技术领域本发明涉及疾病生物标志物用途领域，特别涉及到肝硬化生物标志物VWF和ADAMTS13及其在肝硬化诊断试剂中的用途。
背景技术：
肝硬化是慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。在我国肝硬化的病死率仅次于恶性肿瘤，每年大约每10万人口即有154人死于肝硬化。在世界范围内，肝硬化也越来越成为临床常见的疾病之一，据统计肝硬化已成为世界三大致命病因之一。如何能够方便、快捷、及时、准确的检测诊断肝硬化，并对患者肝硬化治疗效果跟踪监控，已经成为肝硬化卫生领域迫切需要解决的问题。最早的肝硬化检测方法使用的是肝穿刺活检法，这种方法的诊断结果是肝硬化诊断行业内公认的较为准确的肝硬化诊断法。然而，这种方法易存在很大的局限性。首先，该方法为创伤性，不易被病人所接受；其次，操作时有并发症发生的可能，不宜进行频繁多次活检；第三，肝穿刺活检法穿刺样本小，只占到肝脏质量的1/50000，存在较大的取样误差。目前，我国诊断肝硬化应用较多的是B超。但是B超只是看到肝脏的形态，和病理并不直接相关，不能准确对肝硬化进行分析，无法判断肝硬化病情进展，并且对仪器及操作人员有较高的要求。CT和核磁检测方法对肝硬化的诊断很有帮助，但是此设备很昂贵，常规开展很困难，不适合中国国情。FibroScan技术已在中国起步，但多种因素影响FibroScan的准确性，如腹水，肝脏炎症，肥胖，脂肪肝等。相当一部分患者无法进行FibroScan的检查。由此本领域急需成本低廉、快速、简便、并且侵入性极小易于为病人接受的肝硬化诊断方法。VWF为英文vonWillebrandfactor的首字母缩写，中文可译为血管性血友病因子，www.uniprot.org网站登录号为P04275的条目对其氨基酸序列进行了披露。VWF是一种大分子蛋白质多聚体，主要用于VWD即血管性血友病的诊断。同时，公开号CN102614513A的中国专利“抗血管性血友病因子A3区双功能性单克隆抗体的应用”还公开了VWF在制备抗血栓药物中的用途。ADAMTS13为英文Adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs13的缩写简称。其他替代名称还有vonWillebrandfactor-cleavingprotease，中文可译为血管性血友病因子分解酶。www.uniprot.org网站登录号为Q76LX8的条目对其氨基酸序列进行了披露，共有3个亚基序列。
技术实现要素：
为了克服现有技术肝硬化诊断存在的种种缺点，本发明提供两种肝硬化生物标志物VWF和ADAMTS13。所述VWF由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI317373549的蛋白质组成，所述ADAMTS13由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI74749836的蛋白质组成。本发明的发明人发现，出现明显的肝硬化疾病症状之前的很长时间内就能鉴别出血清或其他体液中相关的生物标志物VWF和ADAMTS13。并且在肝硬化患病与否的人体血清中VWF或ADAMTS13的含量差异很大，由此可以考虑将人体血清中的生物标志物VWF和ADAMTS13的含量用作肝硬化诊断工具，并依据这些诊断工具的诊断结果实现对肝硬化患者的个体化用药。基于上述发现，本发明提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13在制备诊断肝硬化诊断试剂中的用途。本文所用术语通常定义如下：VWF：由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI317373549的蛋白质组成的蛋白质；ADAMTS13：由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI74749836的蛋白质组成的蛋白质；第一参考值：未发展成肝硬化的慢性肝病患者被试者血清中VWF的含量；第二参考值：未发展成肝硬化的慢性肝病患者被试者血清中ADAMTS13的含量；第三参考值：未发展成肝硬化的慢性肝病患者被试者血清中VWF含量与ADAMTS13含量的比值。所有本文未进行定义的术语皆与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同。