本发明涉及食品领域。具体地，本发明涉及牛奶中舒巴坦的检测方法。
背景技术：
：随着奶牛饲养业的发展，抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛的应用。然而，奶牛体内的抗生素会随着乳腺流入牛乳中，牛乳中残留的抗生素会对人体健康造成不利影响。因而，目前我国对牛乳中的抗生素残留限量作了明确规定。但是，有些不良商家利用β-内酰胺酶能够分解抗生素的特征，向牛奶中加入β-内酰胺酶，以掩盖和纵容抗生素的滥用，此外，食用含有β-内酰胺酶的牛奶后，会使人摄入的抗生素的药效降低，无法实现治疗疾病的效果。因此，卫生部公布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》中明确提到了β-内酰胺酶。然而，目前对牛乳中抗生素及β-内酰胺酶的检测方法仍有待研究。技术实现要素：本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：发明人在对已检测出不含β-内酰胺酶的牛奶进行检测时意外地发现，该牛奶并非不含β-内酰胺酶，而是β-内酰胺酶被名为“舒巴坦”的β-内酰胺酶抑制剂抑制了酶活，进而无法被检出。有鉴于此，发明人深入研究发现，基于现有的测定抗生素的方法，可以通过测定牛奶中是否存在抗生素，从而能够推断出是否存在β-内酰胺酶，进一步可以推测是否存在舒巴坦药物。为此，本发明提出了一种牛奶中舒巴坦的检测方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)分别对抗生素阳性对照组、β-内酰胺酶阳性对照组及样品组中的抗生素进行检测，其中，所述抗生素阳性对照组是通过将不含抗生素、β-内酰胺酶及舒巴坦的牛奶与抗生素进行混合所得到的；所述β-内酰胺酶阳性对照组是通过将不含抗生素、β-内酰胺酶及舒巴坦的牛奶、抗生素及β-内酰胺酶进行混合所得到的；所述样品组是将待测牛奶、抗生素及β-内酰胺酶进行混合所得到的；(2)基于下列标准，对所述待测牛奶中舒巴坦进行定性判定：1)所述抗生素阳性对照组中检出抗生素、所述β-内酰胺酶阳性对照组中未检出抗生素且所述样品组中检出抗生素，则所述待测牛奶中含有舒巴坦；2)所述抗生素阳性对照组中检出抗生素、所述β-内酰胺酶阳性对照组中未检出抗生素且所述样品组中未检出抗生素，则所述待测牛奶中不含有舒巴坦；3)所述抗生素阳性对照组中未检出抗生素，则检测结果无效；以及4)所述抗生素阳性对照组中检出抗生素且所述β-内酰胺酶阳性对照组中检测出抗生素，则检测结果无效。由此，根据本发明的牛奶中舒巴坦的检测方法能够准确地检测出牛奶中是否存在舒巴坦，且操作简便。发明人发现，舒巴坦能够抑制β-内酰胺酶活性且β-内酰胺酶能够分解抗生素，通过向待测牛奶中加入抗生素和β-内酰胺酶，然后对抗生素进行检测，进而反向推断出牛奶中是否存在舒巴坦。具体地，若未检测出牛奶中存在抗生素，则说明牛奶中存在β-内酰胺酶，进而表明牛奶中不含舒巴坦。反之，若检测出牛奶中存在抗生素，则说明牛奶中不含β-内酰胺酶，进而表明牛奶中存在舒巴坦。进一步地，发明人发现，为了验证加入的抗生素和β-内酰胺酶均有活性(药效)，需要以仅含抗生素以及同时含有抗生素和β-内酰胺酶作为对照组，对抗生素进行测定。具体地，向已知不含抗生素、β-内酰胺酶以及舒巴坦的牛奶中添加抗生素，作为抗生素阳性对照组，向已知不含抗生素、β-内酰胺酶以及舒巴坦的牛奶中添加抗生素及β-内酰胺酶，作为β-内酰胺酶阳性对照组，分别测定两种对照组中是否存在抗生素。若检测出抗生素阳性对照组中存在抗生素，则证明抗生素药效正常，实验结果有效，反之则无药效，实验结果无效。