更低的值，而朝向流动料流的周边(p)的更高的应变速率可具有约3000(1/s)或更高的值。如图6所示，根据一些实施例，朝向流动料流的中心(c)部分的更低的应变速率可具有约1000(1/s)或更低的值，而朝向流动料流的周边(p)的更高的应变速率可具有约9000(1/s)或更高的值。

因此，可以看出，在该特定例子中，更低的样品和鞘流体速率(例如，图5)对应于更低的应变速率，而更高的样品和鞘流体速率(例如，图6)对应于更高的应变速率。应当理解，本发明的实施例涵盖使用对应于各种粘度值、各种应变速率值和/或各种剪切应力值的样品和/或鞘流体。

图1中的样品流体带和pioal流过具有物镜镜头46的数字高光学分辨率成像装置24，该成像装置沿着与带形样品料流32相交的光轴导向。物镜46和流通池22之间的相对距离可通过电机驱动器54的操作来改变，以便在光传感器阵列上分辨和采集聚焦的数字化图像。

流通池22的一个实施例进一步在图2和图3中示出。如此处所示，流通池22可与样品源25联接并且还联接到pioal材料的源27。经由插管29，例如通过插管29的远侧出口31，将样品流体或样品部分注射到流通池22中。通常，当pioal鞘流体从源27朝观察区23行进通过流通池中的弯曲通道区段41时，pioal鞘流体不处于层流状态。然而，流通池22可被配置成使得pioal鞘流体在流过其中样品流体被引入流动鞘流体中的远侧出口31时，pioal鞘流体为层流或变为层流，或呈现平坦速度剖面。样品流体和pioal可在总体上由箭头a指示的方向上沿着流通池22流动，然后经由排放口33流出流通池22。流通池22限定内部流路20，其在流动方向a上对称地变窄(例如，在过渡区21)，这在一些情况下可有助于样品料流的稳固且居中的流动。流通池22被配置成将被pioal包围的样品流32导向通过流通池中的观察区23，即观察口57之后。与观察口57相连的是自动对焦光栅44。流通池22还具有圆形或凹陷底座58，其被配置成接受或接收显微镜物镜(未示出)。

可对插管的长度和体积以及横截面变平进行选择以缩短样品流动不稳定的时间段，从而提高通过量。在一些实施例中，流动不稳定的时间段可小于约3、2.75、2.5、2.25、2、1.75、1.5、1.25秒或小于约1秒。更小的插管体积也可降低在样品运行之间清洗插管所需的时间和稀释剂的体积。在一些实施例中，流过流通池的通行时间为1、2、3或4秒，或那些时间中任何两个之间的任何范围。在一些实施例中，该通行时间可小于4、3或2秒。

图3a示出了流通池实施例，其中成像轴355与远侧过渡区部分316之间的距离为约8.24mm。远侧过渡区部分316与插管出口331之间的距离为约12.54mm。插管出口331与鞘流体入口301之间的距离为约12.7mm。插管出口331与近侧过渡区部分318之间的距离为约0.73mm。图3b示出了流通池实施例的各方面，其中与图3a实施例相比，插管出口已移动到相对于过渡区的更远侧位置。如此处所示，插管远端被推进到流通池的变窄过渡区中，并且成像轴355与远侧过渡区部分316之间的距离在约16mm至约26mm的范围内。在一些情况下，成像轴355与远侧过渡区部分316之间的距离为约21mm。

返回参照图1，流通池内部轮廓(例如，在过渡区21)以及pioal和样品流速在一些实施例中可被调整成使得样品形成为带形料流32。所述料流可近似地与包围在该带形样品料流中的粒子一样薄或甚至更薄。白血细胞可具有例如约10μm的直径。通过在一些情况下提供厚度小于10μm的带形样品料流，可在该带形样品料流被鞘流体或pioal拉伸时使细胞取向。令人惊讶的是，在一些实施例中，带形样品料流沿着变窄流路在粘度与所述带形样品料流不同(诸如更高粘度)的pioal层内的拉伸有利地在一些实施例中趋于使非球形粒子在基本上平行于流动方向的平面中配向，并对细胞施加力，从而提高细胞的细胞内结构的焦点内含量。高光学分辨率成像装置24的光轴基本上正交(垂直)于带形样品料流的平面。带形样品料流在成像点的线速度可为例如20-200mm/s。在一些实施例中，带形样品料流的线速度可为例如50-150mm/s。

带形样品料流厚度可受样品流体和pioal的相对粘度和流速的影响。样品流体的源25和/或pioal的源27(例如包括精密排量泵的流体系统/子系统)可被配置成以可控的流速提供样品流体和/或pioal以便优化带形样品料流32的尺寸，也就是优化为至少与高光学分辨率成像装置24的视野一样宽的薄带。

在一个实施例中，pioal的源27被配置成以预定的粘度提供pioal。该粘度可与样品的粘度不同，并且可以高于样品的粘度。对pioal的粘度和密度、样品材料的粘度、pioal的流速和样品材料的流速进行协调以在离自动对焦光栅的位移距离处保持带形样品料流，并具有预定的尺寸特性，诸如有利的带形样品料流厚度。

