妊娠期糖尿病的母体生物标志物的制作方法

妊娠期糖尿病的母体生物标志物的制作方法
【专利摘要】本文的实施方案涉及用于胎儿/母体健康的筛查工具的领域，并且，更具体地，涉及妊娠期糖尿病的生物标志物。在多个实施方案中，所述方法可提供用于妊娠期糖尿病的无创和微创筛查工具，其包括检测相对于参照样品，测试样品的蛋白质组图谱的改变。在具体的实施方案中，所述方法可包括确定来自所述受试者的测试样本的蛋白质组图谱是否包括至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征，其中所述蛋白质组图谱包含糖基化的纤连蛋白和糖基化的PSG的表达信息，例如纤连蛋白-SNA或纤连蛋白抗体复合物以及PSG-AAL或PSG抗体复合物的水平的信息。在一些实施方案中，所述蛋白质组图谱还可包含脂连蛋白、性激素结合球蛋白(SHBG)、C-反应蛋白(CRP)的表达信息、人绒毛膜促性腺激素(hCG)与胎盘催乳素的比例、或其组合。
【专利说明】妊娠期糖尿病的母体生物标志物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求于2012年4月13日提交的，题为"妊娠期糖尿病的母体生物标志物" 的美国临时申请No. 61/623, 690的优先权，所述申请的整个公开内容以引用的形式全文纳 入本文。

【技术领域】
[0003] 本文的实施方案涉及用于胎儿/母体健康的筛查工具的领域，并且，更具体地，涉 及妊娠期糖尿病的生物标志物。

【背景技术】
[0004] 在美国和全球，在过去的20年内，肥胖症和糖尿病的比率已迅速增长。伴随着肥 胖症和2型糖尿病的总体上升，妊娠期糖尿病（GDM)的发病率也在不断增加。预期采用基 于最近的商血糖症和不良妊娠结局（HAPO)研究的新的诊断标准能够将GDM的患病率提商 到约所有孕妇的18%。根据这样的事实--即可单独使用生活方式疗法来管理80-90%的 患有GDM的妇女，GDM的普遍筛查逐渐被认为是合理的。
[0005] GDM是妊娠的严重并发症，其可增加多种母婴疾病（包括巨大儿、肩难产或产伤、 早产、先兆子痫）的风险。除了与妊娠和分娩有关的并发症的风险增加以外，还有与GDM相 关的严重产后并发症。例如，发现5-10%的患有GDM的妇女在怀孕后立即患上糖尿病，并且 已经患有GDM的妇女在接下来的10-20年内发展成糖尿病的可能性高10倍。患有GDM的 母亲的孩子在以后的生活中发展成2型糖尿病风险高8倍。因此，无论是短期和长期，未经 治疗的GDM都会增加总的糖尿病人群。
[0006] 普遍或甚至广泛的GDM筛查受到以下事实的阻碍，即所述糖尿病和糖尿病前期的 标准评估（例如空腹胰岛素/葡萄糖和HbAlc)并不被推荐用于筛查GDM。相反，所推荐的 参数是口服葡萄糖耐量试验（OGTT)，所述试验成本昂贵且具有侵入性，需要医院就诊和多 次抽血。

【专利附图】

【附图说明】
[0007] 通过以下的详细描述并结合附图将很容易理解实施方案。附图中的实施方案仅作 示例而非限制性说明。
[0008] 图1示出了对照和GDM母体血清样本的二维差异胶内凝胶电泳（2D-DIGE)分析， 其中多个实施方案中，取决于过低或过高丰度的程度，丰度不同的蛋白质（箭头）呈现为绿 色或红色斑点。
[0009] 图2示出了依据多个实施方案的接收者操作特征（ROC)曲线，所述曲线证明了纤 连蛋白和妊娠特异性糖蛋白（PSG)糖基化区分来自具有和不具有妊娠期糖尿病的孕妇的 样本的能力。
[0010]图3示出了依据多个实施方案的ROC曲线，所述ROC曲线证明了作为单独分析物 以及作为多分析物模型的每一种蛋白质和蛋白糖基化模式的分类性能。