具体的，方案之一：所述诊断试剂通过检测被试者血清中VWF的含量，并与第一参考值相比较来诊断肝硬化；方案之二：所述诊断试剂通过检测被试者血清中ADAMTS13的含量，并与第二参考值相比较来诊断肝硬化；方案之三：所述诊断试剂通过同时检测被试者血清中VWF和ADAMTS13的含量，并用两者的比值与第三参考值相比较来诊断肝硬化。在更为特定的方案中，可以使用电泳法，免疫化学法例如放射免疫测定测定、免疫荧光测定、酶联免疫吸附测定、化学发光、电化学发光、胶体金(免疫层析测量)、免疫比浊测定，特异性抗体结合法例如直接竞争法、间接竞争法、ELISA法、RIA法、流式细胞仪法、免疫层析法等常用检测方法来检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量。优选的，通过胶体金免疫层析法来检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量。进一步的，本文所述被试者血清可以用被试者全血、血浆、血细胞、腹水、淋巴液、唾液、痰液、汗液、尿液、粘液、间质液或者组织活检替代。本发明还提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而对慢性肝病患者进行肝硬化筛查的试剂盒中的用途。本发明还提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而对肝硬化患者的预后进行判断的试剂盒中的用途。本发明还提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而判断对肝硬化患者的手术或药物治疗是否有效和/或决定何时停止治疗的试剂盒中的用途。为了便于应用，本发明还提供一种用于诊断肝硬化的诊断试剂盒，该试剂盒包括底板、样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫；所述底板上设置有顺次相互搭接的样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫，所述金标垫涂有包含抗体一的胶体金溶液，所述NC膜上设置有检测线和质控线，所述检测线和质控线处分别涂有抗体二和抗体三。所述抗体一、抗体二和抗体三都为VWF的特异性结合抗体或者抗体一、抗体二和抗体三都为ADAMTS13的特异性抗体。所述抗体一为单克隆抗体。进一步的，所述诊断试剂盒中抗体一、抗体二和抗体三为VWF或ADAMTS13的特异性抗体片段。使用本发明生物标志物VWF和ADAMTS13对肝硬化疾病进行诊断具有如下突出有益效果：诊断过程操作简单易行、诊断过程安全无创伤易于为病人所接受、诊断标准统一受个人主观因素影响较小、诊断结果特异性和灵敏性高、易于进行大量筛查遴选等等优点。初步实验结果，通过检测本发明生物标志物VWF和/或ADAMTS13在人体血清中的含量，而进行肝硬化诊断的灵敏度高达80％以上，特异性高达90％以上。本发明详述：基于本发明人发现了两种新的肝硬化生物标志物，即存在于人体血清内的VWF和ADAMTS13。本发明分离两种蛋白质，第一种蛋白质即VWF由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI317373549的蛋白质组成或包括NCBI数据库中登录号为GI317373549的蛋白质；第二种蛋白质即ADAMTS13由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI74749836的蛋白质组成或包括NCBI数据库中登录号为GI317373549的蛋白质。本发明人通过对数百名肝硬化患者的血液进行检测分析发现，血清中的VWF和ADAMTS13的含量水平与肝硬化病变程度密切相关。因此血清中的VWF和ADAMTS13可以作为新的肝硬化标志物用于肝硬化的诊断和预后。特别的，本发明人发现，血清中的VWF和ADAMTS13的含量水平的比值作为肝硬化的诊断和预后指标有更好灵敏性和特异性。本发明还涉及检测血清中的本发明蛋白质(即VWF和ADAMTS13)含量水平的试剂盒。本发明的试剂盒包括本发明的蛋白质VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物。本发明的试剂盒可用于通过检测血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而进行肝硬化的诊断。