若测定出β-内酰胺酶阳性对照组中存在抗生素，且测定出抗生素阳性对照组中存在抗生素，则证明β-内酰胺酶失活，反之，若检测出β-内酰胺酶阳性对照组中无抗生素，且检测出抗生素阳性对照组中存在抗生素，则β-内酰胺酶活性正常。由此，能够保证检测结果的准确性。需要说明的是，对抗生素检测的方法不作严格限定，只要能够有效地检测抗生素是否存在即可。具体地，可以采用试剂盒或抑菌圈等方法对抗生素进行检测。在实际检测过程中，可以根据需要确定抗生素阳性对照组、β-内酰胺酶阳性对照组及样品组中混合的抗生素浓度，本申请不作严格限定，只要浓度足以达到已知检测抗生素方法的检出限即可。根据本发明的具体实施例，所述混合所得到的混合液中抗生素的终浓度为4～6μg/L。若浓度过高，容易导致β-内酰胺酶无法完全对其进行分解，从而出现舒巴坦假阳性。还需要说明的是，本发明对抗生素的种类不作严格限定，只要能够被β-内酰胺酶分解即可。根据本发明的实施例，所述抗生素包括青霉素、青霉素钠、氨苄西林。在实际检测过程中，可以根据需要确定β-内酰胺酶阳性对照组及样品组中混合的β-内酰胺酶浓度，本申请不作严格限定。根据本发明的具体实施例，在所述β-内酰胺酶阳性对照组及样品组中，所述混合所得到的混合液中β-内酰胺酶的终浓度为3～4U/mL。若浓度过高，容易导致待测牛奶中的舒巴坦无法完全抑制其活性，从而出现舒巴坦假阴性。需要说明的是，针对β-内酰胺酶阳性对照组和样品组中，混合液中抗生素的终浓度是指存在于混合液中，且未开始被β-内酰胺酶分解的抗生素的浓度，若待测牛奶中含有抗生素，则终浓度不含该部分抗生素。同理地，对于β-内酰胺酶的终浓度的解释，在此不再赘述。根据本发明的实施例，在所述抗生素阳性对照组和β-内酰胺酶阳性对照组中，所述牛奶为纯牛奶或复原乳，优选复原乳。根据本发明的优选实施例，所述复原乳是通过将恒天然奶粉溶解于水中所得到的。发明人意外地发现，新西兰恒天然公司生产的奶粉杂质较少，干扰较低。根据本发明的实施例，检出限为5mg/L。发明人发现，舒巴坦最低检测浓度(即检出限)为5mg/mL，低于检出限时，无法完全抑制β-内酰胺酶的活性，从而为舒巴坦假阴性。另外，本发明提出了另一种牛奶中舒巴坦的检测方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：取1mL不含抗生素、β-内酰胺酶及舒巴坦的复原乳，加入1mg/L青霉素钠溶液6μL，使青霉素钠终浓度为6μg/L，混匀，作为抗生素阳性对照组；取1mL不含抗生素、β-内酰胺酶及舒巴坦的复原乳，分别加入青霉素钠溶液和β-内酰胺酶标准品溶液，使青霉素钠终浓度为6μg/L，β-内酰胺酶终浓度为4U/mL，作为β-内酰胺酶阳性对照组；取1mL待测牛奶，分别加入青霉素钠溶液和β-内酰胺酶标准品溶液，使青霉素钠终浓度为6μg/L，β-内酰胺酶终浓度为4U/mL，作为样品组；分别将所述抗生素阳性对照组、β-内酰胺酶阳性对照组及样品组置于40℃±1℃水浴箱中孵育1小时20分钟；利用抗生素检测试剂盒分别对孵育后的所述抗生素阳性对照组、β-内酰胺酶阳性对照组及样品组中的抗生素进行检测，基于下列标准，对所述待测牛奶中舒巴坦进行定性判定：所述抗生素阳性对照组中检出抗生素、所述β-内酰胺酶阳性对照组中未检出抗生素且所述样品组中检出抗生素，则所述待测牛奶中含有舒巴坦；所述抗生素阳性对照组中检出抗生素、所述β-内酰胺酶阳性对照组中未检出抗生素且所述样品组中未检出抗生素，则所述待测牛奶中不含有舒巴坦；所述抗生素阳性对照组中未检出抗生素，则检测结果无效；以及所述抗生素阳性对照组中检出抗生素且所述β-内酰胺酶阳性对照组中检测出抗生素，则检测结果无效。由此，根据本发明的牛奶中舒巴坦的检测方法能够准确地检测出牛奶中是否存在舒巴坦，且操作简便。