在一些实施例中，pioal具有比样品更高的线速度和比样品更高的粘度，从而在一些情况下将样品拉伸成平带。在一些实施例中，pioal粘度可最多至10厘泊。

也参见图2和图3，流通池的内部流路在带形样品料流向pioal中注射的点的下游变窄，以产生带形样品料流厚度，例如最多至7μm，和/或内部流路产生500-3,000μm的带形样品料流宽度。在一些实施例中，诸如图1所示，流通池的内部流路在样品料流向pioal中注射的点的上游开始出现变窄过渡区。

在一些实施例中，内部流路变窄以产生厚度为2-4μm的带形样品料流厚度，和/或内部流路形成宽度为2000μm的带形样品料流。在一些情况下，这些尺寸对于血液学尤其有用。料流在此情况下的厚度小于一些粒子(诸如处于其松弛状态的红血细胞)的直径。因此，在一些用途中，这些粒子可被重新取向，以使其更宽的尺寸面向成像轴，这可有助于揭示有区别的特性。

在一些实施例中，带形样品料流的线速度可被充分限制以防止在光传感器阵列的图像曝光时间时数字化图像出现运动模糊。光源可任选地为频闪灯，该频闪灯闪光而在短暂时间内施加高入射振幅。由于自动对焦光栅44和图像处于相同视野，光源被配置成同时照明带形样品料流和自动对焦光栅。然而，在其他实施例中，用于成像和用于自动对焦的视野可不同，例如单独地照明和/或成像。

图4示出了用于使血液流体样品、样品和/或样品部分中的粒子成像的系统400的另一个实施例。如此处所示，系统400包括样品流体注射系统410、流通池420、图像捕获装置430和处理器440。流通池420提供流路422，该流路传输鞘流体流(诸如pioal)，任选地结合样品流体一起传输。根据一些实施例，样品流体注射系统410可包括插管或管412或与插管或管412联接。样品流体注射系统410可与流路422流体连通(例如，经由样品流体入口402)，并且可以操作而将样品流体424注射通过插管412的远侧出口413并进入流通池420内的流动鞘流体426中以便提供样品流体料流428。

处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，该存储介质具有计算机应用程序，该计算机应用程序被配置成在被处理器执行时致使样品流体注射系统410将样品流体424注射到流动鞘流体426中。如此处所示，鞘流体426可通过鞘流体注射系统450(例如，经由鞘流体入口401)引入流通池420中。在一些实施例中，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，该存储介质具有计算机应用程序，该计算机应用程序被配置成在被处理器执行时致使鞘流体注射系统450将鞘流体426注射到流通池420中。

处理器440可与样品流体注射系统410、图像捕获装置430和任选的鞘流体注射系统450联接。处理器440可被配置成终止向流动鞘流体426中注射第一样品流体(或样品的第一部分)并开始向流动鞘流体426中注射第二样品流体(或样品的第二部分)使得样品流体瞬变被引发。例如，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，该存储介质具有计算机应用程序，该计算机应用程序被配置成在被处理器执行时致使样品流体注射系统410将第二样品流体注射到流动鞘流体426中使得样品流体瞬变被引发。

在一些实施例中，处理器440可被配置成在样品流体瞬变后和在使来自第一样品的第一多个粒子成像的4秒内，引发在流通池420的图像捕获位点432处捕获来自第二样品流体的第二多个粒子的一个或多个图像。例如，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，该存储介质具有计算机应用程序，该计算机应用程序被配置成在被处理器执行时致使图像捕获装置430在样品流体瞬变后和在使第一多个粒子成像的四秒内，引发在流通池420的图像捕获位点432处捕获来自第二样品流体的第二多个粒子的一个或多个图像。在其他实施例中，该系统可被配置成以将所述第一和第二样品流体的成像分开的其他时间段操作，这些时间段可涉及或可不涉及样品流体瞬变。

可使用流过流通池的样品流体或样品流体部分的图像执行多种血液学或血液粒子分析技术中的任一种。通常，图像分析可涉及确定某些细胞或粒子参数，或测量、检测或评价某些细胞或粒子特征。例如，图像分析可涉及自动化计算机处理，以评价或定量细胞或粒子尺寸、细胞核特征、细胞质特征、细胞内细胞器特征等。相关地，分析技术可涵盖某些计数或分类方法或诊断测试，包括白血细胞(wbc)分类。在一些情况下，使用流通池得到的图像可支持5部分wbc分类测试。在一些情况下，使用流通池得到的图像可支持9部分wbc分类测试。相关地，参照图4，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，该存储介质具有计算机应用程序，该计算机应用程序被配置成在被处理器执行时致使系统400基于得自图像捕获装置的图像区分不同类型的细胞。例如，基于计算机的诊断或测试技术可用于区分各种细胞(例如，中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞和母细胞)。