[0011] 图4示出了依据多个实施方案在35例非糖尿病对照中的整个孕期间对纤连蛋 白-SNA的连续测量，其中，直线代表所述GDM研究小组的第25和第75百分位数。
[0012] 图5是依据多个实施方案的接收者操作特征（ROC)曲线，所述曲线说明了孕期前 3个月纤连蛋白-SNA预测后续产生妊娠期糖尿病的能力。
[0013] 图6是依据多个实施方案的接收者操作特征（ROC)曲线，所述曲线说明了纤连蛋 白和PSG糖基化区分在妊娠的中间3个月和后3个月内的非糖尿病患者和妊娠期糖尿病患 者的能力。
[0014] 图7是依据多个实施方案的接收者操作特征（ROC)曲线，所述曲线说明了作为单 独分析物以及作为多分析物模型的每一种蛋白质和蛋白糖基化模式的分类性能。
[0015] 图8A和8B示出了依据本文公开的多个实施方案可使用的侧流免疫测定（图8A) 以及侧流检测装置（图8B)的实例的示意图。
[0016] 图9是示出了依据多个实施方案，将纤连蛋白ELISA结果和FNLFIA测试结果进行 比较的曲线图。

【具体实施方式】
[0017] 在以下的详细说明中，参考了构成本说明书的一部分的附图，并且在所述附图中 通过举例说明的方式示出了可实施的实施方案。应理解，可使用其他实施方案并且可进行 结构上或符合常理的改变，而不偏离本发明范围。因此，以下的详细说明不应以限制性含义 来理解，并且实施方案的范围由所附权利要求及其等价物来限定。
[0018] 各种操作可以以依次的多个独立操作进行描述，这种方式可以有助于理解实施方 案；但是，描述的顺序不应被解释为意味着这些操作的顺序是确定的。
[0019] 本说明书可使用基于视角的描述，例如上/下、后/前以及顶部/底部。这些描述 仅为便于讨论，并不意欲限制所公开的实施方案的应用范围。
[0020] 可使用术语"偶联"和"连接"以及它们的派生词。应理解，这些术语不意味着是 彼此的同义词。而是，在具体的实施方案中，"连接"可用于指示两个或多个元件彼此直接物 理接触或电接触。"偶联"可意指两个或多个元件直接物理或电接触。但是，"偶联"还可意 指两个或多个元件彼此不直接接触，但仍然彼此协作或相互作用。
[0021] 出于描述的目的，以"A/B"或"A和/或B"形式表示的短语意指（A)、（B)或（A和 B)。出于描述的目的，以"A、B和C中的至少一个"形式表示的短语意指（A)、（B)、（C)、（A 和B)、（A和C)、（B和C)或（A、B和C)。出于描述的目的，以"㈧B"形式表示的短语意指 (B)或（AB)，即，A是可选元件。
[0022] 本说明书可使用术语"实施方案"、"多个实施方案"，这些术语可各自指代一个或 多个相同或不同的实施方案。另外，如实施方案所使用的术语"包含"、"包括"、"具有"等等 都是同义词。
[0023] 本文在多个实施方案中公开了无创和微创方法，所述方法可用于妊娠期糖尿病的 广泛筛查。在多个实施方案中，所述方法可包括通过以下方式来确定来自受试者的测试样 本的蛋白质组图谱是否包括至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征：例如通过对糖基化 的纤连蛋白进行检测和/或定量（如通过对纤连蛋白-黑接骨木凝集素（SNA)或纤连蛋 白-抗体复合物进行检测/定量），和/或通过对糖基化的妊娠特异性糖蛋白（PSG)进行检 测和/或定量（例如通过对妊娠特异性糖蛋白-橙黄网胞盘菌凝集素（PSG-AAL)或PSG-抗 体复合物进行检测/定量），其中所述蛋白质组图谱包括糖基化的纤连蛋白的表达信息。在 一些实施方案中，所述蛋白质组图谱还可包括脂连蛋白、性激素结合球蛋白（SHBG)、C-反 应蛋白（CRP)、人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例、或者它们的组合（例如脂 连蛋白、SHBG、CRP、以及hCG和胎盘催乳素的比例中的两个、三个或全部四个）的表达信息。