本发明还涉及本发明的蛋白质及其特异性结合物在制备肝硬化诊断试剂盒中的用途，所述试剂盒例如可用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13的水平而诊断肝硬化的存在；用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13水平而对慢性肝病患者进行肝硬化筛查；用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13水平而对肝硬化患者的预后进行判断；或用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13水平而判断对肝硬化病人的手术或药物治疗是否有效和/或决定何时停止治疗。本发明中，本发明蛋白质的“特异性结合物”是指以高亲和力结合本发明蛋白质的分子。特别的，包括以高亲和力结合VWF和/或ADAMTS13的分子。所述“特异性结合物”优选VWF和/或ADAMTS13的特异性抗体或抗体片段，更为优选的，所述特异性抗体是单克隆抗体或抗体片段。本发明同时也涉及通过检测血清中的本发明蛋白质的水平，而对肝硬化进行诊断的方法。可通过任何合适的方法检测血清中VWF和/或ADAMTS13的含量。所述方法包括直接或间接测定本发明蛋白质在血清中的水平，以便有助于诊断肝硬化。直接测定的方法包括使用所述VWF和/或ADAMTS13的特异性结合物来检测本发明的蛋白质。所述特异性结合物可以为多克隆抗体，也可为单克隆抗体，对其所来源的动物种类没有限制。此外，抗体包括由免疫球蛋白全长构成的抗体和部分抗体。部分抗体是指含有抗原结合部位、具有抗原结合活性的抗体片段。此外，用标记物质标记抗体的情况下，作为标记物质，指的是例如：荧光物质(例如：FITC、若丹明、鬼笔环肽等)、金等胶体粒子、Luminex(注册商标，Luminex公司)等的荧光微球、重金属(例如金、铂等)、色素蛋白质(例如，藻红蛋白、藻蓝蛋白等)、放射性同位素(例如，3H、14C、32P、35S、125I、131I等)、酶等(例如，过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、生物素、链霉亲和素等物质，但不限于此。具体的，例如使用识别本发明蛋白质的特异性抗体进行ELISA检测。首先，将生物标志物对应的特异性抗体(抗体1)固定于微孔板等固相上。当对该固相添加血清时，血清中的生物标志物与抗体结合，形成免疫复合物。将剩余的血清除去后，添加识别与抗体1不同表位的、用标志物质标记的抗体(抗体2)，与生物标志物结合。将剩余的抗体2洗净除去后，测定在微孔板上残存的标记物质的量。预先作出示出向微孔板添加的标志物量与残存标记物质的量的关系的校准曲线，使用该校准曲线，可算出血液中的标志物量。间接测定的方法包括例如通过检测VWF和/或ADAMTS13的活性来反映VWF和/或ADAMTS13的浓度。本发明人经初步的研究证实，未患肝硬化的慢性肝病患者血清中VWF和ADAMTS13的含量范围分别是5704355～28972720ng/ml和318.4～768.3ng/ml，更集中于8579371～26303400ng/ml和429.9～625.0ng/ml；未患肝硬化的慢性肝病患者血清VWF和ADAMTS13的含量比值范围是9054.532～91004.04，更集中于13536.9～50563.2。处于肝硬化代偿期的患者的血清中VWF和ADAMTS13含量范围分别是12075480～46999200ng/ml和238.9～660.2ng/ml，更集中于18460920～36234580ng/ml和350.1～549.3ng/ml；处于肝硬化代偿期的患者的血清中VWF和ADAMTS13含量比值范围是34501.71～126663.3，更集中于53940.3～899741。处于肝硬化失代偿期的患者的血清中VWF和ADAMTS13含量范围分别是31456240～70655840ng/ml和104.8～560.0ng/ml，更集中于37005190～65421470ng/ml和185.3～469.8ng/ml；处于肝硬化失代偿期的患者的血清中VWF和ADAMTS13含量的比值范围是118746.6～231246.7，更集中于128448.6～168945.8。由以上数据，明显可以得出，人体内血清中VWF的含量：肝硬化失代偿期的患者明显高于肝硬化代偿期的患者，肝硬化代偿期的患者明显高于未患肝硬化的慢性肝病患者；人体内血清中ADAMTS13的含量：肝硬化失代偿期的患者明显低于肝硬化代偿期的患者，肝硬化代偿期的患者明显低于未患肝硬化的慢性肝病患者。