辨别血液样品中的血细胞是本发明实施例尤其适合的示例性应用，但不限于此。样品通过自动技术制备并作为薄带形样品料流(或样品的两个或更多个部分的系列)呈递给高光学分辨率成像装置，以在带形样品料流流经视野的同时周期性地成像。粒子(诸如血细胞)的图像可用像素图像数据编程的处理技术完全自动地或以有限的人工辅助而彼此区分、分类、次分类和计数，从而对细胞或粒子进行鉴定和计数。除了细胞图像(其可在粒子异常或关键特征的情况下存储和供使用)之外，输出数据还包括所记录样品图像中区分开的每种特别类目和/或亚类目的细胞或粒子的事件的计数。

可进一步处理存在于每个图像中的不同粒子的计数，例如用于积累整体样品中每种区分开的类目和/或亚类目的细胞的准确且统计上显著的比率。可稀释用于视觉辨别的样品，但在稀释样品中表示每种类目和/或亚类目中的细胞的比例，特别是在已处理多个图像后。

样品可以为生物样品，例如包含白血细胞的体液样品，包括但不限于血液、血清、骨髓、灌洗液、积液、渗出液、脑脊髓液、胸膜液、腹膜液和羊水。在一些实施例中，样品可以为实体组织样品，例如，已进行了处理而制成细胞悬液的活检样品。样品也可以为通过处理粪便样品而得到的悬液。样品也可以为包含粒子的实验室或生产线样品，诸如细胞培养样品。术语样品可用来指从患者或实验室获得的样品或者其任何级分、部分或等分试样。在一些过程中可将样品稀释、分成多个部分、或染色。

本公开还涉及用于将全血细胞计数(cbc)计数器与分析仪(诸如视觉分析仪)相结合的系统、方法和组合物，以便得到cbc以及基于图像的扩展白血细胞分类计数和基于图像的扩展血小板计数，从而扩大血小板计数的有效检测范围。

在一些方面，样品以自动化方式呈递、成像和分析。就血液样品而言，可用合适的稀释剂或盐水溶液充分稀释样品，这就降低了未稀释或稀释度较低的样品中一些细胞的视线可能被其他细胞遮挡的程度。可用增强一些细胞方面的对比度的试剂来处理细胞，例如使用透化剂使细胞膜具有透性以及使用组织学染液粘附于特征中并揭示特征，诸如颗粒和细胞核。在一些实施例中，可能有利的是，对样品的等分试样进行染色以用于对包括网织红细胞、有核红血细胞和血小板的粒子进行计数和表征，以及用于白血细胞分类、表征和分析。在其他实施例中，包含红血细胞的样品可在被引入流通池并成像之前进行稀释。

(2)流体系统和方法

上述实施例可结合到对大量流体样品进行处理、成像和/或分析的各种自动化系统或其他系统中。在一些情况下，此类系统的一个关注点是优化通过量或效率。例如，对于一些实施例(包括特定于血液流体的一些实施例)而言，可能希望系统具有每小时120个样品(或样品部分)的通过量或另一种相对较高的通过速率，诸如每小时60-180个样品、每小时超过60个样品、每小时超过100个样品或其他通过速率。

在一个非限制性例子中，目标通过量为每小时120个样品(或样品部分)的系统可能需要每30秒对样品(或样品部分)进行抽吸、处理和成像(及可能进行分析)，才能实现该目标通过量。然而，在一些情况下，一些步骤可能需要超过30秒才能完成。例如，对血液流体样品进行处理以做好样品中的白血细胞成像的准备，可能需要超过30秒才能完成(例如，可能需要大约45秒才能完成)。在此类情况下，除了流体样品顺序处理、成像和/或分析之外的附加措施可能有利于实现目标通过速率。上述时间和通过速率仅以举例的方式提供。本发明的其他非限制性实施例可涉及用于使流体样品成像的流体系统和方法，其中如果所有样品/样品部分仅以一系列的顺序次序简单处理和成像，则样品或样品部分的处理步骤所需或另外占用的时间段的长度会防止系统实现所需通过速率。

图7-图12示出了根据本发明各种实施例对样品/样品部分的处理和成像进行分段的各种实施例。应当理解，虽然针对图7-图12中反映的分段示出了特定时间，但可针对其他分段方法实施这些分段，在这些分段方法中一些步骤需要比其他步骤更长的时间。

