本发明属于食品检测领域，主要涉及混合体系中维生素B2与维生素B6两者浓度的检测。
背景技术：
：混合体系下的维生素B2与维生素B6含量的检测一般采用HPLC法，原因在于该方法能较好地实现混合体系中维生素B2与维生素B6的分离并进行检测。但该法所需的试剂需严格纯化，分析时间较长，检测成本较高。另一种办法是利用三维荧光法进行检测定量。由于维生素B2是维生素B6的淬灭剂，使用三维荧光法也只能检测浓度上限为2μg/ml的维生素B2与维生素B6的混合溶液，而且使用三维荧光法分析时间也比较长。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种同时检测混合溶液中维生素B2与维生素B6的浓度的方法，可以快速方便地同时检测出混合体系中维生素B2与维生素B6的浓度。本发明的方法具体步骤如下：(1)初始数据的获得。通过配制已知不同浓度的维生素B2与维生素B6溶液，分别检测Ex/Em为300/400nm和Ex/Em为480/530nm的荧光强度，获得维生素B2的浓度和维生素B6表观浓度。(2)数学模型的建立。在步骤(1)获得的数据基础上，构建维生素B2的浓度、维生素B6表观浓度与维生素B6的实际浓度关系的数学模型如下：Z＝(0.9660711482289855+0.02366274483059536X-0.001472770740368755X2+4.066637989041135*10-5X3)*Y其中，X为混合溶液中维生素B2浓度，Y为混合溶液中维生素B6表观浓度，Z为维生素B6的实际浓度。对该数学模型进行检验并计算其误差。(3)混合样品中维生素B2与维生素B6浓度的测定。分别检测样品Ex/Em为300/400nm和Ex/Em为480/530nm的荧光强度，获得维生素B2的浓度和维生素B6表观浓度，计算得到维生素B6的实际浓度。本发明采用荧光分光光度法检测较高浓度的维生素B2与维生素B6混合液，探索出不同浓度下的维生素B2对维生素B6的淬灭效率的影响规律，能够准确并快速地实现混合体系下维生素B2与维生素B6的浓度检测。附图说明图1不同浓度的维生素B2与其对维生素B6的淬灭率k的影响。具体实施方式本发明将通过以下实施例进一步说明。1.初始数据的获得。如表1，配制不同浓度的维生素B2与维生素B6混合液，分别在Ex/Em为480/530nm和Ex/Em为300/400nm下检测荧光强度。由在Ex/Em为480/530nm条件下检测的维生素B2标准曲线计算出维生素B2(X)的浓度。由在Ex/Em为300/400nm条件下检测的维生素B6标准曲线计算出维生素B6的表观浓度(Y)。加入等体积的水作为对照，在Ex/Em为300/400nm条件检测的维生素B6标准曲线计算出维生素B6的实际浓度(Z)。表1不同浓度的维生素B2(X)，维生素B6表观浓度(Y)与实际浓度(Z)(单位为μg/ml)XYZXYZXYZ2.01.7561.7677.516.30817.28815.011.03412.6642.04.9314.8547.518.00719.68215.013.56115.2922.07.5267.54210.01.4151.54915.015.63117.2902.010.24210.27410.04.5134.95415.017.46619.7462.012.36712.70710.07.0157.67517.51.6081.8452.015.09815.39010.09.44110.31517.54.2544.8282.017.46217.34310.011.60012.71717.56.5677.4992.019.47019.62210.013.97215.37617.58.84110.2725.01.7131.76710.016.05417.48317.510.88912.6985.04.7564.85410.017.76119.43017.513.29015.2845.07.2747.54212.51.3271.54917.515.46617.3965.09.88510.27412.54.2674.95417.517.04319.6765.011.99012.70712.56.7367.67520.01.5491.8455.014.32015.39012.58.72810.31520.04.0674.8285.016.74317.34312.511.39912.71720.06.1787.4995.018.52819.62212.513.67015.37620.08.84810.2727.51.6601.80012.516.07017.48320.010.67812.6987.54.6154.82612.517.67419.43020.013.02915.2847.57.1567.51415.01.6351.82420.015.04617.3967.59.51610.31715.04.3104.80220.016.60719.6767.511.67112.71415.06.7517.5617.514.19215.35915.09.01510.3192.数学模型的建立第一步：设Z为维生素B6的实际浓度，Y为不同浓度维生素B2时存在时维生素B6的表观浓度，X为维生素B2的浓度。在维生素B2(X)一定时，Z＝kY。结果见表2。表2不同浓度的维生素B2下Z＝kY的关系XZ＝kYR22Z＝1.0077Y0.99945Z＝1.0527Y0.99917.5Z＝1.0789Y0.999110Z＝1.0942Y0.999412.5Z＝1.1123Y0.997515Z＝1.1265Y0.999317.5Z＝1.1474Y0.999320Z＝1.1754Y0.9992第二步：使用SPSS不同浓度的维生素B2(X)与其对应的k作比曲线估计，得到k＝f(X)的关系如下，曲线图见图1。k＝0.9660711482289855+0.02366274483059536X-0.001472770740368755X2+4.066637989041135*10-5X3(R2＝0.999)。最终得到的拟合方程为：Z＝(0.9660711482289855+0.02366274483059536X-0.001472770740368755X2+4.066637989041135*10-5X3)*Y其中，X为混合溶液中维生素B2浓度，Y为混合溶液中维生素B6表观浓度，Z为维生素B6的实际浓度。第三步，使用已建立的数学模型对初始数据进行检验并计算模型误差。结果见表3。表3数学模型对初始数据的检验结果结果显示，经过此模型预测出的实际维生素B6的含量与真实值误差均在5％之内，达到预期目标。第四步，使用已建立的数学模型对其他不同浓度的维生素B2与维生素B6进行检验并计算模型误差。结果见表4。表4数学模型对其他数据的检验结果结果表明，该模型对其他不同浓度的维生素B2与维生素B6的检验结果误差也都在5％之内。整个验证结果表明该模型准确度较高，能够很好地对不同浓度的维生素B2与维生素B6混合时进行检测。3.混合样品中维生素B2与维生素B6浓度的测定使用该数学模型对实际应用过程如下，首先在上述检测波长条件下检测出维生素B2的浓度(X)与维生素B6的表观浓度(Y)。再通过已建立的数学模型对X,Y进行运算，得到Z值。则X和Z即为混合溶液下维生素B2与维生素B6的浓度。实例见表5。表5混合溶液下维生素B2与维生素B6的检测实例XY计算值Z3.6258.4028.6933.62512.41112.8417.3557.9398.5527.35511.86712.78410.0287.7558.50510.02811.66012.78815.4717.6048.59515.47111.26212.729当前第1页1 2 3