缘此，人体血清中的VWF和ADAMTS13水平可以作为新的肝硬化标志物，用于判断肝硬化是否存在。优选的，可以同时检测VWF和ADAMTS13的含量，并通过VWF和ADAMTS13的比值与正常水平相比较来诊断肝硬化。经本发明人实验初步证实，以VWF和ADAMTS13比值作为诊断指标，具有更为优异的诊断结果。当VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值定为64747.76时，肝硬化诊断灵敏度为96.6％，特异性为81.4％；以VWF和ADAMTS13比值作为诊断指标，当VWF和ADAMTS13肝硬化失代偿比值临界值定为79928.59时，肝硬化失代偿诊断灵敏度为83.1％，特异性为94.9％。在具体实施中，本发明人初步建议可将VWF和ADAMST13含量比值的肝硬化临界值设定为64747.76，不足临界值的慢性肝病患者为未发生肝硬化群体，临界值以上的慢性肝病患者发生了肝硬化。可将VWF和ADAMST13的含量比值的肝硬化失代偿临界值设定为79928.59，不足临界值的慢性肝病患者为未发生肝硬化失代偿群体，临界值以上的慢性肝病患者发生肝硬化失代偿。肝硬化失代偿期患者治疗后，通过测定治疗前后所采集的血清中的VWF和ADAMST13含量比值，可预测该患者治疗效果。治疗后，VWF和ADAMST13含量比值下降的患者，可判断为治疗效果好，VWF和ADAMST13含量比值低于失代偿临界值79928.59时，该患者重新进入肝硬化代偿期。在一个具体方案中，本发明的试剂盒或方法可用于确定个体是否存在肝硬化。为此，可采用本发明的试剂盒或方法测定来自肝硬化疑似患者的血清样品内的VWF和/或ADAMTS13水平，并任选地与正常对照进行比较，然后根据样品内的VWF和/或ADAMTS13水平判断该患者出现肝硬化的可能性。在另一个具体方案中，本发明的试剂盒或方法可用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13水平而对慢性肝病患者进行肝硬化筛查。为此，可采用本发明的试剂盒或方法测定来自高危人群的血清样品内的VWF和/或ADAMTS13水平，并任选地与正常对照进行比较，然后根据样品内的VWF和/或ADAMTS13水平判断该人群中哪些个体可能已经出现肝硬化。在另一个具体方案中，本发明的试剂盒或方法可用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13水平而对肝硬化患者的预后进行判断。为此，可采用本发明的试剂盒或方法测定来自肝硬化患者的血清样品内的VWF和/或ADAMTS13水平，并任选地与正常对照或该患者以往的血清VWF和/或ADAMTS13水平进行比较，然后根据样品内的VWF和/或ADAMTS13水平判断该肝硬化患者的预后。VWF和/或ADAMTS13维持高水平或VWF和/或ADAMTS13水平进一步升高可能与不利的预后相关。据此，可提醒医生对该患者进行更加密切的观察，且必要时改变目前的治疗方案。在另一个具体方案中，本发明的试剂盒或方法可用于通过检测血清中的VWF和/或ADAMTS13水平而判断对肝硬化病人的手术或药物治疗是否有效和/或决定何时停止治疗。为此，可采用本发明的试剂盒或方法测定来自肝硬化患者的血清样品内的VWF和/或ADAMTS13水平，并任选地与正常对照或该患者以往的血清VWF和/或ADAMTS13水平进行比较，然后根据样品内的VWF和/或ADAMTS13水平判断对该肝硬化病人的手术或药物治疗是否有效和/或决定何时停止治疗。附图说明附图1为使用金标法试剂盒对正常人、慢性肝病患者、肝硬化代偿期患者及肝硬化失代偿期患者的血清中VWF进行检测的结果对比图；由附图1可知，伴随着肝硬化病情的发展，VWF的含量逐渐显著升高。附图2为使用金标法试剂盒对正常人、慢性肝病患者、肝硬化代偿期患者及肝硬化失代偿期患者的血清中ADAMTS13进行检测的结果对比图；由附图2可知，伴随着肝硬化病情的发展，ADAMTS13的含量逐渐显著降低。附图3为慢性肝病患者、肝硬化代偿期及肝硬化失代偿期患者血清中VWF的定量检测结果；对VWF的定量检测显示，慢性肝病患者、肝硬化代偿期及肝硬化失代偿期患者血清中VWF含量水平的均值分别约为1.7×107ng/ml、2.8×107ng/ml、4.7×107ng/ml。附图4为慢性肝病患者、肝硬化代偿期及肝硬化失代偿期患者血清中ADAMTS13的定量检测结果；对ADAMTS13的定量检测显示，慢性肝病患者、肝硬化代偿期及肝硬化失代偿期患者血清中ADAMTS13含量水平的均值分别约为560ng/ml、400ng/ml、350ng/ml。