图7示出了包括第一样品部分和第二样品部分的实施例。在该实施例中，在45秒时间段期间(在时间0至时间45期间)对第一样品部分进行处理，而在30秒时间段期间(在时间0至时间30期间)使第二样品部分成像，其中第一样品部分在其处理完成之后且在第二样品部分成像完成之后在30秒时间段期间(在时间60至时间90期间)成像。在图7-图12的实施例中，成像步骤被示出为在30秒时间段内发生；然而，在至少一些情况下，实际成像不会在整个30秒时间段期间发生，而可能需要小于30秒，诸如大约2-3秒、5秒、20秒或者在1与30秒之间的另一时间段。对于第一部分和第二部分而言，成像可能需要(或另外占用)不同时间量。例如，在一些实施例中，与未按与第一部分相同的方式处理的第二部分的成像相比，第一部分在处理之后的成像可占用长得多的时间段(例如，与使流体样品部分的红血细胞成像相比，使流体样品部分的白血细胞成像可能需要或另外占用更多的成像时间)。还应当理解，图7-图12所示的45和30秒时间段仅仅是示例，可以设想其他时间且这些时间也在本发明的范围内。

在与图7(和其他图)的实施例相符的一个例子中，所述第一样品部分可以是经处理而有利于或增强白血细胞成像的血液流体样品的一部分。处理可包括将所述第一样品部分与试剂混合或以其他方式接触，该试剂对所述第一样品部分中的白血细胞进行染色并裂解红血细胞。处理还可包括在与试剂接触之后通过施加热量来温育所述第一样品部分。虽然图7指示第一部分的处理在单个工位处发生，但在一些实施例(包括下文进一步描述的一些实施例)中，处理可在多个工位处发生。例如，所述第一样品部分可在混合室中与试剂混合，然后移动到单独的温育工位以完成其处理。

在与图7(和其他图)的实施例相符的一个例子中，所述第二样品部分可以是刚刚在上文讨论的血液流体样品的另一部分，其中该部分用于使样品中的红血细胞成像。在一些情况下，不需要充分处理第二样品部分或根本不对其进行处理。在一些情况下，所述第二样品可在成像之前进行稀释，但不与试剂接触，不以其他方式进行处理，或不以需要任何大量时间的方式进行处理。

在一些实施例中，与总体成像过程中涉及的其他步骤所需或另外占用的时间段相比，第一细胞类型的处理(例如，对血液流体样品的一部分进行染色和温育以增强样品部分中的白血细胞的成像能力)可能需要或另外占用更长的时间段。例如，在一些实施例中，处理血液流体样品的一部分(单独或与下文进一步描述的其他处理步骤相结合)可能需要或另外占用比该样品部分成像更多的时间。在这些和其他实施例中，与针对血液流体样品的其他部分(诸如未经处理以增强该样品部分中某些细胞类型的成像能力的样品部分)的整个过程需要或另外占用的时间相比，处理血液流体样品的一部分以增强该样品部分中某些类型的细胞的成像能力可能需要或另外占用更多时间。

虽然未在图7中具体示出，但对于本领域普通技术人员显而易见的是，图7(和其他图)所示的分段可对多个样品/样品部分重复多次。

图8示出了也包括第一样品部分和第二样品部分的实施例；然而，在该实施例中，所述第二样品部分在所述第一样品部分的处理和成像都完成之后才进行成像。

图9示出了包括第一血液流体样品和第二血液流体样品的实施例，这些血液流体样品包含多种细胞类型(例如，红血细胞、白血细胞和可能的其他细胞类型或粒子)。所述第一血液流体样品被分成第一部分(例如，在一些情况下，用于使所述第一样品中的白血细胞成像)和第二部分(例如，在一些情况下，用于使所述第一样品中的红血细胞成像)。所述第二血液流体样品被分成第三部分(例如，在一些情况下，用于使所述第二血液流体样品中的白血细胞成像)和第四部分(例如，在一些情况下，用于使所述第二血液流体样品中的红血细胞成像)。

在该实施例中，在时间0至时间45的45秒时间段期间对所述第一部分进行处理(例如，以裂解红血细胞并对白血细胞进行染色)，而可在时间0至时间30的三十秒时间段的至少一部分期间使所述第二部分成像(例如，以使所述第二部分中的红血细胞成像)。所述第三部分的处理(在时间30至时间75的45秒时间段期间发生)的部分也可在对所述第一部分进行处理的同时进行(重合部分在时间30至时间45发生，持续大约15秒)。所述第四部分的成像(在所述第二部分的成像之后，在时间30至时间60的三十秒时间段的至少一部分期间进行)在一些情况下可与所述第一和第三部分的处理重合。所述第一部分的成像在所述第二和第四部分的成像之后发生，并且可与所述第三部分的处理部分地重合。所述第三部分的成像在所述第一、第二和第四部分已成像之后且在所述第一和第三部分已处理之后发生。

如图9所示，所述第一血液流体样品的所述第一部分和所述第二血液流体样品的所述第三部分的处理的至少一部分可在不同处理工位处发生。例如，在其中所述第一和第三部分是要对白血细胞成像的血液流体样品部分的实施例中，所述处理可包括将样品部分与试剂混合或以其他方式接触(这可能需要相对较短的时间量，例如几秒)，并且还包括通过施加热量来温育样品部分(这可能需要相对较长的时间量，例如大约45秒)。在一些情况下，所述第一和第三部分可在相同混合室处(但在不同时间)与试剂混合，但在两个单独温育工位(图9中的“工位1”和“工位2”)处温育。在其他情况下，所述第一部分可在与所述第三部分分开的位置处进行混合和温育。在图9的实施例中，可大约每30秒对样品进行处理和成像，即便处理步骤因使用多个处理工位而需要超过30秒。