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例1在该实施例中，按照下列方法对牛奶中舒巴坦进行检测：1、试剂及溶液西班牙ECLIPSE50(简称E50)抗生素检测试剂盒，青霉素钠标准品，β-内酰胺酶标准品(中国药品生物制品检定所生产，浓度为446万U/mL)，舒巴坦标准品，复原乳：通过将恒天然奶粉溶解于水中所得到的，不含抗生素、β-内酰胺酶及舒巴坦。2、设备仪器漩涡混合仪，恒温水浴箱(40℃±1℃)，抗生素检测所需的孵育器(65℃±1℃)，移液器(10uL、100uL和1mL)，离心管(1.5mL、2mL和15mL)。3、操作步骤(1)取1mL复原乳，加入1mg/L青霉素钠溶液6μL，终浓度为6μg/L，漩涡混匀，作为抗生素阳性对照组；(2)取1mL复原乳，分别加入青霉素钠溶液和β-内酰胺酶标准品溶液，使青霉素钠终浓度为6μg/L，β-内酰胺酶终浓度为4U/mL，作为β-内酰胺酶阳性对照组；(3)取1mL待检牛奶，分别加入青霉素钠溶液和β-内酰胺酶标准品溶液，使青霉素钠终浓度为6μg/L，β-内酰胺酶终浓度为4U/mL，作为样品组；(4)分别将抗生素阳性对照组、β-内酰胺酶阳性对照组及样品组置于40℃±1℃水浴箱中孵育1小时20分钟；(5)用E50抗生素检测试剂盒检测孵育后的抗生素阳性对照组、β-内酰胺酶阳性对照组及样品组中的是否存在抗生素。要求抗生素阳性对照组的抗生素结果为阳性，β-内酰胺酶阳性对照组的抗生素检测结果为阴性以证明所加入的青霉素钠及β-内酰胺酶有效，否则必须重做。表1给出了E50结果判断表。其中紫色代表抗生素检测结果阳性，黄色代表抗生素检测结果阴性。可以看出，利用该方法能够有效地确定待测牛奶中是否含有舒巴坦。表1E50结果判断表检测样品E50抗生素结果β-内酰胺酶结果舒巴坦结果抗生素阳性对照组紫色阳性(+)阴性(-)/β-内酰胺酶阳性对照组黄色阴性(-)阳性(+)/待检样黄色阴性(-)阳性(+)阴性(-)待检样紫色阳性(+)阴性(-)阳性(+)注：阴性表示不存在或浓度低于方法检出限，阳性表示存在且浓度不低于方法检出限。实施例2准确性检测具体操作：(1)取三份新西兰复原乳，分别加入1mg/L、5mg/L及10mg/L舒巴坦，得到加标样品1、加标样品2和加标样品3，取两份复原乳，分别加入10mg/L及100mg/L舒巴坦，得到加标样品4和加标样品5；(2)分别按照实施例1的方法对复原乳及加标样品1～3中舒巴坦进行2次平行检测；(3)分别按照实施例1的方法对加标样品4和5中舒巴坦进行2次平行检测，区别在于，不含步骤(1)～(3)，直接将加标样品4和5进行孵育处理。结果如表2所示。由加标样品1～3可以看出，当舒巴坦浓度为1mg/L时，β-内酰胺酶并未完全被抑制，结果出现假阴性，舒巴坦未被检出。当舒巴坦浓度为5mg/L时，能够抑制β-内酰胺酶活性，进而能够检出舒巴坦。由此，本发明方法的舒巴坦检出限为5mg/L。由加标样品4和5可以看出，分别向牛奶样本中单独加入舒巴坦标准品10mg/L、100mg/L，抗生素检测结果为阴性，说明所添加的舒巴坦浓度并不能导致试剂显示阳性，证明舒巴坦是因为抑制了β-内酰胺酶的活性而使得试剂显示阳性，进而表明检测结果的准确性。表2准确性验证实施例3稳定性验证具体步骤：(1)选取20个不同批次的不含舒巴坦的牛奶样品，向10个不同批次的牛奶中各加入10mg/L的舒巴坦，记作样品1～10；另外10个不同批次的牛奶不添加舒巴坦，记作样品11～20；(2)按照实施例1的方法分别对样品1～20中舒巴坦进行检测。结果如表3所示。可以看出，本发明的方法能够准确地检测出舒巴坦是否存在，且稳定性较好。表3稳定性验证下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页1 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