[0024] 本文使用的术语"蛋白质组"是指在给定的时间内生物样本中的大部分蛋白质。一 般而言，所述蛋白质组与基因组是根本不同的，不同在于所述基因组几乎是静态的，而所述 蛋白质组则不断改变来响应内部和外部事件。因此，本文使用的术语"蛋白质组图谱"是指 在给定的时间内生物样本（例如全血、血浆、血清或唾液）中的多种蛋白质的表达模式的表 示形式。在多个实施方案中，例如，蛋白质组图谱可以表示为质谱，但是还包括其他基于蛋 白质的任何物化或生化特性的表示形式。因此，蛋白质组图谱可例如基于如由二维聚丙烯 酰胺凝胶电泳（2D-PAGE)或二维差异胶内凝胶电泳（2D-DIGE)确定的蛋白质的电泳性质的 差异，并且可表示为例如二维电泳凝胶中的多个斑点。在多个实施方案中，差异表达图谱可 具有重要的诊断价值，并且可例如通过质谱分析、免疫印迹、ELISA测定或蛋白质微阵列来 对蛋白质斑点进行检测和/或量化。在多个实施方案中，可使用侧流装置（例如用于旁床 检测，以及用于抽查比色测试）对蛋白质进行检测和/或定量。
[0025] 在多个实施方案中，依据本发明的蛋白质组图谱可代表或包含关于至少2、3、4、 5、6、7、8、9、10或甚至更多种蛋白质的信息。本文使用的术语"表达特征"是指在生物样本 (例如测试样本）的蛋白质组图谱中独特的蛋白表达特征或基序，所述蛋白质组图谱可能 在统计学上显著不同于相应的参照样本（例如从相同类型的生物体液中获得的）的蛋白质 组图谱。例如，在多个实施方案中，"妊娠期糖尿病特有的表达特征"可包括不同于正常参 照样本的蛋白质组图谱的特征基序，或者其可与来自妊娠期糖尿病参照样本的蛋白质组图 谱共有一个特征基序。在多个实施方案中，所述表达特征可包括两种或多种特定蛋白质的 表达的增加或降低，所述特定蛋白质是例如糖基化的纤连蛋白（例如，可将其作为纤连蛋 白-SNA或纤连蛋白-抗体复合物进行检测）、糖基化的PSG(例如，可将其作为PSG-AAL或 PSG-抗体复合物进行检测）、脂连蛋白、SHBG、和/或CRP，和/或所述表达特征可包括两种 或多种特定蛋白质的表达的比例（例如人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例） 的增加或降低。对于这些蛋白质中的每一种，列出了以下的示例性的GENBANK?登录 号：人纤连蛋白，Genbank登录号P02751 ;人妊娠特异性β-1-糖蛋白9,Genbank登录号 gi: 6093845 ;人性激素结合球蛋白，Genbank登录号gi: 134907 ;人脂连蛋白，Genbank登录 号gi:167077467 ;人绒毛膜促性腺激素β亚基，Genbank登录号gi:116184;人糖蛋白激素 α链，Genbank登录号gi: 121312 ;人胎盘催乳素，Genbank登录号gi: 190034 ;和人C-反应 蛋白，Genbank登录号gi: 30224。
[0026] 在一些实施方案中，所述方法包括检测增加，例如相对于参照样本的统计学显著 增加，例如在糖基化的纤连蛋白（例如，可将其作为纤连蛋白-SNA或纤连蛋白-抗体复合 物进行检测）和糖基化的PSG(例如，可将其作为PSG-AAL或PSG-抗体复合物进行检测）的 表达上的至少10%、15%、25%、50%、75%、100%、150%、200%、250%或甚至更大的增加， 或者除了CRP和/或hCG和胎盘催乳素的比例以外，还在糖基化的纤连蛋白（例如，可将其 作为纤连蛋白-SNA或纤连蛋白-抗体复合物进行检测）和糖基化的PSG(例如，可将其作为PSG-AAL或PSG-抗体复合物进行检测）的表达上的统计学显著增加。