虽然图9中未明确示出，但可在获得所述第二血液流体样品并将其分成所述第三和第四部分之前，获得所述第一血液流体样品并将其分成所述第一和第二部分。例如，在一些实施例中，系统可将所述第一血液流体样品从容器(例如，样品管)抽吸到所述系统中，并将其分成所述第一和第二部分，然后在随后的时间，将所述第二血液流体样品从第二容器抽吸到所述系统中，并将其分成所述第三和第四部分。在一些情况下，可在与完成其他样品部分的成像大约相同的时间间隔处抽吸样品。例如，在图9中，可在时间30左右抽吸所述第二样品，该时间接近所述第二部分成像的完成。

如由例如图9(和其他图)所示的分段示出，一些实施例以非连续、交错或乱序的方式对各种样品和样品部分的处理和成像步骤进行分段。例如，所述第二血液流体样品(如上所述，其在一些情况下可为在所述第一样品之后接收到系统中的样品)的所述第四部分可在所述第一样品的所述第一部分之前但在所述第一样品的所述第二部分之后进行成像，其中所述成像步骤在所述第一和第二样品之间交错或交替进行，即便在所述第一样品的处理已经开始之后所述第二样品可能已被获得并接收到系统中。

图10示出了包括第一、第二、第三和第四血液流体样品的实施例，每种样品均包含至少所关注的第一类型细胞(例如，至少白血细胞)。在图10中，依次对四种样品的各部分进行处理和成像，并且该处理的至少部分(例如，温育步骤)在第一工位(图10中的“工位1”)或第二单独工位(图10中的“工位2”)处发生，使得对于多个样品部分而言，该处理的至少部分可在时间上重合或同时进行。具体地讲，在图10的实施例中，所述第一和第二样品部分的处理重合(其中第一部分在第一工位处进行处理，而第二部分在第二工位处进行处理)，所述第二和第三样品部分的处理重合(其中第三部分在第一部分的处理完成之后在第一工位处进行处理)，并且所述第三和第四样品部分的处理重合(其中第四部分在第二部分的处理完成之后在第二工位处进行处理)。在图10的实施例中，可大约每30秒对样品进行处理和成像，即便处理步骤因使用多个处理工位而需要超过30秒。

图11示出了包括第一、第二和第三血液流体样品的实施例，每种血液流体样品均包含至少两种细胞类型(例如，红血细胞和白血细胞)，并且每种血液流体样品均被分成两个部分(图11中的“第一部分”到“第六部分”)。与上述实施例中的一些一样，各种样品部分的成像步骤交错进行，使得成像按以下次序发生：(1)使第一样品中的第二类型细胞成像；(2)使第二样品中的第二类型细胞成像；(3)使第一样品中的第一类型细胞成像；(4)使第三样品中的第二类型细胞成像；(5)使第二样品中的第一类型细胞成像；以及(6)使第三样品中的第一类型细胞成像。图12与图11类似，不同的是其在分段中包括第四血液流体样品，使得成像按以下次序发生：(1)使第一样品中的第二类型细胞成像；(2)使第二样品中的第二类型细胞成像；(3)使第一样品中的第一类型细胞成像；(4)使第三样品中的第二类型细胞成像；(5)使第二样品中的第一类型细胞成像；(6)使第四样品中的第二类型细胞成像；(7)使第三样品中的第一类型细胞成像；以及(8)使第四样品中的第一类型细胞成像。与图9和图10一样，图11和图12利用两个单独工位处理第一类型细胞。

应当理解，图7–图12所示的步骤的特定持续时间和时序仅仅是示例，其他持续时间和时序也是可能的。作为一个替代例子，应当指出的是，在例如图10–图12中，“工位1”和“工位2”不是总在使用，因此可改变这些图示意性地指示的过程步骤的特定开始时间、持续时间和终止时间，而不影响这些图所示的分段。作为一个特定例子，在图10中，“工位1”被示出为在时间0至时间45以及时间60至时间105时使用，但不在时间46至时间59时使用，因此，可以对“工位1”处发生的过程的开始、持续时间和终止做调整，而不影响图10所示的总体分段，同时仍然提供需每30秒完成的成像步骤。

图13(a)–图13(m)示出了流体系统的一个实施例，该流体系统被配置成实施图7–图12所示的分段方法中的至少一些，包括图9–图12所示的多个工位实施例。在一些实施例中，图13(a)–图13(m)所示的流体系统充当(全部或部分)图1所示和上文所述的样品源25和pioal源27。在一些实施例中，图13(a)–图13(m)所示的流体系统充当(全部或部分)图4所示的样品流体注射系统410和鞘流体注射系统450。