附图5为慢性肝病患者、肝硬化代偿期及肝硬化失代偿期患者血清中VWF与ADAMTS13的比值定量分布图；VWF与ADAMTS13的比值定量检测显示，慢性肝病患者、肝硬化代偿期及肝硬化失代偿期患者血清中VWF与ADAMTS13的比值的均值分别约为30000倍、70000倍、150000倍，存在显著差异。附图6为本发明金标法试剂盒的结构示意图；附图6中，1为样品垫，2为金标记抗体玻璃纤维膜，3为硝酸纤维素包被膜，4为吸水纸，5为PVC底板。具体实施方式下文将结合附图和具体实施例对本发明作进一步阐述，所列实施例目的是为了方便本领域技术人员更好地理解本发明的发明构思，其不应当理解成对本发明的保护范围的限制。在不违背本发明发明构思的前提下，仍可以做出若干个不同变化，这里无法进行一一穷举，这些不付出创造性的简单变化都应当涵盖在本发明的保护范围之内。本文所述实施例中所用到的试剂药剂皆为普通市售产品。所使用仪器也为行业通用设备仪器。所使用的VWF和ADAMTS13对应的抗体1、抗体2和多抗为普通市售产品，抗体的制备方法可以使用常规的抗体制备方法获得，此处不再赘述。实施例1：金标法试剂盒的制备及其在肝硬化诊断中的应用。一、试剂盒的制备：本试剂盒制备过程使用的抗体为VWF或ADAMTS13的特异性抗体。注意，同一试剂盒制备过程中：若金标记抗体玻璃纤维膜中使用的单抗1为VWF的抗体，则对应硝酸纤维素包被膜制备过程中使用的单抗2和多抗也应当使用VWF的抗体；若金标记抗体玻璃纤维膜中使用的单抗1为ADAMTS13的抗体，则对应硝酸纤维素包被膜制备过程中使用的单抗2和多抗也应当使用ADAMTS13的抗体。1、胶体金溶液的制备：将超纯水置磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾，按终质量浓度为万分之一的量迅速加入质量浓度为1％的氯金酸溶液，煮沸5分钟；再按所加入氯金酸溶液等体积量加入质量浓度为1％的柠檬酸三钠溶液，煮沸10分钟后，冷却至室温，用超纯水定容至氯金酸终浓度为万分之一，常温避光保存备用。2、金标记抗体玻璃纤维膜的制备：用2mol/L碳酸钾溶液调节胶体金溶液pH值至7.0。按3μg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入单抗1，混匀，静置10分钟；再按2％体积量加入浓度为20％的BSA溶液，混匀，静置10分钟；13000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用二十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺15平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥2小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。上述20％BSA溶液、标记洗涤液和金标抗体保存液的具体组分配比如下：a.20％BSA溶液：每1000mL超纯水中含牛血清白蛋白200g。b.标记洗涤液：每1000mL超纯水中含2g牛血清白蛋白，1g聚乙二醇20000，5g蔗糖，1.211gTris，并调节pH至7.6。c.金标抗体保存液：每1000mL超纯水中含10g牛血清白蛋白，1g聚乙二醇20000，10.2gTris，1g氢氧化钠，并调节pH至7.6。3、硝酸纤维素包被膜的制备：在硝酸纤维素膜上分别喷涂单抗2及多抗，并呈二条线平行排列，分别形成检测线和质控线，37℃烘干处理3小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。检测线：调试喷膜仪，喷液量为1.5μl/cm，用包被缓冲液稀释单抗2，浓度为2mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。质控线：调试喷膜仪，喷液量为1.5μl/cm，用包被缓冲液稀释多抗，浓度为2mg/mL，用喷膜仪喷涂划线。上述包被缓冲液的具体组分配比为：每1000mL超纯水中含牛血清白蛋白0.01g，十二水合磷酸氢二钠30.072g，磷酸二氢钾2.176g。硝酸纤维素包被膜上所划二条线应细致均匀，相邻两线间隔0.8cm。