在一些实施方案中， 在糖基化的纤连蛋白和PSG(例如，纤连蛋白-SNA或纤连蛋白-抗体复合物和PSG-AAL或 PSG-抗体复合物）的表达上的统计学显著增加还可伴随着统计学显著降低，例如，相对于 所述参照样本，在脂连蛋白和/或SHBG的表达上至少10 %、15 %、25 %、50 %、75 %、100 %、 150%、200%、250%或甚至更大的降低。在具体的实施方案中，除了脂连蛋白和SHBG的表 达上的统计学显著降低以外，妊娠期糖尿病特有的表达特征还可包括在糖基化的纤连蛋白 (例如，作为纤连蛋白-SNA或纤连蛋白-抗体复合物被检测）、糖基化的PSG(例如，作为 PSG-AAL或PSG-抗体复合物被检测）、CRP的表达上以及hCG和胎盘催乳素的比例的统计 学显著增加。
[0027] 在多个实施方案中，如果所述参照样本是正常或对照参照样本（如来自不具有妊 娠期糖尿病的受试者的样本），并且所述测试样本的蛋白质组图谱在至少一种妊娠期糖尿 病特有的表达特征上不同于所述参照样本，则可确定所述受试者具有妊娠期糖尿病。相反， 如果所述测试样本在至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征上与所述正常参照样本没有 不同，则可确定所述受试者不具有妊娠期糖尿病。在其他实施方案中，如果所述参照样本是 妊娠期糖尿病参照样本（如来自具有妊娠期糖尿病的受试者的样本），并且所述测试样本 的蛋白质组图谱在至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征上不同于所述参照样本，则可确 定所述受试者不具有妊娠期糖尿病。相反，如果所述测试样本在至少一种妊娠期糖尿病特 有的表达特征上与所述妊娠期糖尿病参照样本没有不同，则可确定所述受试者具有妊娠期 糖尿病。一些实施方案可使用一种以上的参照样本，例如正常参照样本和妊娠期糖尿病参 照样本。因此，所述蛋白质组图谱提供了用于妊娠期糖尿病的诊断标准。用于确定相对于参 照样本，目的蛋白的丰度是否增加或降低的统计学方法是本领域熟知的，并且如下文所述。
[0028] 在多个实施方案中，可使用本领域技术人员已知的多种方法进行生物液体（例如 全血、唾液或血清）的蛋白质组分析。在多个实施方案中，在直接的比较分析中，可以完全 相同的方式处理所述参照样本和测试样本，以正确反映蛋白质的相对丰度并获得精确的结 果。例如，如以上所论述的，在多个实施方案中，可根据存在于生物样本中的蛋白质的电荷 和分子量通过二维-凝胶电泳将它们分离。例如，首先可使用等电聚焦（一维凝胶电泳）， 例如，使用固定PH梯度（IPG)胶条（其是可商购的），通过蛋白质的电荷将所述蛋白质进 行分离。在多个实施方案中，所述第二维度可以是SDS-PAGE分析，其中可将所聚焦的IPG 胶条用作样本。二维凝胶电泳分离后，然后可使用常规染料（例如考马斯亮蓝或银染）使 蛋白质显影，并使用已知的技术和设备（诸如，例如Bi〇-RadGS800光密度计和TOQUESTtm软 件）进行成像。
[0029] 在一些实施方案中，然后可将单个斑点从所述凝胶中切下、脱色、并进行胰蛋白酶 消化，从而使得所述肽混合物能够通过质谱（MS)进行分析。或者，在一些实施方案中，可例 如通过毛细管高压液相色谱（HPLC)分离所述肽，并可通过MS将它们单独地或混合地进行 分析。如果需要的话，在一些实施方案中，可确定所述肽片段的以及它们从其中衍生的蛋白 质的氨基酸序列。尽管有可能对存在于蛋白质组图谱中的所有或一些蛋白质进行鉴定和测 序，但这对于所述蛋白质组图谱的诊断用途来说通常不是必需的。