图13(a)–图13(m)示出了穿过系统流到流通池1302的若干流体样品部分的进展，这些流体样品部分包括标记为wbc1、rbc1、wbc2和rbc2的样品部分(其中的一些样品部分直到图13(a)–图13(m)中的后面附图才引入)。在图13(a)–图13(m)所示的非限制性例子中，样品部分wbc1和wbc2表示将在流通池1302处对白血细胞成像的血液流体样品的部分，并且样品部分rbc1和rbc2表示将在流通池1302处对红血细胞成像的血液流体样品的对应部分。换句话讲，在所示的具体实施例中，rbc1和wbc1来自单一血液样品。

在图13(a)–图13(m)中，流体样品部分在样品分离器1304处被引入系统中。在所示的具体实施例中，样品分离器1304是剪切阀，该剪切阀被配置成从抽吸自管或其他容器的血液流体样品分离样品部分。该剪切阀可被配置成从抽吸的样品分离特定预定体积的流体样品部分。在一个例子中，从容器的一次抽吸就将在与剪切阀相连的若干(例如，两个)管道环路中注满流体样品部分。虽然未示出，但该系统可被配置成从大量样品管抽吸或以其他方式获得样品，这些样品管可保持在管架或其他大容量保持装置中。在一些实施例中，管架输送系统可将样品管顺序地移动成靠近探针，该探针从管抽吸样品，以便随后输送到上述剪切阀。在这些或其他实施例中，该系统还可包括在样品管保持在管架中的情况下用于将样品无序地引入系统中的人工输入或其他机构。

根据本发明实施例的血液学系统可处理体积为约150μl的血液样品。所抽吸的血液体积可为约120-150μl。在一些情况下，样品管中的最小可用血液体积对于自动采样模式而言为约500μl，并且对于人工采样模式而言为约250μl。

从图13(a)开始，首先分别在混合室1306和1308处接收来自样品分离器1304的流体样品部分wbc1(被示出为反斜阴影线)和rbc1(被示出为斜阴影线)。样品分离器1304可被配置成向混合室中提供特定且限定的体积的流体样品部分。在混合室1306处，wbc1与稀释剂和试剂混合或以其他方式接触，该试剂被配置成裂解流体样品部分中的红血细胞并对白血细胞进行染色。在混合室1308处，rbc1与稀释剂混合，但至少在该具体实施例中，不另作处理。泵1310可将稀释剂通过样品分离器1304泵送到混合室1306、1308中。在所示的具体实施例中，泵1310是注射器泵(以及下文所述的其他泵中的一些泵)，其可定期通过从装有大体积稀释剂的大容量容器(未示出)抽取稀释剂来再注满。泵1312(其也可为从大容量容器抽取试剂的注射器泵)可将试剂通过样品分离器1304泵送到混合室1306中。在一些实施例中，泵1310、1312可将稀释剂和试剂经由样品分离器1304泵送到适当的混合室中(而非直接泵送到混合室1306、1308中)，以便将特定且限定的体积的稀释剂和/或试剂供应到接近的混合室中。在一些实施例中，这也会将流体样品部分wbc1和rbc1从样品分离器1304移动到混合室1306和1308中。在其他实施例中，稀释剂和/或试剂可按另一种方式、以预定体积在预定时间内，或者按其他预定或非预定的方式，被直接泵送到混合室中或引入混合室中。在一些实施例中，混合可能需要五秒或更少，或在一些实施例中大约两秒。

如图13(b)所示，在混合之后，流体样品部分wbc1从混合室1306导向到第一温育工位1314中，并且rbc1从混合室1308导向到保持工位1316中。在所示的具体实施例中，wbc1穿过包括阀1318、1320、1322、1324、1326的流体回路，这些阀被配置成使得wbc1将流入第一温育工位1314中，并且在一些情况下，wbc1的一部分可流出第一温育工位1314并可从旁路流过第二温育工位1328。阀1318、1320、1322、1324、1326可为多通阀，它们可被致动(诸如通过基于处理器的控制系统)以将流过它们的流体导向到这些阀的不同出口，具体取决于此时阀的具体构型。因此，在图13(b)的具体例子中所示的时间段，阀1320和1322被配置成允许流体进入第一温育工位1314，而非绕过该工位，并且阀1324和1326被配置成防止流体进入第二温育工位1328，而是相反经旁路管线流过该工位。图13(b)中保持rbc1的保持工位1316接近阀1330、1332、1334。在图13(b)的具体例子中所示的时间段，阀1332和1334被配置成允许流体进入保持工位1316，而非经旁路管线流过该工位。