4、大板组条：大板组条各组分规格(长×宽)：PVC底板：30cm×8cm；样品垫：30cm×4.0cm；金标记抗体玻璃纤维膜：30cm×0.5cm；硝酸纤维素包被膜：30cm×2.5cm；吸水纸：30cm×3cm。各组分按如下方法进行组条：将硝酸纤维素包被膜的底面粘贴在PVC底板上，在该包被膜两端的上面分别粘贴金标记抗体玻璃纤维膜和吸水纸，在金标记抗体玻璃纤维膜上面粘贴样品垫；即在PVC底板上顺次相互搭接地粘贴样品垫、金标记抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维素包被膜和吸水纸，组成大板。组装车间的湿度要控制在30％以下。5、切条：用切条机将大板切成单条，每条宽度为4毫米，随机抽检，灵敏度能检出室内质控品，无非特异性条带。6、封袋与组盒：将1份已切好的试纸条、一包干燥剂和一根塑料滴管装在铝箔袋内，用封口机密封，密封完毕后放入试剂盒中，常温干燥保存。至此即分别得到检测VWF的试剂盒和检测ADAMTS13的试剂盒。二、使用上述试剂盒进行肝硬化的诊断：分别取正常人、慢性肝病患者、肝硬化代偿期患者和肝硬化失代偿期患者的全血，在24小时以内、低温条件下(4℃左右)送至实验室，须避免溶血，样品如果发生溶血，则重新采集。于4℃、6000g离心两次，取上清。采用上文制备的试剂盒检测VWF和ADAMTS13在血清中的含量。将检测结果与临床诊断进行对照，以验证血清中VWF和ADAMTS13的含量与肝硬化的相关性。检测结果如附图1和附图2所示。由附图1和附图2的检测结果可知，伴随着肝硬化病情的发展，VWF的含量逐渐显著升高，ADAMTS13的含量逐渐显著降低。实施例2：VWF和ADAMTS13作为肝硬化生物标志物的灵敏度和特异性研究。对本文所述的灵敏度和特异性进行定义：灵敏度：本文所述灵敏度是将实际患有肝硬化的慢性肝病患者正确地判定为真阳性的比例；或是将实际进入肝硬化失代偿期患者正确地判定为真阳性的比例。特异性：本文所述特异度是将实际未患肝硬化的慢性肝病患者正确地判定为真阴性的比例；或是将实际处于肝硬化代偿期的患者正确地判定为真阴性的比例。VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值：本文规定的一个VWF和ADAMTS13的含量比值数据，被试者血清中VWF和ADAMTS13的含量比值高于该数据即判定该慢性肝病患者患有肝硬化。VWF和ADAMTS13肝硬化失代偿比值临界值：本文规定的一个VWF和ADAMTS13的含量比值数据，被试者血清中VWF和ADAMTS13的含量比值高于该数据即判定该患者进入肝硬化失代偿期。本实施例所取的VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值和VWF和ADAMTS13肝硬化失代偿比值临界值分别是前文所述的64747.76和79928.59，本发明人对三百例的慢性肝病患者及肝硬化代偿期患者及肝硬化失代偿期患者VWF和ADAMTS13含量比值数据采用受试者工作特征曲线(即ROC曲线)分析，ROC曲线分析显示VWF与ADAMST13比值可用于诊断肝硬化以及肝硬化失代偿的发生，VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值(即肝硬化阈值)和VWF和ADAMTS13肝硬化失代偿比值临界值(即肝硬化失代偿阈值)分别是前文所述的64747.76和79928.59。使用前文所述的ELISA法对随机抽取的236例慢性肝病患者病例样本血清中VWF和ADAMTS13的含量进行定量检测。将检测结果及使用临床常规检测手段(CT、B超、肝穿刺活检法等)对应的确诊结果分别列于表1和表2。表1和表2中：VWF和ADAMTS13的单位都是ng/ml。表1病例号vWF/ADAMvWFADAMTS13常规手段确诊病例号vWF/ADAMvWFADAMTS13常规手段确诊1345265122544389354.9285肝硬化60100677.127740771.3275.5421肝硬化220415659763403292.734肝硬化6186218.342042023487.623未肝硬化325995.112269687472未肝硬化62122570.849520844.9404.0185肝硬化487701.8431846678363.1244肝硬化6364747.7620467350316.109未肝硬化571857.1721763223302.8678肝硬化6425975.116896248.5650.4787未肝硬化613501528908426