[0030] 如以上所论述的，在多个实施方案中，可基于参照样本和测试样本之间的特征相 似性或差异（例如表达特征）对妊娠期糖尿病进行诊断。例如，在多个实施方案中，如果所 述蛋白质组图谱以质谱的形式存在，则所述表达特征可以是性质上或数量上不同于相应正 常样本的质谱的峰或峰的组合。因此，质谱中新峰的出现或新峰的组合的出现，或在现有峰 或现有峰的组合的振幅或形状上的任何统计学上的显著变化，或者质谱中现有峰的消失都 可被认为是表达特征。
[0031] 用于比较蛋白质组图谱的统计学方法是本领域熟知的。例如，在使用质谱的多个 实施方案中，可通过在沿着谱图的水平轴的关键质量/电荷（M/Z)的位置处的峰幅值定义 蛋白质组图谱。因此，在多个实施方案中，可例如通过由在给定的M/Z值处的光谱振幅的组 合形成的图谱来表征特征性的蛋白质组图谱。在多个实施方案中，可通过使用合适的算法 将测试样本的蛋白组图谱与参照样本的蛋白质组图谱进行匹配来确定是否存在特征性表 达特征或两个图谱的实质同一性。
[0032] 其他实施方案可使用蛋白质阵列来检测蛋白质表达水平，能够实现高通量分析。 蛋白质阵列是本领域技术人员已知的，并且通常通过使用任何本领域熟知的各种共价和非 共价的连接化学作用将蛋白质（例如，特异性针对目的蛋白的抗体）固定在固体表面（例 如玻璃、硅胶、硝化纤维素、或PVDF)来形成。可使用来自两种不同来源（例如，正常和测试 样本）的荧光标记的蛋白质来探测所述阵列，荧光强度可反映靶蛋白的表达水平。
[0033] 多个实施方案还可使用任意的用于蛋白表达水平定量的多种免疫测定形式。一般 而言，免疫测定可以是均相的或非均相的。例如，在多个实施方案中，可使用酶联免疫吸附 测定（ELISA)来对蛋白质表达进行定量。在一个实施例中，在"夹心"测定中，固体表面可 涂有固相抗体，并且可使所述测试样品与所结合的抗体反应。然后，可将任何未结合的抗原 (例如，目的蛋白）洗掉，随后已知量的酶标记的抗体可进行反应。然后可将所述标记物作 为对所述样本中存在的目的蛋白含量的直接量度进行定量。
[0034] 在一些实施方案中，可将ELISA作为竞争性测定使用。例如，在竞争性测定中，可 将含所述目的蛋白的测试样本与精确量的酶标记的目的蛋白混合，并且两者可竞争结合连 接到固体表面上的抗体。在多个实施方案中，可在洗掉过量游离的酶标记的蛋白质后加入 所述酶的底物，从酶-底物相互作用中产生的颜色强度可作为测试样本中目的蛋白的量的 量度。
[0035] 多个其他实施方案可使用酶倍增免疫测定技术（EMIT)对目的蛋白进行定量，其 可包括测试样本、酶标记的目的蛋白分子、特异性针对目的蛋白的抗体、和特异性酶显色底 物。在多个实施方案中，可将过量的特异性抗体加入到所述测试样本中，然后所述目的蛋白 可结合到所述抗体上。在多个实施方案中，然后可将一定量的相应的酶标记的蛋白质加入 到该混合物中，未被测试样本中的目的蛋白占据的抗体结合位点会被所述酶标记的蛋白质 分子占据。因此，在多个实施方案中，酶活性可能会降低，这是因为只有游离的酶标记的蛋 白能够作用于底物，并且转化的底物的量可反映混合物中剩下的游离酶的量。在多个实施 方案中，所述样本中高浓度的目的蛋白可导致更高的吸光度读数。
[0036] 多个其他实施方案包括用于对测试样本中的目的蛋白进行定量的免疫测定试剂 盒。在多个实施方案中，这些试剂盒可包括：在单独的容器中的对每一种目的蛋白具有结合 特异性的单克隆抗体，和，任选地，抗体免疫球蛋白，特别是经标记的抗抗体免疫球蛋白。