在所示的具体实施例中，泵1336、1338可用于将流体样品部分wbc1和rbc1抽取到图13(b)所示的流体回路的部分中。

在所示的具体实施例中，wbc1和rbc1的体积(在一些情况下，包括在稀释剂和/或试剂中混合的wbc1和rbc1的体积)分别大于第一温育工位1314和保持工位1316的流体容量，并且该系统被配置成使得如图13(b)所示，一些wbc1和rbc1在满载之后分别保留在第一温育工位1314和保持工位1316任一端之外的阀和/或通道中。在一些(但不一定所有)实施例中，这可有利于确保保持在第一温育工位1314和保持工位1316内的流体分别完全由混合的wbc1和rbc1构成，并且具有特定、限定和/或可重复的体积。在一些(但不一定所有)实施例中，这还可有利于确保任何可能存在的空气以及从混合室抽取的样品的开头或末尾不会存在于第一温育工位1314或保持工位1316中。

在一些实施例中，wbc1加载到第一温育工位1314中以及rbc1加载到保持工位1316中可能需要五秒或更少，或在一些实施例中大约三秒。

温育工位1314和1328可接近一个或多个加热元件(未示出)，该加热元件被配置成对保持在所述温育工位内的流体施加热量。在一些情况下，可包括一个或多个温度传感器或者其他功能，以直接或间接地在所述温育工位处测量温度或以其他方式调节温度。在一些情况下，可隔绝温育工位1314和1328和/或相关联的加热元件，以减少对系统的其他部件或区域的加热。在一些情况下，经处理而增强白血细胞的成像能力的wbc1和其他样品部分可在温育工位1314或1328之一处温育大约45秒。

在一些情况下，与图13(a)–图13(m)所示的其他步骤中那些样品部分需要或另外占用的时间段(单独或总共)相比，经处理而增强白血细胞的成像能力的wbc1和其他样品部分可在温育工位1314或1328之一处温育更长时间段。在一些情况下，经处理而增强白血细胞的成像能力的wbc1和其他样品部分可温育比系统的所需通过速率更长的时间段(例如，在所需通过速率为每30秒1个样品部分(或样品)的情况下温育45秒)。在所示的实施例中，与rbc1完成图13(a)–图13(f)所示的所有步骤所需或另外占用的时间相比，wbc1可在温育工位1314处温育更长时间。在所示的实施例中，与rbc1和rbc2完成图13(a)–图13(m)所示的所有步骤所需或另外占用的时间相比，wbc1可在温育工位1314处温育更长时间。

在一些实施例中，温育工位1314、1328和保持工位1316可为管道环路，这些管道环路的尺寸被设定为保持足够体积的流体样品部分以便在流通池1302处成像。在其他实施例中，可采用其他部件或构型以保持足够和/或预定的体积的流体样品。在再其他实施例中，可能不需要不同工位，并且该系统可被另行配置成处理流体样品部分或将流体样品部分导向到流通池1302，而无需分开的或不同的工位。

转到图13(c)，在加载之后，洗涤流体回路的各部分以去除过量wbc1和rbc1，诸如可分别处于第一温育工位1314和保持工位1316之外的流体回路中的过量wbc1和rbc1。可使用任何合适的流体(诸如在一些情况下，稀释剂和/或清洗流体)洗涤流体回路的各部分。在所示的具体实施例中，稀释剂(被示出为粗线)从泵1310、1336、1338泵出，使得稀释剂流过混合室1306、1308并流过阀1318、1320、1322、1324、1326、1330、1332、1334，其中一些阀被配置成使得稀释剂流绕过第一温育工位1314、第二温育工位1328和保持工位1316。然后将稀释剂作为废料去除。在一些实施例中，在真空泵1340帮助下，从系统中真空抽出稀释剂(被示出为交叉线)。在一些实施例中，洗涤过量的wbc1和rbc1可能需要五秒或更少，或在一些实施例中大约三秒。

虽然图中未示出，但在洗涤过量的wbc1和rbc1之后(或在重合的时间段期间)，稀释剂和/或清洁剂可被洗入流通池中。在一个实施例中，稀释剂可从泵1338泵出，经过阀1332、1334(在该时间段期间被配置成绕过保持工位1316)，经过附加管路和适当配置的阀，然后最终经过公共流体路径1342，其在此处进入流通池1302。在一些情况下，鞘流体也可同时流过流通池1302，诸如在图中所示的鞘流体泵1344、1346之一或两者的作用下。在一些实施例中，洗涤流通池可能需要五秒或更少，或在一些实施例中大约两秒。

转到图13(d)，该系统接下来可开始使rbc1流过流通池1302。在所示的特定实施例中，阀(包括阀1330、1332、1334)被配置成使得泵1338可将稀释剂泵送到保持工位1316中，从而开始将rbc1推出保持工位1316并最终进入公共流体路径1342，其在此处进入流通池1302。同时，鞘流体泵之一(例如，1344)可开始(或继续)泵送鞘流体(被示出为铁路线)经过流通池1302。在一些实施例中，初始推动rbc1经过流通池1302进行大约两秒，并且可在成像之前进行，以便灌注通往流通池和插管及流通池1302的其他部分的路径。