214.1127肝硬化6572533.2917326288.1238.8736肝硬化716427.057269960.2442.5603未肝硬化66358944.952722293.5146.8813肝硬化816652.1210490836630未肝硬化6773453.5745551473.2620.1397未肝硬化910499938960552371.0563肝硬化6885128.5330635297.7359.8711肝硬化10145554.468379841469.7889肝硬化69109928.650552981.6459.8711肝硬化11109115.131800965291.4443肝硬化7025985.115155585.1583.2414未肝硬化12189535.323941704126.3179肝硬化71144870.765727909453.7005肝硬化1317175.545468132318.3674未肝硬化7269340.925763278.6371.5452肝硬化1484339.3162697843743.4未肝硬化7317145.5410836280.3632.0174未肝硬化15113056.540940337362.1229肝硬化7461801.531358081.1507.4未肝硬化16130591.346033881352.5035肝硬化7517155.5413358414.6778.6648未肝硬化1716417.055491359.6334.4913未肝硬化7636848.5719035352.2516.5832未肝硬化18407864.3143963022352.9679肝硬化7736838.5720920411.5567.8942未肝硬化1916622.1212411637746.694未肝硬化7858414.2128112790.7481.2663未肝硬化2070344.2228329193402.7224肝硬化7973463.5721277857.6289.6382未肝硬化21103680.935446165341.8775肝硬化8046888.2230170508.1643.456未肝硬化2261811.527093767438.3289未肝硬化8117212.938059804.72468.2413未肝硬化234988917460979349.9966肝硬化8284349.3135660878.2422.7762未肝硬化2491891.326439370287.7244肝硬化8373433.5750422490.6686.6409未肝硬化2593211.8448792297523.456肝硬化84383191.759872336.7156.2464肝硬化2686198.329323809340.1901未肝硬化85578643.4249404260431.0155肝硬化27420638.377930985185.2684肝硬化8684329.3153286241631.8828未肝硬化2861791.540449658654.6152未肝硬化87226598.9125309192553肝硬化29140422.225512172181.6819肝硬化88140397.634367586.2244.7876肝硬化3035327.7933806995956.9519未肝硬化89199905.352829885.2264.2746肝硬化31402754.2178360681442.8524肝硬化90116114.428908798.1248.9682肝硬化32209706.633412725159.3308肝硬化9117165.5413187697.3768.2658未肝硬化3346898.2223791088507.2919未肝硬化9235317.7934254895.5969.9048未肝硬化34161376.138240682236.9662肝硬化9316397.0512665835.4772.446未肝硬化3515310.696124276400未肝硬化94121303.412711227.7104.7887肝硬化3626005.110746342413.2398未肝硬化9558404.2132269770.6552.5247未肝硬化3778017.5628987050371.5452肝硬化9617182.9314190671.5825.8587未肝硬化38293474.2100960042344.0168肝硬化9758394.2145823