[0037] 本文还公开了用于所述公开方法的捕获装置和样品收集试剂盒。在一些实施方 案中，可使用样品捕获装置一如可使得能够对两种或多种目的蛋白进行定量的侧流装置 (例如，侧流检测带）一进行所述公开方法。可获得多种不同构型的侧流装置，但是，在一 个实施例中，检测带可包括从上游的样品应用区到检测位点的流动路径，例如从样本应用 区通过移动区到捕获区。在多个实施方案中，所述移动区可包含可与目的蛋白相互作用的 可移动的标志物，所述捕获区可包含用于检测和/或定量的结合目的蛋白的试剂。在其他 实施方案中，示例性的样品收集试剂盒可包含吸收介质如滤纸，所述吸收介质可包含用于 将测试样品放置在所述介质上的标记。这类试剂盒还可包括用于从受试者中获得血液样本 的穿刺装置，以及任选的，用于将所述测试样品发送给医师或实验室以进行分析的邮件程 序。例如，可在标准产检过程中（例如，在12周、16周、20周或24周就诊时）使用这些样 品收集试剂盒，和/或可在获得用于其他标准产前测试的血液时进行样品收集。
[0038] 提供如下的实施例仅为了说明目的，不应被解释为以任何方式的限制。
[0039] 实施例
[0040] 实施例1:受试者选择
[0041] 连续共1463名处在妊娠中间3个月和最后3个月的妇女进行了 75克OGTT及随 后2小时血浆葡萄糖测定。2小时血浆葡萄糖>7. 8mmol/L则诊断为GDM，这与WHO标准一 致。将所有剩下的妇女都归类为非糖尿病患者。
[0042] 从所述人群中随机选取14名非糖尿患者和15名GDM参与者。表1中描述了参与 者的临床特征。
[0043] 表1.根据GDM状态的参与者特征
[0044]

【权利要求】
1. 用于确定受试者是否患有妊娠期糖尿病的方法，所述方法 包括： 确定来自所述受试者的测试样本的蛋白质组图谱是否包括至少一种妊娠期糖尿病特 有的表达特征，其中所述蛋白质组图谱包含糖基化的纤连蛋白和糖基化的PSG的表达信 肩、。
2. 权利要求1的方法，其中所述糖基化的纤连蛋白和糖基化的PSG的表达信息包含纤 连蛋白-SNA或纤连蛋白-抗体复合物、和PSG-AAL或PSG-抗体复合物的水平的信息。
3. 权利要求2的方法，其中所述蛋白质组图谱还包括以下的表达信息： 脂连蛋白； 性激素结合球蛋白（SHBG); C-反应蛋白（CRP); 人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例；或者 其组合。
4. 权利要求2的方法，其中所述蛋白质组图谱还包含以下中的两种或多种的表达信 息： 脂连蛋白； 性激素结合球蛋白（SHBG); C-反应蛋白（CRP);和 人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例。
5. 权利要求2的方法，其中所述蛋白质组图谱还包含以下中的三种或多种的表达信 息： 脂连蛋白； 性激素结合球蛋白（SHBG); C-反应蛋白（CRP);和 人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例。
6. 权利要求2的方法，其中所述蛋白质组图谱还包含以下的表达信息： 脂连蛋白； 性激素结合球蛋白（SHBG); C-反应蛋白（CRP);和 人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例。
7. 权利要求1的方法，其中确定所述测试样本的蛋白质组图谱是否包括至少一种妊娠 期糖尿病特有的表达特征包括将所述测试样本蛋白质图谱与参照蛋白质图谱进行比较。
8. 权利要求7的方法，其中所述参照样本是非糖尿病对照参照样本。
9. 权利要求8的方法，其中所述至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征包含相对于所 述参照样本，纤连蛋白-SNA和PSG-AAL的水平的增加。
