一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a及其用途
【专利摘要】本发明涉及一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a及其用途，属于检验医学、临床医学、生物技术、生物化学及分子生物学领域；该miRNA序列为：miR-19a:UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA。本发明还同时公开了miR-19a的用途：制备用于筛查冠心病或辅助冠心病病理鉴定、生化检验和临床诊断的试剂产品。试剂产品包括引物系统和引物探针系统，其中引物系统由miR-19a的cDNA扩增引物组成，引物探针系统由miR-19a的cDNA扩增引物和探针组成；生物标志物miR-19a分子与冠心病的发生发展密切相关，利用miR-19a分子作为预测冠心病发生和判断冠心病发展程度的生物标志物，与目前常规的病理分型诊断冠心病发病和预后相比，可以更加个体化、准确地预测冠心病的早期发病情况和恶性程度。
【专利说明】-种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a及其用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a及其用途，具体涉及一 种冠心病的生物标志物-血清miR_19a分子及其在冠心病筛查与临床诊断中的应用，属 于检验医学、临床医学、生物技术、生物化学及分子生物学领域。
【背景技术】
[0002] 冠心病（CAD)在全世界范围内尤其是在一些发展中国家拥有较高的发病率和死亡 率。据WHO预测，直至2030年，每年将会有23, 600, 000人死于心血管疾病。冠心病病理 学过程复杂，通常被认为是遗传和环境因子共同作用的结果。在过去几十年中，很多因素， 如吸烟、高血压、糖尿病（DM)、动脉硬化、肥胖和节食等被证实与冠心病有关，但冠心病的具 体发病机理仍不清楚。越来越多的证据说明炎症在冠心病的发病过程中扮演着重要作用， 其发病具有明显的家族聚集性，大量的遗传易感基因在疾病的发生发展过程中起着重要作 用，所涉及的条件十分复杂，该疾病确切的发病机制至今仍不清楚，从而限制了冠心病诊治 有效易感基因的发掘。miRNA广泛介导基因的转录后调控，被证实在心血管疾病中充当多种 多样的角色，或可反映心脏和血管对损伤的易感性，及对持久心血管功能的依赖性等，而目 前的主要研究则集中于miRNA与心律失常、心肌肥厚、血管新生和心肌细胞凋亡等的关系， 对冠心病的系统作用机制还少见报道。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种检测冠心病的血清学生物标志物miR_19a，其miRNA序 列为： miR-19a:UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA； 本发明的另一个目的是上述冠心病检测的血清学生物标志物miR-19a的用途：作为 判断冠心病发生的生物标志物试剂的应用，包括制备用于筛查冠心病或辅助冠心病病理鉴 定、临床诊断和生化检验的试剂盒；所述试剂盒包括引物系统/引物探针系统： 所述引物系统由miR-19a的cDNA扩增引物和锚定引物组成； 所述引物探针系统有miR-19a的cDNA扩增引物和探针组成； 检测该标志物的技术为反转录-荧光定量PCR技术，所述荧光定量PCR为DNA染料法 或TaqMan探针法；miR_19a的cDNA扩增引物为： AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA； mR-19a的探针由以下核苷酸序列组成： (6-FAM)AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA(MGB)； 在荧光定量PCR检测方法中，使用保守性miRNA的miR-19a作为内参照基因，其cDNA扩增引物和探针为： 引物:AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA 探针：（6-FAM)A⑶UUUGCAUA⑶UGCACUACA(MGB)。
[0004] 本发明涉及生物标志物miR-19a分子与冠心病的发生发展密切相关，利用 miR-19a分子作为预测冠心病发生和判断冠心病发展程度的生物标志物，与目前常规的病 理分型诊断冠心病发病和预后相比，可以更加个体化、准确地预测冠心病的早期发病情况 和恶性程度。
【专利附图】
【附图说明】
[0005] 图1 :冠心病组与对照组（Non-CAD)血清miR-19a水平比较（#妒〈0· 0001); 图2 :血清miR-19a的ROC曲线。
【具体实施方式】
[0006] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，例如《分子克隆》（NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress, 1989)中所述 的条件，或按照制造厂商所建议的条件。 实施例1 受试群体 受试对象来自医院诊治的患者。冠心病患者入选标准：既往有心肌梗死病史，或者冠状 动脉造影检查至少有一支冠状动脉狭窄> 50% ;年龄大于18岁且小于80岁。排除标准：静 息时有心绞痛；合并严重心力衰竭患者（EF〈 35%);合并严重瓣膜疾病或心肌病患者。一 共选取冠心病组180例，非冠心病组169例，所有受试对象均签署知情同意书。
[0007] 表1病例基本信息表
【权利要求】
1. 一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a，其特征在于：其RNA序列为： miR-19a: UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA 〇
2. 权利要求1所述的检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a的用途，其特征在于： 作为判断冠心病发生的生物标志物试剂的应用，包括制备用于筛查冠心病或辅助冠心病病 理鉴定、临床诊断和生化检验的试剂盒。
3. 根据权利要求2所述的检测冠心病的血清学生物标志物的用途，其特征在于：所述 试剂盒包括引物系统、引物探针系统； 所述引物系统由miR-19a的cDNA扩增引物和锚定引物组成； 所述引物探针系统由miR-19a的cDNA扩增引物和探针组成。
4. 根据权利要求3所述的检测冠心病的血清学生物标志物的用途，其特征在于：所述 试剂盒检测该标志物的技术为反转录-荧光定量PCR技术。
5. 根据权利要求4所述的检测冠心病的血清学生物标志物的用途，其特征在于：所述 荧光定量PCR为DNA染料法或TaqMan探针法。
6. 根据权利要求3所述的检测冠心病的血清学生物标志物的用途，其特征在于： miR-19a的cDNA扩增引物为： AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA 〇
7. 根据权利要求3所述的检测冠心病的血清学生物标志物的用途，其特征在于： miR-19a的探针由以下核苷酸序列组成： (6-FAM) AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA(MGB)〇
8. 根据权利要求5所述的血清学生物标志物的用途，其特征在于：在荧光定量PCR检 测方法中，使用保守性miRNA的miR-19a作为内参照基因，其cDNA扩增引物和探针为： 引物:AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA 探针：（6-FAM) A⑶UUUGCAUA⑶UGCACUACA (MGB)。
【文档编号】C12N15/113GK104278105SQ201410622200
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】雷桅, 陈灿, 税晓容 申请人:雷桅