571.6784.728未肝硬化3958384.2153633487918.63未肝硬化9815300.695748064.25375.6735未肝硬化40428898.6220859061514.9447肝硬化9973443.5734367107.1467.939未肝硬化41142269.538325444269.3862肝硬化100146422.844995140.7307.296肝硬化4264717.7647016510726.4854未肝硬化10146878.2233160202.3707.3691未肝硬化4364727.7638054952587.9232未肝硬化102194416.474381047.2382.5863肝硬化4416407.0511482970699.8802未肝硬化103158605.9107852012680肝硬化4580136.7544074940549.9966肝硬化10484098.5428356520.2337.1821肝硬化4669838.424650716352.9679肝硬化105228857.176288854333.3471肝硬化4785811.7921603225251.7512肝硬化10686228.317070270.5197.966未肝硬化4835347.7918576752525.5421未肝硬化10761781.546909341.2759.2781未肝硬化4936818.5734093224925.979未肝硬化108328530.5129930247395.4891肝硬化5063942.9822437061350.8917肝硬化10917202.935983733.96347.8323未肝硬化5117192.9313384696778.5未肝硬化11036828.5730271363821.9533未肝硬化52131040.873382826560肝硬化111196250.661473498.7313.2398肝硬化53474189.7148083271312.287肝硬化11235337.7921540792.2609.5682未肝硬化5416642.1212273564737.5未肝硬化11379014.8224240443306.7835肝硬化5586208.351678885599.4653未肝硬化11491738.1526112044.3284.6367肝硬化5615280.699844727644.2593未肝硬化11564737.7642922478.8663.0208未肝硬化5715290.695429040.4355.0553未肝硬化11646908.2220170534.6430未肝硬化5883000.227597298332.4968肝硬化117415614.2200159799481.6肝硬化59167824.179813785475.58肝硬化11816632.1210102069.7607.3832未肝硬化分析表1可知：对118例慢性肝病患者的VWF和ADAMTS13含量检测及临床确诊发现，59例确诊为未患肝硬化的慢性肝病患者，其中有48例VWF和ADAMTS13含量比值低于VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值64747.76，临床特异性为81.4％。59例确诊为肝硬化的患者，其中57例VWF和ADAMTS13含量比值高于VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值64747.76，临床灵敏度为96.6％。表2：分析表2可知：对118例肝硬化患者VWF和ADAMTS13含量检测及临床确诊发现，59例确诊为肝硬化代偿期患者，其中有56例VWF和ADAMTS13含量比值低于VWF和ADAMTS13肝硬化失代偿比值临界值79928.59，临床特异性为94.9％。59例确诊为肝硬化失代偿的患者，其中49例VWF和ADAMTS13含量比值高于VWF和ADAMTS13肝硬化比值临界值79928.59，临床灵敏度为83.1％。通过以上特异性及灵敏度研究可以得出，使用VWF和/或ADAMTS13作为肝硬化生物标志物对慢性肝病患者进行诊断，具有非常强的特异性及非常高的灵敏度。值得注意的是，肝硬化阈值和肝硬化失代偿阈值的确定并不是固定的，对更大的VWF和ADAMTS13含量比值试验样本进行ROC曲线分析，将能得到更为准确合理的阈值。用该阈值作为参考对被试者作肝硬化的诊断也更为合理准确。