10. 权利要求9的方法，其中所述至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征还包含相对 于所述参照样本，以下表达的增加： C-反应蛋白（CRP);和 人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例；或 其组合。
11. 权利要求9的方法，其中所述至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征还包含相对 于所述参照样本，以下表达的增加： 脂连蛋白； 性激素结合球蛋白（SHBG);或 其组合。
12. 权利要求10的方法，其中所述至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征还包含相对 于所述参照样本，C-反应蛋白（CRP)和人绒毛膜促性腺激素（hCG)与胎盘催乳素的比例的 表达的增加，以及相对于所述参照样本，脂连蛋白和性激素结合球蛋白（SHBG)的表达的降 低。
13. 权利要求12的方法，其中相对于所述参照样本的所述增加或降低为至少10%。 14?权力要求1的方法，其中： 如果确定所述测试样本的蛋白质组图谱包含至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特征， 则确定所述受试者具有妊娠期糖尿病；和 如果确定所述测试样本的蛋白质组图谱不包含至少一种妊娠期糖尿病特有的表达特 征，则确定所述受试者不具有妊娠期糖尿病。
15. 权利要求1的方法，其中所述参照样本是妊娠期糖尿病参照样本。
16. 权利要求5的方法，其中： 如果确定所述测试样本的蛋白质组图谱与所述参照样本共有至少一种妊娠期糖尿病 特有的表达特征，则确定所述受试者具有妊娠期糖尿病；和 如果确定所述测试样本的蛋白质组图谱不与所述参照样本共有至少一种妊娠期糖尿 病特有的表达特征，则确定所述受试者不具有妊娠期糖尿病。
17. 权利要求1的方法，其中所述测试样本包含全血、血清或唾液。
18. 权利要求1的方法，其中使用ELISA测定确定所述蛋白质图谱。
19. 权利要求1的方法，其中使用侧流装置确定所述蛋白质图谱。
20. 用于在受试者中筛查妊娠期糖尿病的试剂盒，所述试剂盒包括抗纤连蛋白-SNA抗 体或抗纤连蛋白抗体，和抗PSG-AAL抗体或抗PSG抗体。
21. 权利要求20的试剂盒，所述试剂盒还包括： 抗脂连蛋白抗体； 抗性激素结合球蛋白（SHBG)抗体； 抗C-反应蛋白（CRP)抗体； 抗人绒毛膜促性腺激素（hCG)抗体； 抗胎盘催乳素抗体；或 其组合。
22. 权利要求20的试剂盒，所述试剂盒还包括以下中的至少两种： 抗脂连蛋白抗体； 抗性激素结合球蛋白（SHBG)抗体； 抗C-反应蛋白（CRP)抗体； 抗人绒毛膜促性腺激素（hCG)抗体；和 抗胎盘催乳素抗体。
23. 权利要求20的试剂盒，所述试剂盒还包括以下中的至少三种： 脂连蛋白抗体； 抗性激素结合球蛋白（SHBG)抗体； 抗C-反应蛋白（CRP)抗体； 抗人绒毛膜促性腺激素（hCG)抗体；和 抗胎盘催乳素抗体。
24. 权利要求20的试剂盒，所述试剂盒还包括： 抗脂连蛋白抗体； 抗性激素结合球蛋白（SHBG)抗体； 抗C-反应蛋白（CRP)抗体； 抗人绒毛膜促性腺激素（hCG)抗体；和 抗胎盘催乳素抗体。
【文档编号】G01N33/68GK104380112SQ201380031224
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年3月11日 优先权日:2012年4月13日
【发明者】斯瑞尼瓦萨·R·纳加拉 申请人:迪亚贝托米克斯有限公司