在图13(e)处，该系统在rbc1流过流通池1302时使rbc1成像。在所示的特定实施例中，泵1338继续泵送稀释剂经过保持工位1316(其中阀适当地配置)以继续推动rbc1经过流通池1302，而鞘流体泵之一(例如，1346)泵送鞘流体经过流通池1302。在所示的特定实施例中，泵1348还泵送稀释剂经过某些(适当配置的)阀和公共流体路径1342，以有利于推动rbc1经过流通池1302。在一些实施例中，将在来自泵1348的稀释剂到达流通池1302之前完成成像。在一些实施例中，该系统在rbc1流过流通池1302时使rbc1成像大约5秒。在其他实施例中，该系统使rbc样品部分成像持续其他时间段，诸如在1至30秒范围内的时间段。在一些实施例中，使用两个鞘流体泵可有利于向流通池1302提供恒定供应量的鞘流体。在其他实施例中，不需要具有多个鞘流体泵。

在图13(f)处，在rbc1已成像之后，稀释剂和/或清洁剂被洗入流通池中。在所示的特定实施例中，稀释剂从泵1338泵出，经过阀1332、1334(在该时间段期间被配置成绕过保持工位1316)，经过附加管路和适当配置的阀，然后最终经过公共流体路径1342，其在此处进入流通池1302。在所示的特定实施例中，鞘流体也同时流过流通池1302，诸如在图中所示的鞘流体泵1344、1346之一或两者的作用下。在一些实施例中，洗涤流通池可能需要五秒或更少，或在一些实施例中大约两秒。

虽然图中未示出，但随后可使用泵1336泵送稀释剂和/或清洁剂经过接近第一温育工位1314和第二温育工位1328的阀和其他部件，而将稀释剂和/或清洁剂洗入流通池中。

在图13(g)处，流体样品部分wbc2(被示出为正斜阴影线)和rbc2(被示出为短划阴影线)分别加载到第二温育工位1328和保持工位1316中(在图中未示出的步骤中与试剂和/或稀释剂混合之后)。按照此前所述的步骤中加载wbc1和rbc1的类似方式加载wbc2和rbc2，不同的是，例如，此处阀1320、1322、1324、1326被配置成使得wbc2绕过第一温育工位1314并进入第二温育工位1328。在一些实施例中，大约每30秒向系统中加载样品部分。

在图13(h)处，按照与上文在图13(c)中所述的洗涤步骤类似的方式，将过量的wbc2和rbc2洗入废料口。

在图13(i)处，该系统接下来开始按照上文针对图13(d)所述的类似方式使rbc2流过流通池1302。

在图13(j)处，该系统按照上文针对图13(e)所述的类似方式，在rbc2流过流通池1302时使rbc2成像。应当指出的是，在该过程的这个时候，现已在wbc1成像之前使两个rbc流体样品部分成像(包括rbc2，其在wbc1被接收并开始处理之后被接收到系统中)。

在图13(k)处，在rbc2已成像之后，按照针对图13(f)所述的类似方式将稀释剂和/或清洁剂洗入流通池中。

在图13(l)处，该系统接下来开始按照上文针对图13(d)所述的类似方式使wbc1流过流通池1302。在该过程的这个时候，wbc1已处于系统中大约50秒，并已经在第一温育工位中温育大约45秒。

在图13(m)处，该系统按照针对图13(e)所述的类似方式，在wbc1流过流通池1302时使wbc1成像。

虽然图中未示出，但本领域技术人员将认识到，可对附加样品重复图13(a)–图13(m)中所示的步骤。在一些实施例中，样品部分可按以下次序成像：rbc1、rbc2、wbc1、rbc3、wbc2、rbc4、wbc3、rbc5、wbc4…。换句话讲，可最初使两个rbc样品部分成像，然后使wbc样品部分成像，且后续成像在rbc与wbc样品部分之间交替进行。在一些实施例中，样品部分可按以下次序成像：rbc1、rbc2、wbc1、rbc3、wbc2、rbc4、wbc3、rbc5、wbc4…。rbcn、wbcn-1、wbcn。换句话讲，可最初使两个rbc样品部分成像，然后使wbc样品部分成像，且后续成像在rbc与wbc样品部分之间交替进行，并且在所有样品的成像结束时使两个wbc样品部分成像。

在附图中描绘或上文所述的部件的不同布置方式，以及未示出或描述的部件和步骤也是可行的。类似地，一些特征和子组合是可用的，并且可在不考虑其他特征和子组合的情况下被采用。出于示例性而非限制性的目的描述了本发明的实施例，并且可供选择的实施例对于本专利的读者而言将是显而易见的。在某些情况下，方法步骤或操作可按不同的顺序执行或实施，或者可对操作进行添加、删除或修改。应当理解，在本发明的某些方面，可用多个部件来替换单个部件，并且可以用单个部件来替换多个部件，以提供元件或结构或者执行给定的一种或多种功能。除了这种替换将不能有效实践本发明的某些实施例的情况之外，这种替换被视为在本发明的范围之内。因此，本发明不限于上文所述或在附图中描绘的实施例，并且可以在不脱离以下权利要求的范围的前提下，采取各种实施例和修改形式。